一种樟芝菌丝体的发酵方法和樟芝发酵辅助组合物技术

本发明专利技术公开了一种樟芝菌丝体的发酵方法和樟芝发酵辅助组合物。本发明专利技术提供的方法，包括如下步骤：S1.对樟芝菌株进行液体发酵60

【技术实现步骤摘要】
一种樟芝菌丝体的发酵方法和樟芝发酵辅助组合物


[0001]本专利技术属于生物工程和发酵工程
，具体涉及一种樟芝菌丝体的发酵方法和樟芝发酵辅助组合物。

技术介绍

[0002]樟芝(Antrodia camphorata)，别名牛樟芝、红樟芝、牛樟菇等，属多孔菌科、薄孔菌属，在自然环境中仅寄生于牛樟树上。樟芝在刚被发现时曾被误认为是灵芝的一种，长期以来被民间用于治疗酒精中毒、腹痛腹泻等疑难杂症，事实上樟芝中三萜的种类及含量远超灵芝，是名副其实的药材之王。
[0003]研究表明，樟芝的药效来自它所含的多糖、三萜、黄酮、苯环类、泛醌衍生物、琥珀酸衍生物等成分，其中三萜类化合物是樟芝的核心药理成分，具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖、免疫调节等功能。樟芝子实体中分离得到的多种三萜化合物能够通过细胞毒作用、抑制肿瘤细胞转移等机制等达到抗肿瘤效果；樟芝甲醇粗提物中的三萜化合物表现出显著的抗炎抗氧化活性，能够诱导内源性抗氧化基因表达以及限制活性氧的过度产生来保护肝脏细胞免受氧化应激；樟芝三萜化合物提取物能有效改善胰岛素抵抗，增加肝脏的胰岛素敏感性，对糖尿病和高脂血具有良好的治疗潜力；部分三萜化合物可促进T细胞的增殖与分化，增强免疫反应。因此，樟芝三萜化合物具有极高的研究价值及广阔的应用前景。
[0004]国内外樟芝三萜化合物的药理研究日趋升温，但其产量的低下严重阻碍了樟芝三萜化合物的深入研究与广泛应用。樟芝生长的缓慢性及寄主的专一性导致了野生樟芝资源的极度匮乏，难以满足市场需求。由此，樟芝的人工培养技术应运而生。目前樟芝的人工培养技术主要分为固体栽培法和液体发酵法，前者得到的是樟芝子实体，所产三萜化合物产量较高，但培养周期长，生产成本高，难以实现大规模商业化生产；后者得到的是主要是樟芝菌丝体，培养周期短，生产成本低，易于进行质量控制，是目前主要的樟芝人工培养方式，但所得发酵产物樟芝菌丝体中三萜化合物的含量较低。因此通过各种方法提高液体发酵中樟芝三萜的产量已成为本领域关注和研究的热点。
[0005]专利公开号为CN104212726A(一种牛樟菌的液体发酵培养基)的专利公开了另一种提高樟芝发酵产生三萜化合物的方法，但其利用大量的沉水樟木屑为原料，一方面由于沉水樟木为名贵木材价格较贵，另一方面沉水樟木生长缓慢，难以达到稳定的产量或实现产业化；专利公开号为CN104126412A的专利，公开了一种添加萜品醇(松油醇)促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法，公开了在樟芝发酵过程中添加单一的前体物质来促进樟芝菌丝生长以及萜类化合物积累的方法，该方法在发酵时间为12天，使樟芝生物量提高6％以及三萜化合物产量提高36％，但其三萜化合物产量仍不高，培养周期较长。因此，如何在现有的前体物质的基础上，开发一种更适合规模化、持续生产的樟芝液体发酵培养基的方法，实现有效提高樟芝发酵中三萜化合物的产量，对于樟芝发酵及其上下游产业均具有重大意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种樟芝菌丝体的发酵方法，该方法相比现有技术可在较短发酵时间内，使樟芝液体发酵后得到的樟芝菌丝体中，三萜化合物的产量更高。
[0007]本专利技术的又一目的是提供上述方法制备得到的樟芝发酵菌丝体；本专利技术的再一目的是提供上述樟芝发酵菌丝体在作为提取三萜化合物的原料中的应用。
[0008]本专利技术的再一目的是提供一种樟芝发酵辅助组合物，该组合物可用于樟芝菌丝体发酵得到三萜化合物的产量更高的樟芝菌丝体。
[0009]本专利技术为了实现上述目的，采用以下技术方案：
[0010]一种樟芝菌丝体的发酵方法，包括如下步骤：
[0011]S1.对樟芝菌株进行液体发酵60
‑
120h；
[0012]S2.向发酵得到的樟芝菌株液体发酵液中添加前体物质，继续发酵120h以上，得到所述樟芝菌丝体；
[0013]所述前体物质为辅酶Q0、对羟基苯甲酸、芳樟醇和α
‑
松油醇，并使得添加前体物质后的发酵液中辅酶Q0的含量为100
‑
500mg/L、对羟基苯甲酸的含量为20
‑
300mg/L、芳樟醇的含量为0.1
‑
0.5mg/L、α
‑
松油醇的含量为0.3
‑
0.7mg/L。
[0014]本专利技术通过实验发现在樟芝液体发酵60
‑
120h后，将前体物质辅酶Q0 100
‑
500mg/L、对羟基苯甲酸20
‑
300mg/L、芳樟醇0.1
‑
0.5mg/L和α
‑
松油醇0.3
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0.7mg/L一起加入到樟芝液体发酵液中继续发酵120h后，前体物质可以在樟芝菌丝体发酵中相互配伍、有利于樟芝次级代谢合成萜类化合物，大大促进樟芝菌丝体发酵中三萜化合物的合成和积累。因此，该特定前体物质可作为促樟芝发酵产生三萜化合物的激发子，应用于提高樟芝菌丝体发酵生产三萜化合物产量。
[0015]进一步地，步骤S2中所述向发酵得到的樟芝菌株液体发酵液中添加前体物质，其添加的时机为在步骤S1中樟芝液体发酵72h后加入。
[0016]进一步地，步骤S2中所述添加前体物质后的发酵液中辅酶Q0的含量为300mg/L、对羟基苯甲酸的含量为100mg/L、芳樟醇的含量为0.3mg/L、α
‑
松油醇的含量为0.5mg/L。
[0017]本专利技术中，可以采用任何已知的樟芝菌株作为原料，现有的樟芝菌株生理生化性质接近。作为一种具体例子，本专利技术中，采用保藏号为ATCC No.200183的樟芝(Antrodia camphorata)菌株。
[0018]进一步地，步骤S2中所述向发酵得到的樟芝菌株液体发酵液中添加前体物质，其加入方法为先分别将辅酶Q0溶解在溶剂DMSO中，将对羟基苯甲酸、芳樟醇、α
‑
松油醇溶解在溶剂乙醇中；然后再添加到樟芝液体发酵液中。
[0019]本专利技术中将辅酶Q0和对羟基苯甲酸、芳樟醇、α
‑
松油醇分别用溶剂进行溶解，可以利于在添加到樟芝液体发酵液时，前体物质充分在发酵液里扩散。
[0020]进一步地，步骤S1中樟芝液体发酵其利用樟芝种子液按15
‑
25％(v/v)的接种量转接入基础发酵培养基形成樟芝液体发酵液，进行摇瓶发酵培养。
[0021]进一步地，所述基础发酵培养基其组成为：葡萄糖15
‑
25g/L，酵母粉0.5
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3g/L，七水硫酸镁1
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5g/L，磷酸二氢钾1
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5g/L，pH值为4
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5。
[0022]进一步地，所述樟芝种子液的制备方法为：将保藏号为ATCC No.200183的樟芝菌株接种在PDA斜面培养基中培养20
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30天；培养完成后取斜面培养基的斜面上的菌块，移至
种子培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种樟芝菌丝体的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.对樟芝菌株进行液体发酵60
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120h；S2.向发酵得到的樟芝菌株液体发酵液中添加前体物质，继续发酵120h以上，得到所述樟芝菌丝体；所述前体物质为辅酶Q0、对羟基苯甲酸、芳樟醇和α
‑
松油醇，并使得添加前体物质后的发酵液中辅酶Q0的含量为100
‑
500mg/L、对羟基苯甲酸的含量为20
‑
300mg/L、芳樟醇的含量为0.1
‑
0.5mg/L、α
‑
松油醇的含量为0.3
‑
0.7mg/L。2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，步骤S2中所述向发酵得到的樟芝菌株液体发酵液中添加前体物质，其添加的时机为在步骤S1中樟芝液体发酵72h后加入。3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，步骤S2中添加前体物质后的发酵液中辅酶Q0的含量为300mg/L、对羟基苯甲酸的含量为100mg/L、芳樟醇的含量为0.3mg/L、α
‑
松油醇的含量为0.5mg/L。4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述樟芝菌株为保藏号ATCC No...

【专利技术属性】
技术研发人员：许正宏，陆震鸣，罗志珊，胡苗苗，史劲松，耿燕，庄学宝，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：