一种建立帕金森病动物模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种帕金森病模型动物、建立该帕金森病模型动物的方法，以及该帕金森病模型动物的用途。在本发明专利技术的帕金森病动物模型中，给予动物鼠柠檬酸杆菌(Citrobacterrodentium，C.R)和/或多巴胺能神经毒素1

【技术实现步骤摘要】
一种建立帕金森病动物模型的方法


[0001]本专利技术涉及医学、药学
具体地，本专利技术涉及一种帕金森病动物模型的方法， 以及该帕金森病模型动物模型的用途。更具体地，本专利技术涉及利用鼠柠檬酸杆菌在体内的 病理功能，并且进一步地发现其可以用于制备帕金森病动物模型，并能用于肠道感染所致 帕金森病的药物的筛选和研制。

技术介绍

[0002]帕金森病(Parkinson
’
s disease，PD)是中脑黑质致密区(SNpc)多巴胺能神经元变性、 丢失导致的神经退行性疾病，病理特征包括存在包含α
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突触核蛋白的路易小体以及神经炎 症，65岁以上人群中约有1.7％的患者，中国现有近400万PD患者，随着我国人口老龄化 的加剧，PD患者人数还会进一步上升，给社会和家庭带来巨大的经济和精神压力。该病的 发病机制尚不清楚，临床上的诊治和干预手段十分有限，此外，缺乏精准模拟PD病理特性 和临床表现的实验动物模型。肠道感染与PD的发病相关，但是在患者和动物模型中的证据 仍不充分，机制也不清楚，建立一种肠道感染所致帕金森病的新的动物模型很有必要，并 且尚无文献报道。
[0003]鼠柠檬酸杆菌(Citrobacterrodentium，C.R)是一种特异性啮齿类动物致病细菌，主 要在结肠内聚集并导致短暂性结肠炎(Luperchio S A et al(2000)Citrobacter rodentium,thecausative agent of transmissible murine colonic hyperplasia,exhibits clonality:synonymy ofC.rodentium and mouse
‑
pathogenic Escherichia coli.J Clin Microbiol 38:4343
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4350； Mundy R et al(2005)Citrobacter rodentium of mice and man.Cell Microbiol7:1697
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1706.)。MPTP是线粒体复合体I的神经毒素，可以引起运动缺陷、多巴胺能神经 元死亡、α
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突触核蛋白表达上调以及黑质
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纹状体中的神经胶质激活，在动物模型中模拟 PD样特征(Jackson
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Lewis,V.；Przedborski,S.,Protocol for the MPTP mouse model ofParkinson's disease.Nat Protoc 2007,2,(1),141
‑
51.)。
[0004]本专利技术立足于C.R与MPTP，以期建立了一种表型稳定的帕金森病动物模型。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的就是提供一种用于建立帕金森病动物模型的方法。
[0006]本专利技术的另一目的是提供该帕金森病小鼠模型的用途。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供了一种产生帕金森病哺乳动物的方法，包括步骤：
[0008](a)利用鼠柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium，C.R)建立肠道菌群感染导致的炎 症模型：当然不局限于鼠柠檬酸杆菌的具体菌株，仅为例举，可以为DBS100和DBS770，发 现：C.R DBS770感染影响到单胺类递质的变化，多巴胺递质代谢通路尤为显著；
[0009](b)将步骤(a)中的筛选得到的柠檬酸杆菌(DBS770)给予哺乳动物，例如小鼠， 剂量为3
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5x108 CFU/只，更优选4x108 CFU/只，可造成小鼠肠道菌群紊乱及炎症；
[0010](c)对步骤(b)获得的哺乳动物进行鉴定，柠檬酸杆菌感染影响脑内多巴胺递质的 代谢，为立足于现有技术基础上的首次发现；
[0011](d)对步骤(c)获得的哺乳动物，可进一步给予MPTP，肠道菌群紊乱可通过加剧神 经炎症而促进PD的发病进程，完成帕金森病动物模型建立。
[0012]在本专利技术的第二方面，提供了一种用本专利技术上述方法获得的哺乳动物的用途，这些哺 乳动物被用作帕金森病模型，或用于筛选预防和/或治疗肠道感染所致帕金森病的药物。
[0013]在另一优选例中，所述的哺乳动物优选小鼠或大鼠。
[0014]本专利技术人经过深入而广泛的研究，建立了一种表型稳定的帕金森病动物模型，它是由 肠道感染和MPTP联合给药产生的小鼠或其他哺乳动物。本专利技术模型动物为帕金森病模型可 用于帕金森病研究，并且可以用于筛选预防和/或治疗肠道感染所致PD的药物。在此基础 上完成了本专利技术。
[0015]具体而言，本专利技术人利用两种鼠柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium，C.R)：DBS100 和DBS770，分别建立了肠道菌群感染导致的炎症模型，发现C.R DBS770感染影响到单胺类 递质的变化，多巴胺递质代谢通路尤为显著；C.R(4x108 CFU/只)可造成小鼠肠道菌群紊 乱及炎症，属于较为优选的剂量；与多巴胺能神经毒素MPTP(40mg/kg)联合使用，联合的 方式并不限定，给药的顺序也并不限定，如果需要给一个优选方式，则为C.R为初始给药， 5
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7天后使用MPTP进行给药，优选6天；给药的针剂数量并不特别限定，但基于上述的剂 量可优选为一针，以上方式可以建立一种新的帕金森病动物模型。
[0016]所述MPTP的给药方式并不特别限定，主要能够达到一定的血药浓度即可，如果需要限 定，则可以为肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等，优选腹腔注射。
[0017]有益效果
[0018]DBS770与MPTP连用具有显著的协同效应，主要体现在脑内PD受累通路黑质
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纹状体中 小胶质细胞和星型胶质细胞的过度激活、加剧黑质致密部多巴胺能神经元和纹状体内多巴 胺能神经末梢丢失、纹状体内多巴胺递质水平下降更为明显、小鼠出现明显的运动协调障 碍。
[0019]C.R DBS770感染可促进脑内多巴胺递质代谢转化并协同MPTP加剧PD发病进程。C.RDBS770感染或C.R DBS770与MPTP联用可以建立一种新的PD实验动物模型，可用于研究肠 道炎症与PD相关性这一临床现象，发现和优化针对PD的临床用药。基于此，该专利技术具有 宽广的转化、应用前景，可为PD的研究提供新的模型和思路。
附图说明
[0020]图1利用C.R DBS770成功构建感染模型，C.R DBS770感染诱发肠道炎症因子检测：(A) 结肠组织中炎症因子mRNA水平分析；n＝3
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5；(B)ELISA检测粪便中炎症标志蛋白钙卫蛋白 (Calprotectin)的含量；n＝7；统计方法采用非配对T test，*p&lt;0.05，**p&lt;0.01， ***p&lt;0.001，****p&lt;0.0001。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立帕金森病动物模型的方法，其特征在于，包括采用鼠柠檬酸杆菌进行哺乳动物定植。2.根据权利要求1所述的方法，进一步的，所述定植为肠道定植。3.根据权利要求2所述的方法，进一步的所述定植方法为采用鼠柠檬酸杆菌悬液进行灌胃。4.根据权利要求3所述的方法，所述给药剂量为3
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5x10
8 CFU/只，优选4x10
8 CFU/只。5.根据权利要求1所述的方法，进一步的，还包括采用1
‑
甲基
‑4‑
苯基
‑
1,2,3.6
‑
四氢吡啶(MPTP)进行注入。6.根据权利要求5所述的方法，所述MPTP给药剂量为30
‑
50mg/kg，优选40mg/kg...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄芳，何永涛，余梅，李青，赵佳音，
申请(专利权)人：上海南方模式生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：