一种LC-MS测定苯甲酸阿格列汀中R-3-氨基哌啶二盐酸盐含量的方法技术

一种LC

【技术实现步骤摘要】
一种LC
‑
MS测定苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐含量的方法


[0001]本专利技术属于苯甲酸阿格列汀质量检测
，特别是一种LC
‑
MS测定苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐含量的方法。

技术介绍

[0002]苯甲酸阿格列汀是丝氨酸蛋白酶二肽基肽酶IV(DPP
‑
IV)抑制剂，能维持体内胰高血糖素样肽1(GLP
‑
1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)的水平，促进胰岛素的分泌，从而发挥降糖疗效，适用于治疗2型糖尿病。苯甲酸阿格列汀化学名为2
‑
[[6
‑
[(3R)
‑3‑
氨基
‑1‑
哌啶基]‑
3,4
‑
二氢
‑3‑
甲基
‑
2,4
‑
二氧代
‑
1(2H)
‑
嘧啶基]甲基]苯甲腈苯甲酸盐，其形态为白色或类白色的结晶性粉末。在二甲亚砜中易溶，在甲醇中溶解，在水中略溶，在乙醇中微溶。其分子式为：C
18
H
21
N5O2.C7H6O2，分子量为：461.51。化学结构如下。
[0003]在合成该化合物的过程中，需要采用中间体，有些重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，是药物质量控制中的有关物质，对于苯甲酸阿格列汀的合成主要控制的有关物质是中间体R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐，其结构式为。
[0004]对于合成苯甲酸阿格列汀中引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量控制的，因此，实现苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐的分离和检测，在苯甲酸阿格列汀的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。随着制药技术的提升，越来越多的复杂混合物问世，为提高结构解析能力、加快分析速度，传统的HPLC检测已不再满足药品质量控制的要求。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是针对上述问题，提供一种采用LC
‑
MS联用技术将HPLC分离能力和MS定性能力集于一体，对苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐进行快速解析和分析，以提高检测效果。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是一种LC
‑
MS测定苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐含量的方法，是分别量取稀释剂/空白、对照品溶液、定量限溶液、检测限溶液、供试品溶液、低浓度加标供试品溶液、中浓度加标供试品溶液各50
µ
L，进样检测；其中SM3即R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐。
[0007]方法参数如下表。
[0008]溶液配制方法如下。
[0009]稀释剂/空白：乙腈
‑
水=20:80。
[0010]对照品溶液：称取SM3：30mg置10ml量瓶，加入稀释剂溶解，定容，摇匀，使之含SM3为3mg/ml，标记为SM3储备液I。
[0011]移取1.0ml SM3储备液I置10ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为300μg/ml，标记为SM3储备液II。
[0012]移取0.1ml SM3储备液II置10ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为3μg/ml，标记为SM3溶液。
[0013]定量限溶液：移取0.033ml SM3储备液II置10ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为1μg/ml，标记为定量限溶液。
[0014]检测限溶液：移取1.5ml定量限溶液置5ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为0.33μg/ml，标记为检测限溶液。
[0015]供试品溶液：称取496.67mg API置10ml 量瓶，加入三分之二量瓶体积稀释剂，超声溶解，稀释定容，摇匀，标记为供试品溶液。
[0016]低浓度加标供试品溶液：称取504.19mg API置10ml 量瓶，加入三分之二量瓶体积稀释剂，超声溶解，加入0.1ml SM3储备液II，定容，摇匀，标记为Re
‑
LOQ。
[0017]中浓度加标供试品溶液：称取497.00mg API置10ml 量瓶，加入三分之二量瓶体积稀释剂，超声溶解，加入0.1ml SM3储备液II，定容，摇匀，标记为Re
‑
M。
[0018]测定步骤如下。
[0019]取苯甲酸阿格列汀样品适量，用流动相溶解样品，配制成含苯甲酸阿格列汀及其中间体的样品溶液。
[0020]设置流动相流速为1.0ml/min，柱温为35℃，流动相A：水
‑
乙腈
‑
三氟乙酸=1900:100:1；流动相B：水
‑
乙腈
‑
三氟乙酸=1900:100:1；洗脱梯度为。
[0021]取样品溶液30～50μL，注入色谱仪，即可测得苯甲酸阿格列汀样品中SM3的含量。
[0022]与现有技术相比较，本专利技术采用LC
‑
MS联用技术，集HPLC高效的分离能力和MS优越的定性能力于一体，其专属性好、灵敏度高、结构解析能力强、分析速度快；在苯甲酸阿格列汀杂质分析中能够对R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐含量直接进行分析，对R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐可以不经复杂的分离和纯化步骤即可获得样品的色谱和质谱信息，有效提高了检测效果。
附图说明
[0023]图1为SM3在0.9979~4.5360μg/ml浓度范围内的线性关系。
[0024]图2为空白溶液在目标峰处典型图谱。
[0025]图3为空白溶液在SM3出峰处典型图谱。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，以下实施例旨在说明本专利技术而不是对本专利技术的进一步限定，不应以此限制本专利技术的保护范围。
[0027]实施例1：测定苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐（SM3）的含量。
[0028]实验材料。
[0029]对照品信息。
[0030]供试品信息。
[0031]仪器信息。
[0032]试剂信息。
[0033]配制溶液。
[0034]稀释剂/空白：乙腈
‑
水=20:80。
[0035]对照品溶液：称取SM3：30mg置10ml量瓶，加入稀释剂溶解，定容，摇匀，使之含SM3为3mg/ml，标记为SM3储备液I。
[0036]移取1.0ml SM3储备液I置10ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为300μg/ml，标记为SM3储备液II。
[0037]移取0.1ml SM3储本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种LC
‑
MS测定苯甲酸阿格列汀中R
‑3‑
氨基哌啶二盐酸盐含量的方法，其特征在于分别量取稀释剂/空白、对照品溶液、定量限溶液、检测限溶液、供试品溶液、低浓度加标供试品溶液、中浓度加标供试品溶液；采用色谱柱：Agilent Eclipse XDB
‑
CN，250
×
4.6mm，5
µ
m；流动相A：水
‑
乙腈
‑
三氟乙酸=1900:100:1；流动相B：水
‑
乙腈
‑
三氟乙酸=1900:100:1；在流速0.9
‑
1.1ml/min，分流1:1，进样盘温度：N/A℃，柱温30
‑
40℃条件下进样检测，其洗脱梯度和质谱参数为：其溶液配制方法如下：稀释剂/空白：乙腈
‑
水=20:80；对照品溶液：称取SM3：30mg置10ml量瓶，加入稀释剂溶解，定容，摇匀，使之含SM3为3mg/ml，标记为SM3储备液I；移取1.0mlSM3储备液I置10ml量瓶，加入稀释剂，定容，摇匀，使之含SM3为300μg/ml，标记为SM3储备液II；移取0.1mlSM3储备液II置10ml量瓶，加入稀释剂，定容...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉超，罗庆林，宋绍华，冉乾凤，黄敏，龚胡荣，秦毓，张锦林，秦丹，李建平，许欢，
申请(专利权)人：重庆科瑞南海制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：