新德里金属β-内酰胺酶的结合蛋白及其应用和产品制造技术

本发明专利技术提供了一种新德里金属β

【技术实现步骤摘要】
新德里金属
β
‑
内酰胺酶的结合蛋白及其应用和产品


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种新德里金属β
‑
内酰胺酶的结合蛋白及其应用和产品。

技术介绍

[0002]新德里金属β
‑
内酰胺酶(NDM)属于碳青霉烯酶中的B类金属酶，可以水解除氨曲南以外的β
‑
内酰胺类抗菌药物。含此酶的细菌几乎对所有抗菌药物耐药，β
‑
内酰胺酶抑制剂如舒巴坦、克拉维酸等也不能有效抑制该类金属酶。NDM被报道以来，产NDM的耐药菌已在全世界广泛流行，NDM正在快速地演化，目前已经报道了在不同位置上的一个或多个残基上彼此不同的24种NDM
‑
1突变亚型。NDM突变亚型中各种氨基酸的替换影响了酶的稳定性和活性，在细菌的耐药性进化中赋予其选择性优势。除了NDM
‑
2基因和NDM
‑
13基因定位在染色体上以外，其他突变亚型编码基因都主要由质粒介导。NDM
‑
2、3、4、6、9、11、14、22、23和24与NDM
‑
1的差异在于单个氨基酸的替换，而其余的突变亚型具有多个替换，且最常见的替换方式是第154位的甲硫氨酸被亮氨酸替换。
[0003]bla NDM是一种质粒携带的碳青霉烯耐药基因，可在各种病原体中广泛传播，给临床抗感染治疗带来极大困难。自2009年首次发现产NDM
‑
1酶的菌株以来，产NDM型酶的菌株迅速向其他地区播散，在世界各地均有发现并报道。我国及世界上流行的分离菌中检出率较高的NDM型酶基因主要为NDM
‑
1和NDM
‑
5。携带blaNDM
‑
1基因的菌株往往同时携带有编码其他抗菌药物相关的耐药基因，如β内酰胺酶类、喹诺酮类和氨基糖苷类等，导致只有少数抗菌药物如多黏菌素、替加环素等对此类细菌具有一定的抗菌作用，该类病原菌也因此被称为“超级细菌”。NDM
‑
5与NDM
‑
1只有2个氨基酸的差别，262位氨基酸由G变为T和460位A变为C。相较于NDM
‑
1，NDM
‑
5对碳青霉烯类和广谱β内酰胺类抗菌药物具有更高的耐药水平。
[0004]我国卫生部2010年发布《产NDM
‑
1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南(试行版)》，要求对超级细菌NDM
‑
1的实验室诊断应包括表型筛查、表型确证和基因确证3个步骤。同时，美国疾病预防与控制中心(Center for Disease Control，CDC)推荐使用表型筛查和表型确证的鉴定方法对NDM
‑
1耐药菌进行鉴定。此外，美国临床和实验室标准化协会CLSI发布的M100抗微生物药物敏感性试验执行标准(2020版)和欧盟EUCAST发布的耐药机制检测(2017版)对碳青霉烯耐药的超级细菌NDM
‑
1的检测和鉴定也以表型筛查为主。表型筛查具有结果准确、重复性好等优势，但检测过程需要对微生物进行培养，耗时颇长，极大的降低了检测效率。随着分子生物学和基因测序技术的快速发展，基于核酸扩增技术的可视化快检和宏基因组测序也被广泛应用于NDM耐药菌的应急检测和现场监测，这些方法不需要对病原体进行培养，结果准确性高，但操作复杂，需要有专业背景的技术人员，PCR检测需要配备专门的实验仪器，工作人员需要获得检测资质，单个检测成本较高。产NDM酶细菌的准确检测对临床实验室检查仍然是一个巨大的挑战。
[0005]单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具
有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，耐药性以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体免疫学检测具有以下优点：特异性高，使用特异的单克隆抗体，可用于单一细胞因子的检测；操作简便、快速，无需依赖细胞株，故不需维持培养，可操作性增加，容易推广和便于普查；影响因素相对较少且容易控制，重复性好，方法容易标准化。
[0006]NDM能水解几乎所有的β
‑
内酰胺类抗生素，其中包括目前最有效力的碳青霉烯类抗生素，给临床治疗和医院感染防控带来巨大的挑战。而现有的NDM检测方法特异性差、耗时长，延误患者的诊断和治疗。CN114316056A公开了一种鼠抗NDM酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用；CN113150137A公开了一种NDM
‑
1单克隆抗体的制备方法及其应用，但是上述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，并且都是采用动物免疫直接获得的单克隆抗体。尽管鼠源单克隆抗体属于使用最广泛的抗体，但仍然存在亲和力弱、特异性差的问题。
[0007]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的第一目的在于提供一种新德里金属β
‑
内酰胺酶的结合蛋白，该结合蛋白具有特异性好、亲和力高的特点，以解决鼠源单克隆抗体在实际应用方面的问题，为建立NDM酶的检测、诊断、预防和治疗提供了新的方案。
[0009]本专利技术的第二目的在于提供上述结合蛋白在制备新德里金属β
‑
内酰胺酶检测产品中的应用。
[0010]本专利技术的第三目的在于提供一种用于检测新德里金属β
‑
内酰胺酶的胶体金免疫层析试纸条。
[0011]本专利技术的第四目的在于提供上述结合蛋白在制备新德里金属β
‑
内酰胺酶纯化产品中的应用。
[0012]本专利技术的第五目的在于提供一种用于纯化新德里金属β
‑
内酰胺酶的试剂盒。
[0013]本专利技术的第六目的在于提供一种编码上述结合蛋白的核酸。
[0014]本专利技术的第七目的在于提供生物材料。
[0015]本专利技术的第八目的在于提供上述结合蛋白的制备方法。
[0016]第一方面，本专利技术提供了一种新德里金属β
‑
内酰胺酶的结合蛋白，所述结合蛋白包括可变区A或可变区B；
[0017]所述可变区A包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VL、具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VL和具有如SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新德里金属β
‑
内酰胺酶的结合蛋白，其特征在于，所述结合蛋白包括可变区A或可变区B；所述可变区A包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VL、具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VL和具有如SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VL；所述可变区B包括：具有如SEQ ID NO.7所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VH、具有如SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VH、具有如SEQ ID NO.9所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VH、具有如SEQ ID NO.10所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
‑
VL、具有如SEQ ID NO.11所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
‑
VL和具有如SEQ ID NO.12所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
‑
VL。2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，所述可变区A包括具有如SEQ ID NO.13所示氨基酸序列的重链可变区VH和具有如SEQ ID NO.14所示氨基酸序列的轻链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春龙，付成华，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜湖南生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：