一种氯毒素多肽的定点环化方法技术

一种氯毒素多肽的定点环化方法，属于多肽技术领域。为了解决现有氯毒素合成方法中存在的由于二硫键错配而产生异构体杂质，致使产物的纯度和收率偏低的问题，本发明专利技术提供了一种采用定点环化形成四对二硫键合成氯毒素多肽的方法，该方法包括固相合成氯毒素多肽前体树脂；固相氧化形成第一对二硫键；固相氧化形成第二对二硫键；固相氧化形成第三对二硫键；液相氧化形成第四对二硫键。该方法采用特定的氨基酸侧链保护基，在环化过程中定点形成二硫键，减少了错配副产物的生成，大大提高了氯毒素多肽的粗品纯度，提高了粗品收率，降低了生产成本，适用于规模化生产。适用于规模化生产。适用于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种氯毒素多肽的定点环化方法


[0001]本专利技术属于多肽合成
，具体涉及一种氯毒素多肽的定点环化方法。

技术介绍

[0002]氯毒素(chlorotoxin)是一种蝎毒素多肽，从以色列蝎子(Leiurusquinquestraq Chemicalbooktum)分离得到，其作为人体神经胶质瘤选择性靶向新药和诊断(包括级别判断)的特异标记有着巨大的应用前景。
[0003]研究发现，人脑星形细胞瘤产生一种独特的电压依赖的氯离子电流(称GCC电流，其氯离子通道称GCC通道)，它在人正常细胞(包括正常的神经胶质细胞)以及非神经胶质来源的人体肿瘤细胞中均不产生，这种氯电流可以被Cl
‑
通道抑制剂氯毒素有效抑制，并导致脑瘤细胞繁殖速度的改变，推测Cl
‑
通道参与了星形细胞瘤生长的调控。对氯毒素敏感的GCC电流在植入的神经胶质瘤细胞中持续出现，而在相邻的正常宿主神经胶质细胞中不出现。证实这种独特的氯离子通道是神经胶质瘤所特有的。氯毒素对这种氯离子通道的选择性结合提供了一个鉴定和治疗神经胶质瘤的有效的新途径本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氯毒素多肽的定点环化方法，其特征在于，所述定点环化方法包括以下步骤：1)制备氯毒素多肽前体树脂：Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH和载体树脂反应，获得Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
树脂，以Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
树脂为固相载体，在活化体系存在下，采用逐一偶联的方式按照C端到N端的顺序偶联Fmoc
‑
AA
‑
OH，获得氯毒素多肽前体树脂，其中对应氯毒素多肽第2位、第19位的Cys侧链采用Mtt保护，对应氯毒素多肽第5位、第28位的Cys侧链采用Trt保护，对应氯毒素多肽第16位、第33位的Cys侧链采用Acm保护，对应氯毒素多肽第20位、第35位的Cys侧链采用Dpm保护；2)用脱保护剂脱除步骤1)所得的氯毒素多肽前体树脂的Mtt保护基团；3)用氧化剂氧化步骤2)所得的氯毒素多肽前体树脂，形成第一对二硫键，得到含单二硫环的氯毒素多肽前体树脂；4)用脱保护剂脱除步骤3)所得的含单二硫环的氯毒素多肽前体树脂的Trt保护基团；5)用氧化剂氧化步骤4)所得的单二硫环肽，形成第二对二硫键，得到双二硫环肽；6)用脱保护剂脱除步骤5)所得的双二硫环肽中Cys的Acm保护基团，同时氧化形成第三对二硫键；7)用裂解液切割步骤6)所得的含三对二硫环的氯毒素多肽前体树脂，同时脱除Dpm保护基团；8)用氧化剂氧化步骤7)所得的三对二硫环肽，形成第四对二硫键，得到含四对二硫环肽的氯毒素多肽；所述含四对二硫环肽氯毒素多肽的氨基酸顺序如SEQ ID NO.1所示；二硫键分别位于Cys2‑
19
、Cys5‑
28
、Cys
16
‑
33
和Cys
20
‑
35
；所述Cys2及Cys
19
的单体为Fmoc
‑
Cys(Mtt)
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：余荣熹，赵宇坤，何欣丽，王艳，付晓明，赵彩红，于勇，刘洋，李国兴，黄天一，
申请(专利权)人：哈尔滨吉象隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：