抗体/T细胞受体嵌合构建体及其用途制造技术

本申请提供抗体

【技术实现步骤摘要】
抗体/T细胞受体嵌合构建体及其用途
[0001]本申请是申请号为201680023511.2(申请日：2016年10月21日，专利技术名称：抗体/T细胞受体嵌合构建体及其用途)的中国申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请主张2015年10月23日申请的美国临时申请第62/245,944号、2016年3月7日申请的美国临时申请第62/304,918号、2016年6月3日申请的美国临时申请第62/345,649号及2016年8月1日申请的美国临时申请第62/369,694号的优先权，这些申请都以全文引用的方式并入本文中。


[0004]本专利技术涉及抗体/T细胞受体嵌合构建体及其用途，包括治疗及诊断疾病。
[0005]以ASCII文本档案形式提交序列表
[0006]以ASCII文本档案提交的以下内容以全文引用的方式并入本文中：电脑可读形式(CRF)的序列表(档案名称：750042000340SEQLIST.txt，记录日期：2016年10月20日，大小：104KB)。

技术介绍

[0007]T细胞介导免疫为发展出抗原(Ag)
‑
特异性T淋巴细胞来消除病毒、细菌、寄生虫感染或恶性细胞的适应性过程。其也可涉及自体抗原的异常识别，导致自体免疫性炎症疾病。T淋巴细胞的Ag特异性是基于T细胞受体(TCR)对由主要组织相容性复合体(MHC)分子于Ag递呈细胞(APC)上递呈的独特抗原肽的识别(Broere等人，Principles of Immunopharmacology,2011)。由于在胸腺中成熟后的发育选择，各T淋巴细胞于细胞表面上表达独特的TCR。TCR以两种形式存在：αβ杂二聚体或γδ杂二聚体。T细胞于细胞表面上表达αβ形式或γδ形式的TCR。四条链α/β/γ/δ都具有由高度多态的“免疫球蛋白可变区”样N端域及“免疫球蛋白恒定区”样第二域组成的特征性细胞外结构。这些域各自具有特征性域内二硫桥。恒定区最靠近细胞膜，其后为连接肽、跨膜区及短胞质尾。杂二聚TCR的2条链之间的共价键是由位于短连接肽序列内的半胱氨酸残基形成，该短连接肽序列桥接细胞外恒定域与跨膜区，该半胱氨酸残基与所配对的TCR链半胱氨酸残基在对应位置形成二硫键(The T cell Receptor Factsbook,2001)。
[0008]αβ及γδTCR与非多态膜结合CD3蛋白质结合以形成功能性八聚TCR
‑
CD3复合体，由TCR杂二聚体及三个二聚信号传导模块CD3δ/ε、CD3γ/ε及CD3ζ/ζ或ζ/η组成。各亚单元的跨膜域中的可电离残基形成将复合体固定在一起的极性相互作用网。关于T细胞活化，TCR的N端可变区识别于靶细胞表面上递呈的肽/MHC复合体，而CD3蛋白质则参与信号转导(Call等人，Cell.111(7):967
‑
79,2002；The T cell Receptor Factsbook,2001)。
[0009]αβTCR也称作常规TCR，于大部分淋巴细胞上表达且由糖基化多态α及β链组成。不同的αβTCR可区分嵌入于尺寸及形状相对恒定的MHCII(大部分表达于APC细胞表面上)及MHCI(于所有有核细胞上表达)分子的表面中的不同肽。γδTCR尽管在结构上类似于αβTCR，
但以与MHC递呈无关的方式识别携带糖、核苷酸或磷光体的抗原(The T cell Receptor Factsbook,2001；Girardi等人，J.Invest.Dermatol.126(1):25
‑
31,2006；Hayes等人，Immunity.16(6):827
‑
38,2002)。
[0010]细胞表面蛋白质仅构成细胞蛋白质的一小部分且这些蛋白质的大部分并非肿瘤特异性的。相比之下，突变的或致癌肿瘤相关的蛋白质通常位于细胞内、为细胞核的、细胞质的或分泌性的。大部分细胞内蛋白质作为蛋白质分解代解及MHC分子递呈的正常过程的一部分而暴露于细胞表面上。细胞内蛋白质通常通过蛋白酶体或内体/溶酶体降解，且所得特异性肽片段结合至MHCI类/II类分子。这些肽/MHC复合体呈现于细胞表面，其中其经由肽/MHC TCR相互作用提供T细胞识别标靶(Scheinberg等人，Oncotarget.4(5):647
‑
8,2013；Cheever等人，Clin.Cancer Res.15(17):5323
‑
37,2009)。
[0011]在过去的二十年里，在免疫学及肿瘤生物学方面的根本性进展以及大量肿瘤抗原的鉴别促成了基于细胞的免疫疗法领域的显著进展。在基于细胞的免疫疗法领域中，T细胞疗法占据重要位置，其目标为通过将自体性及离体扩增的T细胞转移给患者来治疗癌症，且已产生了一些值得注意的抗肿瘤响应(Blattman等人，Science.305(5681):200
‑
5,2004)。举例而言，在黑素瘤患者中，包括庞大的侵袭性肿瘤，在多个部位施用天然产生的经离体扩增的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)可介导在50
‑
70％范围内的客观响应率(Rosenberg等人，Nat.Rev.Cancer.8(4):299
‑
308,2008；Dudley ME等人，J.Clin.Oncol.23(10):2346
‑
57,2005)。
[0012]TIL疗法的普遍应用的主要限制为难以产生具有抗肿瘤潜力的人类T细胞。作为替代方法，可经由T细胞工程化将外源性高亲和力TCR引入患者的正常自体性T细胞中。这些细胞至淋巴缺乏患者中的授受性转移已显示可介导例如黑素瘤、结肠直肠癌及滑膜肉瘤的癌症的癌症消退(Kunert R等人，Front.Immunol.4:363,2013)。最新的I期临床试验使用针对滑膜肉瘤的抗NY
‑
ESO
‑
1TCR，报导66％的整体响应率且在一名接受T细胞疗法的患者中达成完全响应(Robbins PF等人，Clin.Cancer Res.21(5):1019
‑
27,2015)。
[0013]TCR工程化T细胞疗法的优点之一为其可靶向潜在细胞内肿瘤特异性蛋白质的整个阵列，其经由MHC递呈经处理及传递至细胞表面。另外，TCR为高度敏感的且可仅由一些抗原肽/MHC分子活化，其又可触发细胞溶解性T细胞响应，包括细胞因子分泌、T细胞增殖及限定靶细胞的细胞溶解。因此，相比于抗体或小分子疗法，经TCR工程化的T细胞因为其以细胞内靶抗原的极少拷贝杀伤靶细胞的能力而特别有价值(Kunert R等人，Front.Immunol.4:363,2013)。
[0014]然而，不同于治疗性抗体，其多半经由杂交瘤或呈现技术发现，标靶特异性TCR的鉴别要求自患者T细胞建立靶肽/MHC特异性TCR克隆且筛选出具有最佳靶抗原结合亲和力的正确α
‑
β链组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合至靶抗原的抗体
‑
T细胞受体(TCR)嵌合分子(abTCR)，其包含：a)第一多肽链，其包含第一抗原结合域及第一T细胞受体域(TCRD)，所述第一抗原结合域包含V
H
及C
H
1抗体域，所述第一TCRD包含第一TCR亚单元的第一跨膜域；及b)第二多肽链，其包含第二抗原结合域及第二TCRD，所述第二抗原结合域包含V
L
及C
L
抗体域，所述第二TCRD包含第二TCR亚单元的第二跨膜域，其中所述第一抗原结合域的所述V
H
及所述C
H
1域与所述第二抗原结合域的所述V
L
及所述C
L
域形成特异性结合至所述靶抗原的抗原结合模块，且其中所述第一TCRD与所述第二TCRD形成能够招募至少一个TCR相关信号传导模块的T细胞受体模块(TCRM)。2.权利要求1的abTCR，其中所述抗原结合模块包含在所述C
H
1域中的残基与所述C
L
域中的残基之间的二硫键。3.权利要求1或2的abTCR，其中所述第一多肽链进一步包含在所述第一抗原结合域与所述第一TCRD之间的第一肽接头。4.权利要求1至3中任一项的abTCR，其中所述第二多肽链进一步包含在所述第...

【专利技术属性】
技术研发人员：路经伟，杨智源，刘诚，刘宏，许奕阳，言甦，V，
申请(专利权)人：优瑞科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：