一种特立帕肽含有的杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种特立帕肽含有的杂质的检测方法，属于生物医学检测技术领域。本发明专利技术解决了现有特立帕肽检测标准在检测过程中容易使特立帕肽氧化，使检测的氧化杂质水平高于真实值，且对部分插入肽杂质和同分异构杂质无检测能力的问题。本发明专利技术以阴离子活性剂十二烷基硫酸钠为流动相，其带有的负电荷可与多肽表面正电荷结合，增强了流动相对多肽的洗脱能力，增强了杂质和特立帕肽的分离能力，可准确检测出特立帕肽中插入肽和异亮氨酸的同分异构杂质的含量。同时，本发明专利技术在流动相中还加入抗氧剂苯酚，保证了检测过程中特立帕肽不被氧化，确保氧化杂质检测的准确度。确保氧化杂质检测的准确度。确保氧化杂质检测的准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种特立帕肽含有的杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种特立帕肽含有的杂质的检测方法，属于生物医学检测


技术介绍

[0002]特立帕肽化学名为L
‑
丝氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
丝氨酰
‑
L
‑
α
‑
谷氨酰
‑
L
‑
异亮氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
甲硫氨酰
‑
L
‑
组氨酰
‑
L
‑
天冬酰胺酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
甘氨酰
‑
L
‑
赖氨酰
‑
L
‑
组氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
天冬酰胺酰
‑
L
‑
丝氨酰
‑
L
‑
甲硫氨酰
‑
L
‑
α
‑
谷氨酰
‑
L
‑
精氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
α
‑/>谷氨酰
‑
L
‑
色氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
精氨酰
‑
L
‑
赖氨酰
‑
L
‑
赖氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺酰
‑
L
‑
α
‑
天冬氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
组氨酰
‑
L
‑
天冬酰胺酰
‑
L
‑
苯丙氨酸，为白色或类白色粉末，分子式为C
181
H
291
N
55
O
51
S2，分子量为4117.8。本品适用于有骨折高发风险的绝经后妇女骨质疏松症的治疗，可显著降低绝经后妇女椎骨和非椎骨骨折风险，但对降低髋骨骨折风险的效果尚未证实；国外应用治疗骨损伤；骨质疏松症；男性骨质疏松症；绝经后骨质疏松。
[0003]特立帕肽为人甲状旁腺激素类似物，具有与天然甲状旁腺激素（PTH）N端34个氨基酸序列相同的结构，它可以与PTH
‑
1受体结合，发挥PTH对骨骼与肾脏的生理作用，同时不存在C端肽对骨代谢的不利影响。研究表明该药可以有效增加成骨细胞数量和活性，从而促进新骨生产成，增加骨密度，降低骨折风险，并可与其他治疗骨质疏松症药物联合应用增强疗效。
[0004]特立帕肽的含有的有关物质杂质通常由起始物料中引入的杂质，化学合成反应的副产物及存储过程中的降解物组成。这些有关物质会降低分子状态特立帕肽的占比，从而不仅会降低药效，还会增大药物的副作用，给患者带来安全隐患。因此对特立帕肽中有关物质的检测及控制成为药物制备过程不可忽视的方面。
[0005]特立帕肽是由保护氨基酸经固相合成制备所得的肽类化合物，其结构含有2分子甲硫氨酸，甲硫氨酸易氧化，故特立帕肽易产生3种氧化杂质；特立帕肽结构中含有亮氨酸和异亮氨酸，两者为同分异构体，其起始物料中互为杂质，形成了特立帕肽的同分异构杂质；起始物料与合成过程中可产生消旋氨基酸的杂质肽；特立帕肽有34个氨基酸组成，合成过程中易形成插入肽和缺失肽。
[0006]现有检测方法中USP40、EP 9.0、JS20160050均收录了特立帕肽有关物质检测方法，JS20160050、JS20100009收录了特立帕肽注射液的有关物质检测方法，其中3个标准的原料检测方法相同，2个制剂的检测方法一致。但是上述检测标准在检测过程中容易使特立帕肽氧化，使检测的氧化杂质水平高于真实值，且对部分插入肽杂质和同分异构杂质无检测能力。

技术实现思路

[0007]本专利技术为了解决现有技术存在的上述问题，提供一种特立帕肽含有的杂质的检测方法。
[0008]本专利技术的技术方案：
本专利技术的目的是提供一种特立帕肽含有的杂质的检测方法，该按方法为采用液相色谱法对特立帕肽进行分析，其中流动相A由0.05mol/L钠盐溶液与乙腈按照体积比为90:10混合而成，流动相B由0.05mol/L钠盐溶液与乙腈按照体积比为50:500混合而成；钠盐溶液制备过程为：28.8g十二烷基硫酸钠和0.05g苯酚溶于1800ml水中，使用浓度为85%磷酸溶液调节pH至2.3，定容至2000mL。
[0009]进一步限定，色谱柱为ZORBAX 300SB
‑
C18色谱柱，150
×
4.6mm，3.5μm，300
Å
。
[0010]进一步限定，检测波长为214nm。
[0011]进一步限定，流速为1.0ml/min。
[0012]进一步限定，柱温为40
°
C。
[0013]进一步限定，进样体积20μl。
[0014]进一步限定，梯度洗脱条件为：0min，流动相A为100%，流动相B为0%；5min，流动相A为69%，流动相B为31%；47min，流动相A为60%，流动相B为40%；57min，流动相A为40%，流动相B为60%；62min，流动相A为0%，流动相B为100%；67min，流动相A为100%，流动相B为0%；75min，流动相A为100%，流动相B为0%。
[0015]进一步限定，系统适用性溶液制备过程为：将特立帕肽对照品及多种杂质加入到流动相A中，制成每1mL溶液中含有0.8mg特立帕肽，且含4μg各杂质的系统适用性溶液。
[0016]更进一步限定，杂质为[Met
18
(O)]特立帕肽、[Met8(O)]特立帕肽、[Met8(O)，Met
18
(O)]特立帕、[rhPTH(1
‑
30)]特立帕肽、 Val
‑
Arg
‑
rhPTH（1
‑
34）特立帕肽和[des+Ser1]特立帕肽。
[0017]进一步限定，杂质来自于存储过程中的降解物和/或氧化物、合成过程中副产物。
[0018]与现有技术相比本申请具有以下有益效果：（1）本专利技术利用多肽为两性化合物，其分子表面同时带有正负电荷的特性，以阴离子活性剂十二烷基硫酸钠为流动相，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，采用液相色谱法对特立帕肽进行分析，其中流动相A由0.05mol/L钠盐溶液与乙腈按照体积比为90:10混合而成，流动相B由0.05mol/L钠盐溶液与乙腈按照体积比为50:500混合而成；所述的钠盐溶液制备过程为：28.8g十二烷基硫酸钠和0.05g苯酚溶于1800ml水中，使用浓度为85%磷酸溶液调节pH至2.3，定容至2000mL。2.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，色谱柱为ZORBAX 300SB
‑
C18色谱柱，150
×
4.6mm，3.5μm，300
Å
。3.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，检测波长为214nm。4.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，流速为1.0ml/min。5.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，柱温为40
°
C。6.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，进样体积20μl。7.根据权利要求1所述的特立帕肽含有的杂质的检测方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0min，流动相A为100%...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽莉，黄天一，侯亚兰，高巍巍，姜涛，孙宝伟，张凤莲，张德方，秦玲玉，何欣丽，
申请(专利权)人：哈尔滨吉象隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：