卵巢癌相关的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种卵巢癌的生物标志物，所述生物标志物为自身抗体组合或自身抗体与肿瘤抗原的组合。本发明专利技术还提供用于检测该生物标志物的重组抗原组合或重组抗原与重组抗体的组合、包含该组合的试剂盒，以及相应的检测或诊断方法。诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
卵巢癌相关的生物标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术和医学诊断领域，具体而言，本专利技术涉及一种卵巢癌的生物标志物、针对其的检测试剂以及相应地它们在卵巢癌检测中的应用。

技术介绍

[0002]对于一般女性而言，卵巢癌在其一生中发生的可能性约为1.3％；然而，它是所有妇科恶性肿瘤中致死率最高的。卵巢癌的发病率随着年龄的增长而增加，特别是在45岁之后；流行病学统计确诊时的中位年龄为63岁。2018年，全球约有295,414例新确诊患者，并且约有184,799例确诊患者死于卵巢癌。卵巢癌是全球女性因癌症死亡的第八大原因。
[0003]由下面的一组数据可以容易地理解开展卵巢癌早期检测的必要性：如果卵巢癌在I期(即它只影响到卵巢)时得到有效治疗，那么它的治愈率可以达到90％以上；如果这个疾病发展到II期(即它的影响扩散至骨盆)时得到治疗，那么患者的5年生存率可以达到70％；如果当它发展III或IV期(即它扩散至骨盆以外)时再进行治疗，那么患者的长期生存率约为20％甚至更低。不尽如人意的是，目前只有20％的卵巢癌患者在I至II期时得到及时诊治，大多数患者被确诊时已经发展至III期(51％)和IV期(29％)。总体而言，全球范围内卵巢癌5年生存率在30％至40％之间，这个数字在过去20年间仅仅增长了2％至4％。除此之外，70％的晚期上皮性卵巢癌患者在治疗之后会复发。一旦复发，之后的生存时间非常短。计算机模拟分析显示如果能在卵巢癌发展到临床阶段之前进行早期检测，那么患者生存率将提升10％至30％，从卫生经济学角度来看这是非常合算的。
[0004]卵巢癌可以分为上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancers，EOCs)和非上皮性卵巢癌，其中上皮性卵巢癌是最普遍的类型，占所有病例的90％左右。上皮性卵巢癌的细胞来源于覆盖在卵巢、浆膜下包涵性囊肿、或输卵管纤维状末端表面的上皮细胞。这些原本正常的细胞转化为癌细胞后所形成的肿瘤可以分为浆液性瘤、粘液性瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞瘤等。上皮性卵巢癌根据临床病理特征可以进一步分为I类和II类EOCs。I类EOCs通常恶性程度低、确诊时为早期、生长缓慢、死亡率较低，病理上通常呈现为低恶性程度的浆液性瘤、子宫内膜样瘤。I类EOCs一般是从良性病变发展而来，例如从子宫内膜异位症。II类EOCs通常恶性程度高、在晚期表现出症状、组织染色的分化程度低，包括高恶性程度的浆液性瘤、癌肉瘤等，它们生长迅速，患者生存率较低。大多数II类EOCs伴随着p53基因突变，除了会发展成盆腔恶性肿瘤，它还会向网膜和肠系膜中转移生长。另有约10％的卵巢癌病例属于非上皮性癌症，它包括生殖细胞瘤、性索间质肿瘤、卵巢肉瘤等。
[0005]卵巢癌患者中85％的病例没有遗传方面的风险因素。由于卵巢癌筛查的结果影响后续是否需要外科手术治疗，因此有研究建议检测的阳性预测值(PPV)需要大于10％以平衡筛查所带来的益处和不必要的手术危害，低于10％的PPV被认为是不可接受的。迄今为止，经阴道超声检查(transvaginal ultrasonography，TVUS)和检测血清中癌抗原125(Cancer Antigen 125，CA125)水平是最常见的卵巢癌检测方式，它们或单独、或联合使用。然而，这两种方法都有局限性，使它们不适合筛查一般人群。TVUS的诊断能力较差，据一项
正在进行的卵巢癌筛查研究报道，其对原发性卵巢癌和输卵管癌的敏感性为84.9％，特异性为98.2％，但是阳性预测值仅为5.3％；因此，TVUS会建议更多的疑似个体接受手术治疗，但是该手术相关的潜在并发症所带来的危害同样不能忽视。
[0006]CA125是粘蛋白家族中的一种高度糖基化的蛋白质，血清中35U/mL的CA125水平可以作为区分健康者和疾病患者的阈值。虽然它可以有效识别80％的晚期卵巢癌疾病患者，但CA125仅在不到50％的早期卵巢癌中升高。使用CA125作为分子指标的另一个问题是它在良性疾病中也升高，包括子宫内膜异位症、肌瘤、盆腔炎；以及在各种其他恶性肿瘤中同样升高。因此，CA125作为识别早期卵巢癌生物标志物的用途是有限的。
[0007]所以，还需要发现具有高特异性和灵敏度的新型卵巢癌生物标志物。目前为止，文献中已经报道了30多种卵巢癌的生物标志物。绝大多数是癌组织产生的蛋白质，可以通过血液检测在患者的样本中观察到水平异常。这些蛋白质作为生物标志物的一个主要障碍是无法在癌症发展的早期阶段检测到它们。这是由于早期癌性病变的组织较小，所分泌的蛋白质水平较低；此外血清中蛋白质的动态范围很大(可以达到12个数量级)，这会影响这类低丰度蛋白质的检测。同时，英国卵巢癌筛查联合试验(UKCTOCS)发现现有的卵巢癌筛查方式(包括生物标志物和影像学手段)对降低卵巢癌死亡率的效果并不明显。已知癌症具有异质性。当前筛查的结果说明现有的筛查对恶性程度高、致死率高的卵巢癌并不敏感，没有对卵巢癌患者的病理分级进行区分的能力。
[0008]针对肿瘤相关抗原(Tumor
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associated antigens，TAAs)的自身抗体(Tumor
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associated autoantibodies，TAABs)可以作为更敏感的生物标志物。肿瘤相关抗原是肿瘤组织特异性分泌的异常蛋白质或多肽，它们是因为癌症发展过程中所发生的蛋白质表达失调、突变或异常翻译后修饰而产生的，并进入血液循环系统，最终它们引起自身免疫反应，因此而产生的自身抗体便是TAABs。TAABs具有三种特性使其成为卵巢癌生物标志物的理想候选者。首先，它们可以在疾病的早期阶段被检测到，这是因为TAABs由少量肿瘤自身抗原激活B淋巴细胞就可以产生，并可以通过体液免疫反应导致免疫信号放大。其次，TAABs对其他分子所经历的蛋白质水解和代谢具有天然抗性，这要归因于它们具有大约21天的长半衰期。这种稳定性使针对它们的检测可靠性和重复性更高，促进它们在疾病检测中的使用。最后，自身抗体存在于患者血清中，因此可以通过相对成熟的技术进行分析，并对受检者产生较微小创伤。
[0009]Gadducci等人报道了卵巢癌患者的血液循环系统中存在p53蛋白的抗体。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)，他们发现术前在30名上皮性卵巢癌I
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II期患者中有3名(10.0％)存在血清p53抗体阳性情况，56名III
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IV期患者中有15名(26.8％)p53抗体阳性。在分化程度较高的肿瘤患者体内，即使是晚期(III
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IV)患者，也未发现p53抗体阳性。然而，在中度和低分化肿瘤患者中观察到p53抗体阳性率为30.6％。Vogl等人进行了一项临床队列研究，包括113名卵巢癌患者、15名交界性肿瘤患者和117名卵巢良性肿瘤患者。使用高度纯化并复性p53蛋白分子进行ELISA分析，发现卵巢癌患者中p53抗体的阳性率为19％(21/113)，而未在卵巢交界性或良性肿瘤患者中观察到p53抗体阳性。这些发现表明，p53抗体对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌的生物标志物，所述生物标志物为(i)自身抗体组合或(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合。2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为(i)自身抗体组合，并且所述自身抗体组合包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21；优选地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；进一步优选地，所述自身抗体组合包括分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：(1)TRIM21；(2)TRIM21、P53、HIP1；(3)TRIM21、P53、HIP1、GNAS；(4)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；(5)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；(6)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；(7)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；或(8)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2。3.根据权利要求1或2所述的生物标志物，其特征在于，所述自身抗体组合还包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种：Trim24、MAGEC1、SEC16和PTGFR。4.根据权利要求1至3中任一项所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合，并且所述自身抗体组合包括抗TRIM21的自身抗体，所述肿瘤抗原包括CA125和HE4；优选地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；进一步优选地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合包括：(1)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(2)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(3)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(4)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(5)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(6)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；(7)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；或(8)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2；和，肿瘤抗原：CA125、HE4。5.根据权利要求1至4中任一项所述的生物标志物，其特征在于，所述自身抗体和/或肿
瘤抗原为受试者的样本例如全血、血清、血浆、组织或细胞、组织间隙液、脑脊液或尿液中的自身抗体；优选地，所述组织或细胞为卵巢癌组织或细胞或者癌旁组织或细胞；优选地，所述受试者为哺乳动物，优选为灵长类哺乳动物，更优选为人；优选地，所述自身抗体为IgA、IgM或IgG；优选地，所述卵巢癌为任何病理亚型或分期的卵巢癌；优选地，所述卵巢癌按照病理亚型可以为浆液性瘤、粘液性瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞瘤，优选浆液性瘤；按照病理分期可以为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，优选Ⅰ期、Ⅱ期卵巢癌。6.一种用于检测如权利要求1至5中任一项所述的生物标志物的试剂。7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述试剂是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测的试剂；优选地，所述试剂用于通过抗原抗体反应对所述生物标志物进行检测，例如通过ELISA或荧光或化学发光免疫检测。8.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙苏彭，杨盼盼，周静，孙立平，
申请(专利权)人：杭州凯保罗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：