【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种肿瘤新抗原dna疫苗。
技术介绍
1、在肿瘤细胞中发生的突变可以产生新的自身抗原的表位，这被称为新表位或新抗原。新抗原也可以通过病毒感染、选择性剪接和基因重排来产生。这些异常抗原是新抗原，可以被免疫细胞识别，并由癌细胞基因突变引起。新抗原可以呈现在细胞表面，随后在 mhc分子的作用下被 t 细胞识别。肿瘤抗原可分为肿瘤相关抗原（taa）和肿瘤特异性抗原（tsa）。taa 是一种由未突变基因表达的蛋白，在肿瘤细胞中似乎明显过表达，但在正常细胞中很少表达。taas是正常的宿主蛋白，它们同时受到中枢和外周耐受机制的影响。tsa是一种由体细胞突变引起的新抗原，仅在肿瘤细胞中表达，而在正常细胞中不表达。由于正常细胞不表达 tsa，免疫系统认为它们是非自身的，新抗原特异性免疫反应不受耐受性的影响，而且靶向 tsas 并不容易诱导自身免疫。
2、新一代测序技术的出现为更方便的识别个体肿瘤患者的这些肿瘤特异性抗原提供了机会，并在临床研究中探索针对突变蛋白的治疗方法。基于新抗原的疫苗相比于传统使用的肿瘤相关抗原疫苗有几个优势。首先，新抗原只由肿瘤细胞表达，因此可以引起真正的肿瘤特异性 t 细胞反应，从而防止对非恶性组织的“脱靶”损伤。第二，新抗原是来自体细胞突变的从头表位，它有可能绕过 t 细胞对自身表位的中枢耐受性，从而诱导对肿瘤的免疫反应。因此，个性化的新抗原疫苗提供了增强肿瘤特异性免疫反应的机会，并为免疫治疗增加了一个额外的工具。不仅如此，这些疫苗增强的新抗原特异性 t 细胞应答能够持续存在并
3、新抗原可分为两类：共享的新抗原和个性化的新抗原。共享的新抗原是指在不同的癌症患者中常见，但在正常基因组中不存在的突变抗原。具有高度免疫原性的共享新抗原有潜力被筛选出来，用于治疗具有相同突变基因的患者的广谱治疗性癌症疫苗。个体化新抗原是指大多数新抗原所特有的、与患者之间完全不同的突变抗原。因此个性化的新抗原制备药物只能针对单独的患者，即个性化治疗。 新抗原具有较强的免疫原性，可降低肿瘤细胞免疫逃逸的可能性。然而，在同一肿瘤的不同个体中，由突变的特异性引起的不同类型和数量的新抗原，表现出明显的个体异质性。因此，新抗原在肿瘤免疫治疗中的应用将趋向于个性化的应用。个体化癌症疫苗可以单独工作，或与其他疗法联合工作，以增加抗肿瘤作用的强度和持久性，提高患者的生存率和生活质量，并最终改善患者的癌症治疗结果。癌症疫苗可以有多种形式出现，如多肽疫苗、dc 疫苗、mrna 疫苗和 dna 疫苗等。多肽疫苗是不需要细胞生产的，易于运输，是完全可降解的，但是它的降解可能会产生一种不相关的免疫反应。dc 疫苗的免疫刺激活性较强，其临床效果也已经得到证实，但是成本较高。mrna疫苗也是不需要细胞生产的能够高效的提呈给 dc，主要的缺点就是容易降解。dna 疫苗也是不需要细胞生产的，成本低，可以编码任何基因表位，但是可能会发生突变的风险。个体化癌症疫苗在癌症患者治疗中的可行性、安全性和免疫原性决定了它将是未来的一个重要的发展趋势。预计在可预见的未来，个体化癌症疫苗将使大多数患者能够获得精确的治疗。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种用于肿瘤的新抗原dna疫苗，本专利技术以pvax1为载体，设计一种适用于各种肿瘤新抗原表达的dna疫苗，添加bamhi和ecori两个酶切位点，利于插入各种生物信息学预测的多肽抗原合成的tmgs片段，同时利用f2a元件表达gm-csf因子，改善疫苗发挥作用时的免疫微环境，招募更多的免疫细胞，提高疫苗的有效性。
2、具体的本专利技术提供以下技术方案：
3、一种用于促进肿瘤新抗原表达的重组载体，所述重组载体以pvax1为原始载体，于pvax1的酶切位点hind iii 和 not i之间设置有抗原表达单元，所述抗原表达单元从hindiii位点的右边界顺序依次为kozak、signal peptides、ubiquitous、bamhi、ecori、f2a和gm-csf，kozak序列如seq id no：1所示；signal peptides序列如seq idno：2所示；ubiquitous序列如seq id no：3所示；f2a序列如seq idno：5所示；gm-csf序列如seq idno：6所示。
4、进一步的，所述抗原表达单元 bamhi 和ecori酶切位点之间插入有tmgs序列，所述tmgs序列为针对发生肿瘤的受试者，通过生物信息学筛选获得的至少一种多肽抗原dna片段，所述多肽抗原是由发生肿瘤的受试者癌细胞表达的突变新抗原。
5、进一步的，所述肿瘤包括鼻咽癌、口腔癌、喉癌、甲状腺癌、舌癌；肺癌、食管癌、乳腺癌；胃癌、大肠癌、结肠癌、直肠癌、小肠恶性肿瘤、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸恶性肿瘤、阴茎癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、黑色素瘤或卵巢癌。
6、进一步的，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒含所述的dna疫苗。
7、进一步的，本专利技术提供了一种药物组合物，含有所述的dna疫苗。
8、本专利技术达到的技术效果：
9、本专利技术自主构建的含f2a和gm-csf原件的用于促进肿瘤新抗原表达的重组载体，可以显著（p<0.05）减缓肿瘤的生长速度，改善疫苗发挥作用时的免疫微环境，招募更多的免疫细胞，提高疫苗的有效性，通过本专利技术重组载体设计构建的新抗原dna疫苗（vac1-f2a-gm疫苗），治疗后，肿瘤生长明显被抑制了，与control组相比具有显著性差异（p<0.0001），疫苗治疗的疗效显著，且能够提高cd4+和cd8+t细胞浸润实体肿瘤的能力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种肿瘤新抗原DNA疫苗，其特征在于，所述DNA疫苗以PVAX1为原始载体，于PVAX1的酶切位点Hind III 和 Not I之间设置有抗原表达单元，所述抗原表达单元从Hind III位点的右边界顺序依次为Kozak、Signal peptides、Ubiquitous、BamHI、EcoRI、F2A和GM-CSF，Kozak序列如SEQ ID NO：1所示；Signal peptides序列如SEQ ID NO：2所示；Ubiquitous序列如SEQ ID NO：3所示；F2A序列如SEQ ID NO：5所示；GM-CSF序列如SEQ ID NO：6所示，所述抗原表达单元 BamHI 和EcoRI酶切位点之间插入有TMGs序列，所述TMGs序列为针对发生肿瘤的受试者，通过生物信息学筛选获得的至少一种多肽抗原DNA片段，所述多肽抗原是由发生肿瘤的受试者癌细胞表达的突变新抗原。
2.根据权利要求1所述的肿瘤新抗原DNA疫苗，其特征在于，所述肿瘤包括鼻咽癌、口腔癌、喉癌、甲状腺癌、舌癌；肺癌、食管癌、乳腺癌；胃癌、大肠癌、结肠癌、直肠癌、小肠恶性肿瘤、肾癌、前列
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含权利要求1所述的肿瘤新抗原DNA疫苗。
4.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物含权利要求1所述的肿瘤新抗原DNA疫苗。
...【技术特征摘要】
1.一种肿瘤新抗原dna疫苗，其特征在于，所述dna疫苗以pvax1为原始载体，于pvax1的酶切位点hind iii 和 not i之间设置有抗原表达单元，所述抗原表达单元从hind iii位点的右边界顺序依次为kozak、signal peptides、ubiquitous、bamhi、ecori、f2a和gm-csf，kozak序列如seq id no：1所示；signal peptides序列如seq id no：2所示；ubiquitous序列如seq id no：3所示；f2a序列如seq id no：5所示；gm-csf序列如seq id no：6所示，所述抗原表达单元 bamhi 和ecori酶切位点之间插...
【专利技术属性】
技术研发人员：费俭，曹志伟，荆平，汪源，
申请(专利权)人：上海南方模式生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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