一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒，包括检测天冬酰胺内肽酶(AEP)蛋白水平或其编码基因表达水平的试剂。本发明专利技术还提供了天冬酰胺内肽酶抑制剂在制备预防或治疗结直肠癌西妥昔单抗耐药的药物中的应用，以及一种包括天冬酰胺内肽酶抑制剂和西妥昔单抗的用于治疗结直肠癌的药物组合物。本发明专利技术首次发现AEP可作为预测晚期肠癌西妥昔单抗治疗疗效的特异性标志物，可以作为改善肠癌细胞对西妥昔单抗的耐药性或增强西妥昔单抗敏感性的治疗靶点。药性或增强西妥昔单抗敏感性的治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及癌症治疗


技术介绍

[0002]结直肠癌是一种恶性消化道肿瘤，近一半的患者在初诊时已存在远处转移。结直肠癌的靶向药物包括以：以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的单克隆药物，代表药物为西妥昔单抗和帕尼单抗；以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点的单克隆药物，代表药物是贝伐珠单抗。
[0003]在我国，结直肠癌中使用最广泛的EGFR单抗是西妥昔单抗，它能结合EGFR的胞外区域，阻断EGFR激活和信号转导，从而起到抗肿瘤作用。原癌基因RAS(包括KRAS、NRAS等)是EGFR下游信号通路中重要的分子，RAS基因的突变会影响EGFR抑制剂的效果。大量文献显示，原癌基因RAS突变后对西妥昔单抗等治疗不敏感。转移性结直肠癌患者中，约50％为RAS基因野生型，这部分患者可以从EGFR单抗联合化疗中获益。
[0004]即使对RAS基因野生型的结直肠癌患者来说，西妥昔单抗的中位有效时间也仅一年左右，耐药机制与肿瘤组织存在RAS基因异质性、EGFR信号通路改变或旁路激活或EGFR的胞外区域发生突变有关。但具体机制仍有待于进一步探索。因此，探索肠癌西妥昔单抗耐药的分子机制，寻找特异性预测疗效的生物标志物及有效的治疗靶点，具有重要的临床意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述问题，提供了一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒，避免可能无效的人群过多地暴露在药物治疗中，减少副作用，提高社会经济学效益。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面提供了一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒，包括检测天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平的试剂。
[0008]天冬酰胺内肽酶(Asparaginyl Endopeptidase，AEP)也称为δ
‑
分泌酶或legumain(LGMN)，是一种C13家族的半胱氨酸肽链内切酶。在人类中，AEP由位于染色体14q32.12上的LGMN基因编码。关于AEP蛋白及其编码基因的信息可以从NCBI、Genecards、KEGG等生物信息数据库中获得。
[0009]优选地，检测天冬酰胺内肽酶蛋白水平的试剂包括可与AEP特异性结合的抗体、寡肽、配体、肽核酸和适配体等，包括但不限于AEP抗体(R&DSystems,AF2199和R&D Systems,DY4769)。
[0010]优选地，检测天冬酰胺内肽酶基因表达水平的试剂包括可特异性扩增AEP全部或部分编码基因的引物、探针和反义核苷酸等，包括但不限于寡聚胸腺嘧啶引物组，所述的寡聚胸腺嘧啶引物组包括：
[0011]如SEQ ID NO.1所示的正向引物：TCGTCCTACGCCTGTTACTA；
[0012]如SEQ ID NO.2所示的负向引物：GATCTTCCACGTCCGAATCTT。
[0013]本专利技术所述的试剂盒还可以包括一种或多种适用于提取或检测天冬酰胺内肽酶蛋白或其编码基因表达水平的其他组分组合物、溶液或装置。
[0014]本专利技术的第二方面提供了一种用于结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性预测信息的方法，包括下述步骤：
[0015]获取结直肠癌患者的生物样本，利用上述技术方案所述试剂盒检测生物样本中的天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平信息。
[0016]优选地，所述的生物样本为患者肿瘤组织或血清。
[0017]优选地，所述的方法还包括，将生物样本中天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平与对照组或预先设定的限值进行比较，得出结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性预测信息。
[0018]优选地，所述预先设定的限值为：患者血清中天冬酰胺内肽酶蛋白表达水平为218.35pb/mL；当天冬酰胺内肽酶蛋白表达水平＞218.35pb/mL时为高表达水平，判断该结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性较高；当天冬酰胺内肽酶蛋白表达水平≤218.35pb/mL时为低表达水平，判断该结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药较低。
[0019]本专利技术的第三方面提供了天冬酰胺内肽酶抑制剂在制备预防或治疗结直肠癌西妥昔单抗耐药的药物中的应用。
[0020]优选地，所述的天冬酰胺内肽酶抑制剂包括RR
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11aanalog(授权专利号：CN202110256005.0)、天冬酰胺内肽酶小分子抑制剂(授权专利号CN201711329218.1)、δ
‑
secretase inhibitor 11(PubChem CID:1095027，J&K Scientific Ltd)中的一种或多种。
[0021]本专利技术的第四方面一种用于预防或治疗结直肠的药物组合物，包括西妥昔单抗和天冬酰胺内肽酶抑制剂。
[0022]优选地，所述的天冬酰胺内肽酶抑制剂包括RR
‑
11aanalog(授权专利号：CN202110256005.0)、AEP抑制剂(授权专利号CN201711329218.1)、δ
‑
secretase inhibitor 11(PubChem CID:1095027，J&K Scientific Ltd)中的一种或多种。
[0023]优选地，西妥昔单抗与天冬酰胺内肽酶抑制剂的比值为5～50μg/ml：20～40μM；进一步优选为10μg/ml：30μM。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0025]本专利技术通过生物信息学分析，筛选出与西妥昔单抗疗效有关的AEP基因，实验发现AEP与临床上西妥昔单抗的无进展生存期(PFS)有关，AEP高表达的患者PFS短。进一步研究显示，AEP过表达的结直肠癌细胞对西妥昔单抗的敏感性下降，耐药性增强。采用AEP抑制剂处理AEP过表达的结直肠癌细胞后，恢复对西妥昔单抗的敏感性。
[0026]本专利技术首次发现天冬酰胺内肽酶(AEP)与结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性有关，AEP可作为预测晚期肠癌西妥昔单抗治疗疗效的特异性标志物，从而进一步提供了一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒。基于本专利技术的研究，AEP也可以作为改善肠癌细胞对西妥昔单抗的耐药性或增强西妥昔单抗敏感性的治疗靶点，从而进一步提供了AEP抑制剂在制备预防或治疗结直肠癌西妥昔单抗耐药的药物中的应用、以及一种包括西妥昔单抗和天冬酰胺内肽酶抑制剂的结直肠药物组合物。
附图说明
[0027]图1为生物信息学分析天冬酰胺内肽酶表达水平与西妥昔单抗疗效的生存曲线图；
[0028]图2为免疫组化检测患者肿瘤组织中AEP表达水平图；
[0029]图3为AEP表达水平与患者PFS密切相关性图；
[0030]图4为验证本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预测结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性或西妥昔单抗疗效的试剂盒，其特征在于，包括检测天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测天冬酰胺内肽酶蛋白水平的试剂包括天冬酰胺内肽酶抗体。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测天冬酰胺内肽酶基因表达水平的试剂包括寡聚胸腺嘧啶引物组，所述的寡聚胸腺嘧啶引物组包括：如SEQ ID NO.1所示的正向引物：TCGTCCTACGCCTGTTACTA；如SEQ ID NO.2所示的负向引物：GATCTTCCACGTCCGAATCTT。4.一种提供用于结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性预测信息的方法，其特征在于，包括下述步骤：获取结直肠癌患者的生物样本，利用权利要求1
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3任意一项所述试剂盒检测生物样本中的天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平信息。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的生物样本为患者肿瘤组织或血清。6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括，将生物样本中天冬酰胺内肽酶蛋白水平或其编码基因表达水平与对照组或预先设定的限值进行比较，得出结直肠癌患者对西妥昔单抗耐药性预测信息。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述预先设...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓晶，彭轲，刘梦玲，余一祎，刘天舒，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：