与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及单克隆抗体的技术领域。该与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段具有分别如Seq_1～3所示，或分别如Seq_11～13所示的轻链CDR；和/或，分别如Seq_4～6所示，或分别如Seq_14～16所示的重链CDR。该与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段具有特异性好、亲和力高等特点，缓解了现有技术中与KPC酶结合的单克隆抗体效果不佳的技术问题。单克隆抗体效果不佳的技术问题。单克隆抗体效果不佳的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其是涉及一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0002]目前产KPC酶的细菌已经在全球范围内广泛传播，造成了对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类和氨曲南在内的几乎所有β
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内酰胺类抗菌药物耐药，并且产KPC酶的菌株种类正在增加，随时可能引起医院感染的爆发和流行，因此产KPC酶细菌的感染将是我们面临的严重问题，应引起微生物学家和临床医师的高度重视。自KPC
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1在美国卡罗利亚州发现以来，不同国家地区陆续对产KPC酶细菌进行了报道，总体呈现出全球播散的趋势。KPC存在多个突变体，流行病学表明KPC
‑
2与KPC
‑
3为存在的主要亚型，几乎存在于已报道的所有国家。
[0003]KPC
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1酶耐药表型表现出高度亚胺培南和美罗培南耐药性，当存在克拉维酸时，针对亚胺培南和美罗培南的β
‑
内酰胺酶活性被抑制；对头孢菌素类抗菌药物和氨曲南也耐药。KPC
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1基因由大约50kb的非结合性质粒携带。KPC
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1酶是一种新的属于A类Bush2f组的可水解碳青霉烯的β
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内酰胺酶，肺炎克雷伯菌1534的碳青霉烯耐药性主要由KPC
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1酶介导，孔蛋白表达的改变可能也起了某种作用。KPC
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2酶与KPC
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1酶有一个氨基酸的改变，S174G，分类也属于A类Bush2f组。KPC
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2酶从肠炎沙门菌和肺炎克雷伯菌而来，DNA序列表明，编码KPC
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2的质粒与沙门菌中的质粒有98％的同源性，因此，此质粒可在肠杆菌中结合而传播KPC
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2。KPC
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2酶能单独引起碳青霉烯类耐药，不依赖于膜孔蛋白的丢失，基因由可转移的70kb质粒编码，位于质粒的转座子上，具有高传播可能。KPC
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3酶由75kb的质粒编码，可以结合转移。KPC3酶是由882bp的碱基编码的293个氨基酸残基的肽链，和KPC
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1酶相比有2个碱基的改变，可通过电穿孔转移和结合。所有的KPC结合子对碳青霉烯类的药敏比原菌株要敏感。KPC
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1、KPC
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3酶均需要结合膜孔蛋白ompK35，其表达缺失引起对碳青霉烯类的耐药。
[0004]根据CLSIM100S30文件，临床上对产KPC酶细菌的检测主要是常规的药敏试验，如肉汤稀释法、纸片扩散法以及浓度梯度法，这些方法对产KPC酶细菌的检测较为困难，原因如下：产KPC酶细菌仅对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低，还达不到完全耐药的水平；产KPC酶细菌应用ESBLs确证试验检测为阳性，容易鉴定为ESBLs菌株；产KPC酶细菌接种效应会影响亚胺培南的MIC，造成错检。目前，大多使用改良的Hodge实验对碳青霉烯酶进行检测，却无法进一步确认其是否为KPC酶。除CarbaNP法外，其他几种方法基本都是基于培养的，耗时长达3
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7天，且操作复杂，需要有专业背景的技术人员，对于难培养或生长缓慢的细菌无能为力，难以满足临床需要。CarbaNP方法需要特殊试剂，其中一些需自制，有效期短，灵敏度低。现在普遍认为，产KPC酶细菌的检测金标准是分子生物学方法，但PCR检测需要配备专门的实验仪器，工作人员需要获得检测资质，单个检测成本较高，并未在临床实验室得到常规开展。产KPC酶细菌的准确检测对临床实验室检查仍然是一个巨大的挑战。
[0005]单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具
有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。
[0006]特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，耐药性以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体免疫学检测具有以下优点：特异性高，使用特异的单克隆抗体，可用于单一细胞因子的检测；操作简便、快速，无需依赖细胞株，故不需维持培养，可操作性增加，容易推广和便于普查；影响因素相对较少且容易控制，重复性好，方法容易标准化。因此，能够特异性结合KPC酶的单克隆抗体是目前市场需要的。
[0007]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的第一目的在于提供一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段，以缓解现有技术中与KPC酶结合的单克隆抗体效果不佳的技术问题。
[0009]本专利技术的第二目的在于提供一种与上述KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段相关的生物材料、试剂、试剂盒以及它们的应用，以改善现有的对KPC酶的检测方法。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0011]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段，包含轻链可变区和/或重链可变区；
[0012]所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；
[0013]或者，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_11、Seq_12和Seq_13所示；
[0014]所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_4、Seq_5和Seq_6所示；
[0015]或者，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_14、Seq_15和Seq_16所示。
[0016]根据本专利技术的一个方面，本专利技术还提供了一种组合物，包括所述与IPM酶结合的抗体或其抗原结合片段和标记物；所述标记物与所述抗体或其抗原结合片段偶联；或，所述标记物与所述抗体或其抗原结合片段分别独立包装。
[0017]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种生物材料，生物材料包括核酸片段、载体或宿主细胞；
[0018]所述核酸片段选自(a1)或(a2)：(a1)、DNA或RNA，其编码权利要求1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含轻链可变区和/或重链可变区；所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；或者，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_11、Seq_12和Seq_13所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_4、Seq_5和Seq_6所示；或者，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_14、Seq_15和Seq_16所示。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如Seq_7或Seq_17所示；优选地，所述轻链可变区的氮端还含有信号肽；优选地，轻链可变区的信号肽的氨基酸序列如Seq_21所示。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如Seq_9或Seq_19所示；优选地，所述重链可变区的氮端还含有信号肽；优选地，重链可变区的信号肽的氨基酸序列如Seq_22所示。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含轻链可变区和重链可变区；所述抗体或其抗原结合片段选自(A)或(B)：(A)、所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3的氨基酸序列分别如Seq_4、Seq_5和Seq_6所示；(B)、所述轻链可变区具有由CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3组成的轻链CDR，所述CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3的氨基酸序列分别如Seq_11、Seq_12和Seq_13所示；所述重链可变区具有由CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3组成的重链CDR，所述CDR
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H1、CDR
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘春龙，付成华，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜湖南生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：