非洲猪瘟MGF505-2R基因缺失减毒株的构建及作为疫苗的应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及MGF 505

【技术实现步骤摘要】
and SDCBP."Viruses 12.1(2020):60
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75.)；缺失MGF100
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1R的GZ201801病毒株，复制能力与亲本病毒GZ201801相似，不能作为减毒苗(Yl,A,et al."Development and In vivo Evaluation of MGF100
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1R Deletion Mutant in an African Swine Fever Virus Chinese Strain."Veterinary Microbiology(2021))；缺失MGF110
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1L和MGF360
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1L后病毒的复制速率以及临床症状和亲本病毒相似，与病毒毒力无关(Ramirezmedina,E.,et al."Development and In Vivo Evaluation of a MGF110
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1L Deletion Mutant in African Swine Fever Strain Georgia."Viruses 13.2(2021):286.；Ra mirez
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Medina,E.,et al."Evaluation in Swine of a Recombinant African Swine Fever Viru s Lacking the MGF
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360
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1L Gene."Viruses 12.10(2020):1193.)；ASFV<br/>‑
G同时缺失MGF360
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13L和MGF360
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14L后，病毒的复制没有变化(Borca,M.V.,et al."Development of a fluor escent ASFV strain that retains the ability to cause disease in swine."Scientific Reports 7(2017):46747.)。
[0005]而本专利技术在基因功能及其调控机制研究中首次发现了在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018基因组中，非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因具有较强的免疫抑制作用，是新发现的靶标基因；本专利技术通过对新鉴定的靶标基因非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R编码蛋白的功能丧失，进一步降低了其致病性，提升其安全性，得到了对猪完全致弱的病毒株；用基因缺失的方法得到的弱毒株免疫动物后，与免疫猪同居的猪没有被水平感染，免疫猪解剖观察，各个组织器官健康，进一步检测核酸为阴性，表明通过上述缺失获得了一株安全可靠的减毒非洲猪瘟病毒株；攻毒实验表明，所述减毒非洲猪瘟病毒能对II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018强毒株攻毒具有良好的免疫保护作用；因此，敲除MGF 505
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2R后可以作为控制非洲猪瘟疫情的疫苗，具有极高的社会价值。

技术实现思路

[0006]针对上述技术问题，本专利技术首先发现了在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中，MGF 505
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2R基因具有较强的免疫抑制作用，是新发现的使非洲猪瘟病毒减弱的靶标基因。基于此，本专利技术的目的在于提供一种构建非洲猪瘟减毒株的策略，所述策略是通过以下技术方案实现的：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中缺失MGF
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505
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2R基因制备非洲猪瘟减毒株的应用，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。本领域技术人员可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因的全部核苷酸序列导致其编码蛋白功能的丧失，也可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因部分核苷酸序列(MGF 505
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2R基因启动子序列)使非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因编码的蛋白无法表达，导致其编码蛋白功能丧失。根据本领域技术人员的公知常识，除了上述基因编辑手段，还可以采用其它基因编辑手段使非洲猪瘟病毒MGF
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505
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2R基因编码的蛋白功能同时丧失，例如：移码突变、点突变、移码缺失、插入核苷酸序列等。
[0008]优选地，所述MGF 505
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2R基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述缺失的MGF
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505
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2R基因为II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第33122
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34702位。
[0009]第二方面，本专利技术提供了一种通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中缺
失MGF
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505
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2R基因制备非洲猪瘟减毒疫苗的应用，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。本领域技术人员可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因的全部核苷酸序列导致其编码蛋白功能的丧失，也可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
‑
2R基因部分核苷酸序列(MGF 505
‑
2R基因启动子序列)使非洲猪瘟病毒MGF 505
‑
2R基因编码的蛋白无法表达，导致其编码蛋白功能丧失。根据本领域技术人员的公知常识，除了上述基因编辑手段，还可以采用其它基因编辑手段使非洲猪瘟病毒MGF
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505
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2R基因编码的蛋白功能同时丧失，例如：移码突变、点突变、移码缺失、插入核苷酸序列等。
[0010]优选地，所述MGF 505
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2R基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述缺失的MGF
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505
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2R基因为II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第33122
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34702位。
[0011]第三方面，本专利技术提供了一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为MGF
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505
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2R基因缺失的II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。本领域技术人员可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因的全部核苷酸序列导致其编码蛋白功能的丧失，也可以通过缺失非洲猪瘟病毒MGF 505
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2R基因部分核苷酸序列(MGF 505
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中缺失MGF 505
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2R基因制备非洲猪瘟减毒株的应用，其特征在于，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。2.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中缺失MGF 505
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2R基因制备非洲猪瘟减毒疫苗的应用，其特征在于，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。3.一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为MGF
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505
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2R基因缺失的II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。4.如权利要求3所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述MGF 505
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2R基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述缺失的MGF 505
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2R基因为II型非洲猪瘟病毒株ASF V CN/GS 2018全长序列的第33122
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34702位。5.如权利要求3或4所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。6.一种非洲猪瘟减毒疫苗，其特征在于，所述非洲猪瘟减毒疫苗包括权利要求3或4所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株。7....

【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，黄华国，党文，肖书奇，冯涛，丁明洋，石正旺，孙康永杰，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：