与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及单克隆抗体的技术领域。该与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段具有分别如Seq_1～3所示，或分别如Seq_11～13所示的轻链CDR；和/或，分别如Seq_4～6所示，或分别如Seq_14～16所示的重链CDR。该与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段具有特异性好、亲和力高等特点，缓解了现有技术中与IMP酶结合的单克隆抗体效果不佳的技术问题。单克隆抗体效果不佳的技术问题。单克隆抗体效果不佳的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其是涉及一种与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0002]根据碳青霉烯酶活性位点结构与功能基团差异，可将其分为金属β
‑
内酰胺酶(MBLs或B类酶)和基于丝氨酸的碳青霉烯酶(A和D类酶)两类。IMP(metallo
‑
β
‑
lactamases resistant to imipenem)酶是首个在革兰氏阴性菌中检测到的获得性金属酶，可以水解青霉素类、碳青霉烯类以及头孢菌素类药物，但不能水解氨曲南。目前在全球范围已经有52种IMP亚型在临床分离的革兰氏阴性菌中检测到，如假单胞菌属，不动杆菌属以及肠杆菌科细菌。
[0003]IMP
‑
1被认为是首个在革兰氏阴性菌中检测到的耐碳青霉烯类抗生素且由质粒编码的可移动性MBL。IMP
‑
1被发现于1988年在日本分离的铜绿假单胞菌中。此后，blaIMP
‑
1又在日本的粘质沙雷菌中被分离出来。目前已在超过15个国家或地区的革兰阴性菌中检测到blaIMP
‑
1。IMP
‑
2于1997年在意大利的一株鲍曼不动杆菌中首次被发现，随后也在日本的一株鲍曼不动杆菌和另外四种革兰氏阴性菌中检测到。在我国，IMP
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1、IMP
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4、IMP
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8和IMP
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9是常见的几类碳青霉烯酶。1998我国首次在香港报道检出IMP型金属酶即是IMP
‑
4，随后不久，我国台湾从1株多药耐药肺炎克雷伯菌中分离到IMP
‑
8，2007年，我国在浙江省医院的一株阴沟肠杆菌中首次检出IMP
‑
1。
[0004]大多IMP酶介导的氨基酸序列包含246个残基，IMP
‑
9、IMP
‑
11、IMP
‑
21的序列由245个残基构成。某些blaIMP基因的等位基因是单点或双点突变体，例如IMP
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10与IMP
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1的不同主要是由单个碱基导致氨基酸的改变，IMP
‑
3与IMP
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1相比有2个氨基酸不同，其中196位氨基酸由丝氨酸(Ser)残基转变为甘氨酸(Gly)残基，导致IMP
‑
3不能水解青霉素、氨苄西林、头孢他啶和亚胺培南；还有某些等位基因彼此相对分散，IMP
‑
9和IMP
‑
18是相对最远的IMP变体，有53个不同的氨基酸残基。IMP酶具备典型的金属酶特征，即对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类具有不同程度的水解活性，但几乎不水解氨曲南，也不被β
‑
内酰胺酶抑制剂抑制。
[0005]美国临床实验室标准化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推荐改良霍奇试验作为肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的表型确证试验。将大肠埃希菌(ATCC25922)涂到MH琼脂平板上形成菌苔(0.5麦氏浊度1:10稀释)，然后将厄他培南或美罗培南纸片放在中心，将待测分离菌从纸片的边缘划线到平板的边缘，过夜培养，若出现苜蕾叶状抑菌环为碳青霉烯酶表型阳性。但用此方法进行IMP酶检测，其敏感性和特异性还有待于进一步研究和评定。近年来，有学者根据部分碳青霉烯酶可被金属离子整合剂抑制的特点发展了1种可常规检测其耐药表型的方法，文献报道的主要有纸片扩散法、EPI微量稀释法和浓度梯度(E
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test法)，以肉眼观察结果，其敏感性和特异性会受到主观因素、待测菌的产酶能力等方面的影响，存在误读、漏读的可能，用时较长。Carba NP试验对大
多数酶有很好的敏感性，CIM是实验室常用于检测IMP酶的方法，该方法具有较好的敏感性和特异性，但会受到细菌产酶能力的影响。
[0006]随着分子生物学的发展尤其是聚合酶链反应技术的问世，从基因水平进行检测和分析IMP酶，不仅可以准确、快速检出IMP酶基因，还可以对耐药基因进行定位，这有利于对产IMP酶细菌的耐药机制以及流行病学研究，目前认为分子生物学技术是检测耐药基因型的金标准。但是随着IMP酶新型别的不断发现，需要设计更多IMP酶基因的特异性引物，仅利用当前设计的引物有可能对新型IMP酶基因漏检，并且存在周期长、试验用具、设备等硬件要求高等诸多因素，导致该技术无法大范围地应用到基层医院，操作难度较高，步骤繁琐，部分试验对操作人员有专业要求，多由专业平台或实验室进行，部分试验要求操作人员进行专业课程的学习，单个检测成本较高。
[0007]单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，耐药性以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体免疫学检测具有以下优点：特异性高，使用特异的单克隆抗体，可用于单一细胞因子的检测；操作简便、快速，无需依赖细胞株，故不需维持培养，可操作性增加，容易推广和便于普查；影响因素相对较少且容易控制，重复性好，方法容易标准化。
[0008]CN112501131A公开了抗IMP酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，所述单克隆抗体具有纯度效价高、特异性强的特点，适合作为免疫诊断试剂用于体外诊断IMP酶。但是上述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，尽管鼠源单克隆抗体属于使用最广泛的抗体，但仍然存在亲和力弱、特异性差的问题，因此，提供一种改进的IMP酶抗体是目前市场需要的。
[0009]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0010]本专利技术的第一目的在于提供一种与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段，以缓解现有技术中与IMP酶结合的单克隆抗体效果不佳的技术问题。
[0011]本专利技术的第二目的在于提供一种与上述IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段相关的生物材料、试剂、试剂盒以及它们的应用，以改善现有的对IMP的检测方法。
[0012]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0013]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段，包含轻链可变区和/或重链可变区；
[0014]所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与IMP酶结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含轻链可变区和/或重链可变区；所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；或者，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_11、Seq_12和Seq_13所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_4、Seq_5和Seq_6所示；或者，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_14、Seq_15和Seq_16所示。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如Seq_7或Seq_17所示；优选地，所述轻链可变区的N端还含有信号肽；优选地，轻链可变区的信号肽的氨基酸序列如Seq_21所示。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如Seq_9或Seq_19所示；优选地，所述重链可变区的N端还含有信号肽；优选地，重链可变区的信号肽的氨基酸序列如Seq_22所示。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含轻链可变区和重链可变区；所述抗体或其抗原结合片段选自(A)或(B)：(A)、所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_4、Seq_5和Seq_6所示；(B)、所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_11、Seq_12和Seq_13所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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【专利技术属性】
技术研发人员：彭憬，刘春龙，付成华，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜湖南生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：