一种检测白酒中L-乳酸和D-乳酸手性异构体含量的方法技术

本发明专利技术提供一种检测白酒中L

【技术实现步骤摘要】
一种检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法


[0001]本专利技术涉及食品检验领域，具体涉及一种检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法。

技术介绍

[0002]乳酸（Lactic acid），学名2
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羟基丙酸，结构式为CH3CHOHCOOH，相对分子质量为90.08，由于分子内含有一个不对称碳原子，因此具有旋光异构现象，可区分为L
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乳酸和D
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乳酸，当两者以等比例混合时，即成为内消旋的DL
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乳酸。
[0003]自然界中天然的乳酸是L
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乳酸，D
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乳酸主要通过合成产生。D
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乳酸的合成方法可以分为化学合成法、酶法和微生物发酵法。由于人体只有代谢L
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乳酸的L
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乳酸脱氢酶，目前提倡在食品及医药行业中使用L
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乳酸取代目前普遍使用的DL
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乳酸，人体每天摄取D
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乳酸的量限制在100mg/kg体重以下，而对L
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乳酸的摄入量不加限制。
[0004]乳酸是白酒中重要的有机酸，其含量的多少对产品的口味和后味有较大影响。因此，建立能快速、灵敏和高效拆分检测白酒中2种乳酸对映异构体的方法非常必要。
[0005]目前，DL
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乳酸的分离主要是依靠高效液相色谱法，分为两种策略：其一是直接分离，如结合手性色谱柱的高效液相色谱法、利用手性流动相添加剂结合高效液相色谱法；其二是间接分离，选择合适的手性衍生试剂与待测手性化合物形成非对映体结构，然后经常规的HPLC分离。相较于价格昂贵且使用寿命还短的手性色谱柱而言，手性衍生试剂法更为经济且方便。常用的手性衍生试剂有手性羧酸类、手性胺类、光学活性氨基酸类，其中手性胺类适用于羧酸化合物的手性拆分。但是由于白酒中微量成分较为复杂，常规紫外
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可见光、荧光等HPLC的检测会被干扰。
[0006]现有技术公开了一种对白酒中的L
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乳酸和D
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乳酸进行分离和测定的方法（参见“高效液相色谱法对白酒中的L
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乳酸和D
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乳酸的手性分离和测定”江锋等，酿酒科技，2019年第9期，93
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97页）：白酒用超纯水稀释后，经0.22μm滤膜过滤后用配备二极管阵列检测器的高效液相系统检测，检测波长为254nm，检测色谱柱为手性柱Chirex 3126 (D)
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penicillami（4.6mm
×
250mm，5μm），流动相为0.002mol/L CuSO4溶液（溶剂为5%的异丙醇溶液）。采用该方法测定L
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乳酸和D
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乳酸的检出限为5mg/L，仪器分析时间约20min，其检测灵敏度和检测效率仍有待提升。
[0007]采用柱前衍生
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超高效液相色谱
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串联质谱法分离和测定白酒中DL
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乳酸异构体的方法未见报道。

技术实现思路

[0008]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中采用高效液相色谱法对白酒中L
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乳酸和D
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乳酸的手性分离和测定灵敏度不高的缺陷，从而提供一种新的检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法。
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
本专利技术提供一种检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法，包括以下步骤：（1）配制标准溶液及衍生：称取L
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乳酸标准品和D
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乳酸标准品，分别加入溶剂溶解并配制成所需浓度的标准溶液，然后加入试剂A、试剂B和试剂C进行衍生，所述试剂A为手性胺的乙腈溶液，所述试剂B为三苯基膦的乙腈溶液，所述试剂C为2,2'
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二硫二吡啶的乙腈溶液，所述试剂A中手性胺的浓度为1.0mmol/L，所述试剂B中三苯基膦的浓度为10mmol/L，所述试剂C中2,2'
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二硫二吡啶的浓度为10mmol/L；（2）配制供试品溶液：取酒样在烘箱中蒸干，加入乙腈复溶，然后加入所述试剂A、试剂B和试剂C进行衍生，将衍生产物去除溶剂后溶解流动相中，得到供试品溶液；（3）含量测定：通过超高效液相色谱
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串联质谱法测定衍生后的标准溶液以及供试品溶液中L
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乳酸衍生物和D
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乳酸衍生物的峰面积，根据标准曲线法计算L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体的含量，色谱条件包括：流动相为甲酸、甲醇、乙腈和水的混合溶液，其中，甲酸、甲醇、乙腈和水的体积比为0.1：1.6：0.4：98。
[0010]进一步地，步骤（3）中，色谱条件还包括：柱温为30℃；进样量为1.0μL；流速为0.3mL/min。
[0011]进一步地，步骤（3）中，色谱条件还包括：ACQUITY Ultra Performance LC超高效液相色谱仪；色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C
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色谱柱，1.7μm，100mm
×
2.1mm。
[0012]进一步地，步骤（3）中，质谱条件包括：ACQUITY TQD电喷雾串联四级杆质谱仪；电喷雾离子源；多反应监测模式；正离子模式；毛细管电压3.00kV；锥孔气体流量50~150L/h；雾化气体流量7.0L/h；碰撞气体流量0.15mL/min；碰撞能20~25eV；碰撞池出口电位5V；脱溶温度500℃；脱溶气体流量1000L/h；监测离子对m/z 227.2
→
156.0。
[0013]进一步地，步骤（1）中，所述溶剂为乙腈。
[0014]进一步地，步骤（1）中，标准溶液、试剂A、试剂B、试剂C的体积比为1：1：1：1。
[0015]进一步地，步骤（2）中，酒样、乙腈、试剂A、试剂B、试剂C和流动相的体积比为1：1：1：1：1：4。
[0016]进一步地，步骤（1）和（2）中，衍生时间为至少90min。
[0017]进一步地，步骤（1）和（2）中，所述衍生在室温下进行。
[0018]进一步地，步骤（2）中，烘箱温度为50℃。
[0019]进一步地，使用分析软件MassLynx，4.1版进行系统控制和数据处理。
[0020]本专利技术技术方案，具有如下优点：1.本专利技术首次提出一种采用柱前衍生
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超高效液相色谱
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串联质谱法分离和测定白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制标准溶液及衍生：称取L
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乳酸标准品和D
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乳酸标准品，分别加入溶剂溶解并配制成所需浓度的标准溶液，然后加入试剂A、试剂B和试剂C进行衍生，所述试剂A为手性胺的乙腈溶液，所述试剂B为三苯基膦的乙腈溶液，所述试剂C为2,2'
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二硫二吡啶的乙腈溶液，所述试剂A中手性胺的浓度为1.0mmol/L，所述试剂B中三苯基膦的浓度为10mmol/L，所述试剂C中2,2'
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二硫二吡啶的浓度为10mmol/L；（2）配制供试品溶液：取酒样在烘箱中蒸干，加入乙腈复溶，然后加入所述试剂A、试剂B和试剂C进行衍生，将衍生产物去除溶剂后溶解流动相中，得到供试品溶液；（3）含量测定：通过超高效液相色谱
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串联质谱法测定衍生后的标准溶液以及供试品溶液中L
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乳酸衍生物和D
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乳酸衍生物的峰面积，根据标准曲线法计算L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体的含量，色谱条件包括：流动相为甲酸、甲醇、乙腈和水的混合溶液，其中，甲酸、甲醇、乙腈和水的体积比为0.1: 1.6 : 0.4 : 98。2.根据权利要求1所述的检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法，其特征在于，步骤（3）中，色谱条件还包括：柱温为30℃；进样量为1.0μL；流速为0.3mL/min。3.根据权利要求1所述的检测白酒中L
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乳酸和D
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乳酸手性异构体含量的方法，其特征在于，步骤（3）中，色谱条件还包括：ACQUITY Ultra Performance LC超高效液相色谱仪；色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C<...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯润辉，吴弈萱，林媛，段嘉耘，李晓斌，
申请(专利权)人：中轻检验认证有限公司，
类型：发明
国别省市：