OXA-48酶单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及单克隆抗体技术领域，尤其是涉及OXA

【技术实现步骤摘要】
OXA
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48酶单克隆抗体及应用


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其是涉及OXA
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48酶单克隆抗体及应用。

技术介绍

[0002]1993年，PATON等报道的第一个具有碳青霉烯酶活性的β
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内酰胺酶，纯化于1985年分离于苏格兰爱丁堡病人的多重耐药鲍曼不动杆菌，命名为ARI21。直到2000年，DONALD等对ARI21酶的氨基酸进行序列分析，将其命名为OXA223。2000～2004年之间，在世界各地又发现了6种新的D类碳青霉烯酶。随后又在许多国家碳青霉烯类耐药菌株中发现了7种D类酶。迄今为止，在121种OXA型酶种，至少有45种具有碳青霉烯酶活性。
[0003]通常，D类碳青霉烯酶表现出弱碳青霉烯水解活性，产该类酶的分离菌对碳青霉烯类的耐药，可能是同时伴有其他耐药机制的结果，如外膜孔蛋白丢失、泵出作用增强、青霉素结合蛋白(PBP)改变等。成熟D类碳青霉烯酶含有243～260个氨基酸残基，分子量为23～35.5kDa不等，pI为5.1～>9.0。该类酶对亚胺培南的水解速率是青霉素的1％～3％，对苯唑西林的水解速率是青霉素的2倍，对三代头孢菌素的水解活性很弱；其活性可被他唑巴坦和克拉维酸所抑制。对携带编码D类碳青霉烯酶重组质粒的大肠埃希菌转化结合子或转化株的体外抗生素敏感性研究发现，它们对氨基青霉素和羧基青霉素高水平耐药，对脲酰基青霉素的敏感性不定(仅OXA240和OXA248对哌拉西林耐药)；对头孢菌素类，包括窄谱头孢菌素、氧亚氨基头孢菌素和72α2甲氧基头孢菌素、氧头孢烯类以及单酰胺类均敏感(仅OXA248对头孢噻吩耐药)。除了OXA223显示哌拉西林在他唑巴坦存在下其MIC值降低8倍以外，其他对克拉维酸和他唑巴坦的抑制作用不敏感。
[0004]OXA
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48在碳青霉烯类耐药中，显示出了日趋重要的碳青霉烯酶的活性，其在世界各地肠杆菌科的报道逐年增多。OXA
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48于2001年首次发现于土耳其的肺炎克雷伯菌中，该菌株几乎对所有β
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内酰胺类药物耐药，包括青霉素类、头孢菌素类、单环内酰胺类和碳青霉烯类。对该肺炎克雷伯菌的进一步分析得知，其合并表达SHV
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2a、TEM
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1和OXA
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47，并且有细胞外膜蛋白的缺失，导致了它对各种抗生素的高度耐药。随后几年里，OXA
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48菌株在土耳其各地区相继出现过暴发或流行。除土耳其外，OXA
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48在比利时、黎巴嫩、突尼斯、德国、摩洛哥、法国等国家均有报道。迄今为止，OXA
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48仅在肠杆菌中有报道，包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、弗氏柠檬酸杆菌、阴沟肠杆菌、雷氏普罗威登斯菌等。在世界各地呈现出散发或暴发的趋势。D类酶中的OXA
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48对青霉素类水解能力很强，对碳青霉烯类药物活性较弱，不能被克拉维酸和他唑巴坦等抑制剂抑制，对超广谱头孢菌素类药物敏感。目前已报道的OXA
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48酶包括OXA
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48、OXA
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162、OXA
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181、OXA
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204、OXA
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232、OXA
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244、OXA
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245、OXA
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247、OXA
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436、OXA
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484和OXA
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519，产OXA
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48酶肠杆菌科在不同生态系统中的快速传播给临床带来巨大挑战。
[0005]产OXA
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48酶的菌株对亚胺培南和美罗培南的易感性下降，其MIC在敏感范围内，但对厄他培南中度敏感或耐药。因此厄他培南对携带OXA
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48肠杆菌科菌株的检测灵敏度更高，可作为OXA
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48检测较好的指示物。改良Hodge实验是美国临床和实验室标准协会(CLSI)
推荐的OXA
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48酶表型检测方法。菌株对三代、四代头孢菌素耐药，厄他培南MIC≥2μg/ml，亚胺培南、美罗培南MIC 2～4μg/ml时，应进行改良Hodge实验。当亚胺培南抑菌圈内出现待检菌呈增强性生长者为阳性，但近来这种改良Hodge实验的假阳性报道也日益增多。聚合酶链反应(PCR)技术是检测菌株是否携带blaOXA
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48基因的金标准，在传统基础上，多种新型的分子生物学技术如实时荧光定量PCR、基因芯片、环介导等温扩增等被开发出来，应用领域逐渐扩大。与传统PCR相比，这些方法在OXA
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48酶检测方面基本具有较高的敏感性和特异性，同时在检测数量、检测时间方面更有优势，但操作难度较高，步骤繁琐，部分试验对操作人员有专业要求，多由专业平台或实验室进行，试验用具、设备等硬件要求高，部分试验要求操作人员进行专业课程的学习，单个检测成本较高。
[0006]由于抗生素滥用的现象日趋严重，OXA
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48的出现应引起关注，建立一种快速、准确、易于标准化的检测OXA
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48细菌的方法值得关注，从而加强对OXA
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48细菌的监测，揭示其流行特征，采取正确有效的管理措施，控制感染及感染的传播流行。
[0007]单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，耐药性以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体免疫学检测具有以下优点：特异性高，使用特异的单克隆抗体，可用于单一细胞因子的检测；操作简便、快速，无需依赖细胞株，故不需维持培养，可操作性增加，容易推广和便于普查；影响因素相对较少且容易控制，重复性好，方法容易标准化。
[0008]现有的OXA
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48检测方法特异性差、耗时长，延误患者的诊断和治疗。CN112500489A公开了一种抗OXA
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23酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用；CN114317454A公开了一种鼠抗OXA
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48酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用；上述单克隆抗体均具有纯度效价高、特异性强的特点，适合作为免疫诊断试剂用于体外诊断OXA
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23、OXA
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48酶。但是上述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，并且都是采用动物免疫直接获得的单克隆抗体。尽管鼠源单克隆抗体属于使用最广泛的抗体，但仍然存在亲和力弱、特异性差的问题，
[0009]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.OXA
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48酶结合分子，其特征在于，包括与OXA
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48酶特异性结合的模块a或模块b；所述模块a包括第一VH结构域，所述第一VH结构域包括具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第一CDR
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H1，具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第一CDR
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H2和具有SEQ ID No.3所示氨基酸序列的第一CDR
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H3；所述模块b包括第二VH结构域，所述第二VH结构域包括具有SEQ ID No.4所示氨基酸序列的第二CDR
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H1，具有SEQ ID No.5所示氨基酸序列的第二CDR
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H2和具有SEQ ID No.6所示氨基酸序列的第二CDR
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H3。2.根据权利要求1所述的OXA
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48酶结合分子，其特征在于，所述第一VH结构域具有SEQ ID No.13所示氨基酸序列；所述第二VH结构域具有SEQ ID No.14所示氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的OXA
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48酶结合分子，其特征在于，所述模块a还包括第一VL结构域，所述第一VL结构域包括具有SEQ ID No.7所示氨基酸序列的第一CDR
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L1，具有SEQ ID No.8所示氨基酸序列的第一CDR
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L2和具有SEQ ID No.9所示氨基酸序列的第一CDR
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L3；所述模块b还包括第二VL结构域，所述第二VL结构域包括具有SEQ ID No.10所示氨基酸序列的第二CDR
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L1，具有SEQ ID No.11所示氨基酸序列的第二CDR
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L2和具有SEQ ID No.12所示氨基酸序列的第二CDR
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L...

【专利技术属性】
技术研发人员：付成华，刘春龙，张艳霞，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜湖南生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：