一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法技术

本发明专利技术提供一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，包括以下步骤：(1)挑选成熟雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜作为亲鱼分养，对所述亲鱼人工催产，干法授精，受精后的鱼卵进行孵化；(2)对孵化完成的鱼卵进行饲养，测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂的性状特征。其一，翘嘴鳜雄性个体性腺成熟至退化时间较长，且雄性个体精液充足，是一种很好的异源精子源，适合用于规模化雌核发育操作；其二，翘嘴鳜雄性注射一次后，一周内可多次产精，精子活力好；其三，翘嘴鳜生长速度快，一年性成熟，肉质营养丰富，采用翘嘴鳜精子作为刺激源获得的天然雌核发育团头鲂生长速度显著提高，肉质得到提高，可能与“异精效应”相关。相关。相关。

【技术实现步骤摘要】
一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法


[0001]本专利技术属于跨目间鱼类的特殊远缘杂交
，尤其涉及一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法。

技术介绍

[0002]远缘杂交是指亲缘关系在种间或种间以上的杂交。作为鱼类遗传育种和性状改良的常用方法，它可以不仅可以性状改良，还可以改变杂交后代基因的表达调控，使杂交后代可能在生长速度、抗病性以及肉质等方面表现出杂种优势。鱼类的天然雌核发育是在远缘杂交过程中，精子激活成熟的卵子发育，卵子以不完全的减数分裂或其他方式完成染色体加倍，进而发育形成正常个体。近年来，国内外关于鱼类雌核发育研究的成功报道很多，是鱼类遗传育种研究热点之一。鱼类雌核发育在生产实践和理论研究上都具有重要价值。在鱼类育种工作和遗传学研究中，雌核发育技术可用来加快品种、种群的选育以及进行遗传改良、性别决定机制的判别和基因定位等。雌核发育不单能很好的控制鱼类性别，同时也是快速获得纯系近交系的有效途径，对物种提纯起着重要作用。
[0003]申请者实验室长期以来开展了鱼类远缘杂交以及雌核发育研究，发现异源精子刺激鱼类卵子进行的雌核发育，雌核发育后代通常具有异源精子的基因组片段，具有“杂交”效应，这两种效应使得雌核发育后代获得了一些优良性状，如在生长速度、抗病性、肌肉品质等性能方面显著增强，表现出“杂交”优势。那么，如何利用和改进现有的生物学技术和方法，在现有鱼品种中挑选合适的亲本鱼进行远缘杂交，从而对其进行遗传改良以获得生长速度更快、肉质更好和对遗传研究更有意义的新型多倍体鱼，就成为本领域技术人员长期面临和需要解决的问题。
[0004]团头鲂属于鲤形目中的二倍体鱼(2n＝48)，翘嘴鳜属于鲈形目中的二倍体鱼(2n＝48)。在遗传、分类和体形等生物学特征方面，翘嘴鳜和团头鲂之间存在较大的差异，因此远缘杂交困难较多。至今国内外还没有翘嘴鳜与团头鲂目间的远缘杂交成功培育稳定遗传子代的报道，探索一种使团头鲂与翘嘴鳜之间成功杂交，并获得优良性状新型杂交鱼的技术是具有应用价值的。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0007]一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，包括以下步骤：
[0008](1)挑选成熟雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜作为亲鱼分养，对所述亲鱼人工催产，干法授精，受精后的鱼卵进行孵化；
[0009](2)对孵化完成的鱼卵进行饲养，通过流式细胞DNA含量测定、外周血细胞染色体倍性检测测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂。
[0010]在保证亲本的成活率的前提下，适当控制亲本的产精及产卵时间可以保证成效。为了探索一种能获得雌核发育后代的方法：1)选用了经济价值高，肉质优良，产精量大的翘嘴鳜的精子作为父本，发现父本可多次产精，且量大，不需要多次打针，减少人为操作；2)选用了养殖产量大，来源广泛，产卵量大且易养殖的团头鲂作为母本，达到了最终创制出孵化率高、生长速度快和肉质更优的二倍体天然雌核发育团头鲂的目的，为后续大规模制备具有多种优良性状的团头鲂提供了重要的、宝贵的种质资源。
[0011]本专利技术采用翘嘴鳜精子作为父本具有明显的优势，其主要表现在如下方面：其一，翘嘴鳜雄性个体性腺成熟至退化时间较长，且雄性个体精液充足，是一种很好的异源精子源，适合用于进行杂交育种操作；其二，雄性翘嘴鳜产生的精子数量多，在第一次注射催产药后，无需多次注射可在短时间内多次产精；其三，翘嘴鳜作为名贵淡水鱼，无肌间刺，肉质好，营养价值高，一年性成熟，养殖及育种优势非常明显；其四，翘嘴鳜的生长速度快、肉质好，用翘嘴鳜精子作为刺激源获得的雌核发育团头鲂生长速度快且肉质得到提高，其机理可能是翘嘴鳜的染色体片段进入团头鲂中产生了“杂交”效应。
[0012]优选的，所述成熟雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜的选择和培育具体为：在繁殖期前3～4个月，挑选性成熟特征明显且体征良好的雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜作为远缘杂交的亲鱼进行分池专养，繁殖期前一至二个月左右翘嘴鳜保证活饵充足，每隔1～2天流水刺激一次，以促进亲鱼性腺发育成熟。体征良好的亲鱼一般表现为体型好、体质健壮、体色好、无病无伤。
[0013]优选的，所述人工催产具体为：在当年的5月上旬，当水温稳定在22℃以上时，先使用催产素注射父本亲鱼，14～15h后再注射母本亲鱼；注射完毕后按(3～4):1的数量比将母、父本亲鱼放入同一产卵池中，催产，直至其开始顺利产卵和产精。所述温度既适合团头鲂性产出数量大的成熟卵子，也适合翘嘴鳜产精，注射时间能够保证收集精子与卵子成熟时间一致，进行人工授精。
[0014]优选的，所述为翘嘴鳜注射黄体素释放激素类似物和多潘立酮的混合催产剂进行催产，所述LRH
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A的用量为2
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5ug/kg，DOM的用量为2
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5ug/kg；为团头鲂注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素和多潘立酮的混合催产剂进行催产，所述黄体素释放激素类似物的用量为10
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12ug/kg，绒毛膜促性腺激素的用量为300
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500IU/kg，多潘立酮的用量为1
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2ug/kg。
[0015]优选的，所述产卵池中需保持水量，在产卵前3～4h再次注水，停止注水后在静水中催产。
[0016]优选的，所述干法授精具体为：挑选性成熟的母本和父本，分别收集卵子和精液，进行人工干法授精；所述受精卵置于水温为22℃～25℃的净水孵化装置中进行流水孵化。
[0017]优选的，所述饲养具体为：鱼苗全部孵出后，人工去除畸形鱼苗，正常苗于恒温培养箱中继续培育2～3天，待鱼苗点腰后将鱼苗转入预先培肥的池塘中饲养，1～2天后均匀泼洒豆浆，2～3次/天。
[0018]优选的，所述测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂的性状特征具体为，利用流式细胞DNA含量测定、外周血细胞染色体倍性检测方法对制备的天然雌核发育团头鲂杂交鱼进行DNA含量、染色体数目的检测。
[0019]优选的，所述测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂的性状
特征具体为，相同养殖条件下，测定5月龄及12月龄团头鲂与雌核发育团头鲂的体重数据，并对12月龄雌核发育团头鲂雌雄比例进行统计。
[0020]优选的，所述测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂的性状特征具体为，利用质构仪对12月龄鱼的肌肉咀嚼性、弹性、硬度、胶黏性等进行测定。
[0021]更优选的，采取1龄鱼背中部肌肉切成厚20mm
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20mm
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20mm的小块，使用TA.XT.Plus型物性测试仪(英国Stable Micro Systems公司)，平底柱形探头P/36，模拟人牙齿咀嚼食物，对样品进行两次压缩TPA测试。室温条件下，测试前速率5mm/s，测试速本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)挑选成熟雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜作为亲鱼分养，对所述亲鱼人工催产，干法授精，受精后的鱼卵进行孵化；(2)对孵化完成的鱼卵进行饲养，测定获得的团头鲂与翘嘴鳜杂交后代的天然雌核发育团头鲂的性状特征。2.如权利要求1所述的形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，其特征在于，所述成熟雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜的选择和培育具体为：在繁殖期前3～4个月，挑选性成熟特征明显且体征良好的雌性团头鲂和雄性翘嘴鳜作为远缘杂交的亲鱼进行分池专养，繁殖期前一至二个月左右翘嘴鳜保证活饵充足，每隔1～2天流水刺激一次，以促进亲鱼性腺发育成熟。3.如权利要求1所述的形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，其特征在于，所述人工催产具体为：在当年的5月上旬，当水温稳定在22℃以上时，先使用催产素注射父本亲鱼，14～15h后再注射母本亲鱼；注射完毕后按(3～4):1的数量比将母、父本亲鱼放入同一产卵池中，催产，直至其开始顺利产卵和产精。4.如权利要求3所述的形成天然雌核发育团头鲂的杂交方法，其特征在于，所述为翘嘴鳜注射黄体素释放激素类似物和多潘立酮的混合催产剂进行催产，所述LRH
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A的用量为2
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5ug/kg，DOM的用量为2
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5ug/kg；为团头鲂注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素和多潘立酮的混合催产剂进行催产，所述黄体素释放激素类似物的用量为10
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12ug/kg，绒毛膜促性腺激素的用量为300
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500IU/kg...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少军，吴萍，吴昌，曾雅，陶敏，王余德，覃钦博，张纯，
申请(专利权)人：湖南岳麓山水产育种科技有限公司湖南省鱼类苗种繁育科技有限公司，
类型：发明
国别省市：