生姜根状茎、地上茎和叶片中姜辣素的液相色谱-串联质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种生姜根状茎、地上茎和叶片中姜辣素的液相色谱

【技术实现步骤摘要】
生姜根状茎、地上茎和叶片中姜辣素的液相色谱
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串联质谱检测方法


[0001]本专利技术涉及一种生姜根状茎、地上茎和叶片中姜辣素的液相色谱
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串联质谱检测方法，属于检测


技术介绍

[0002]生姜中的姜辣素具有较强的消炎、杀菌及抗癌作用，是生姜中起药用和保健作用的重要成分，主要包括姜酚、姜烯酚、姜酮等。目前姜辣素类化合物的提取方法主要有压榨法、溶剂提取法、柱层析法、超临界CO2萃取法、微波提取法、超声波提取法和酶解法等，其中溶剂提取法常用溶剂有乙腈、乙醚、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸乙酯等。检测方法主要有溶出伏安法、薄层色谱法、荧光分析法、紫外可见分光光度法、液相色谱法(LC)和液相色谱
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串联质谱法(LC
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MS/MS)等。溶出伏安法、薄层色谱法、荧光分析法和紫外可见分光光度法只能定量出姜辣素的总含量，无法对各组成成分进行分析；液相色谱法可以利用标准品定量出姜辣素的含量，但其步骤和计算较为繁琐；而液相色谱
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串联质谱法可实现生姜中各姜辣素化合物的定性和定量检测。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种生姜中姜辣素的液相色谱
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串联质谱检测方法，适用于对生姜中三个组织(根状茎、地上茎和叶片)中姜辣素的检测，为生姜的品种选育、品质评价和品质提升提供可靠的技术手段。
[0004]本专利技术提供的生姜中姜辣素的液相色谱
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串联质谱检测方法，包括如下步骤：/>[0005]S1、生姜组织经预处理后粉碎过筛得生姜粉末；
[0006]S2、向所述生姜粉末中加入甲醇进行提取，离心后取上清液；
[0007]S3、采用液相色谱
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串联质谱法检测所述上清液，即实现所述生姜中姜辣素的定性定量检测。
[0008]本专利技术检测方法中，所述生姜组织包括根状茎、地上茎和叶片。
[0009]所检测的姜辣素包括姜酮、6
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姜酚、6
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姜烯酚、8
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姜酚、1
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脱氢6
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姜酮、10
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姜酚、8
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姜烯酚和10
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姜烯酚等8种化合物。
[0010]本专利技术检测方法中，步骤S1中，所述预处理的步骤如下：
[0011]将所述生姜组织速冻后进行冷冻干燥，可在液氮中进行速冻；
[0012]所述冷冻干燥的温度为
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60～
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70℃；
[0013]所述生姜粉末的粒度为40～80目；
[0014]可采用研磨的方式粉碎；
[0015]可在超低温的条件下(如
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80℃超低温冰箱)中保存待测。
[0016]冷冻干燥在低温条件下进行，样品中易挥发性成分损失很小，可最大程度保留生姜样品品质成分；且干燥在真空条件下进行，可避免空气中的氧气等与样品中成分发生化
学反应。生姜中的姜酚类化合物不稳定，在热条件下可转化为姜烯酚类化合物，因此冷冻干燥后再进行粉碎可较大程度保留生姜中的姜酚类化合物。
[0017]本专利技术检测方法中，所述甲醇的用量为：20～40mL/g所述生姜粉末，优选20mL/g；
[0018]所述提取包括依次进行的超声和震荡；
[0019]所述超声的时间为30～90min，优选60min，温度为10～25℃，优选25℃；
[0020]所述震荡的时间为60～90min，优选60min。
[0021]本专利技术检测方法中，步骤S2中，所述离心的条件如下：
[0022]温度为4～10℃，转速为10000～14000rpm，优选在4℃、10000rpm的条件下离心10min；
[0023]在步骤S3之前，将所述上清液过0.22μm滤膜。
[0024]本专利技术检测方法中，步骤S3中，所述液相色谱
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串联质谱法中液相色谱的检测条件如下：
[0025]色谱柱：C18柱；
[0026]柱温箱温度：35℃；
[0027]流动相：A相为含0.1％甲酸和2mM甲酸铵的水溶液，B相为含0.1％甲酸和2mM甲酸铵的甲醇溶液；
[0028]梯度洗脱：0～1min，85％A相，15％B相；1～5min，50％A相，50％B相；5～8min，20％A相，80％B相；8～10min，0％A相，100％B相；10～15min，0％A相，100％B相；
[0029]流速：0.4mL/min；
[0030]样品进样量：5μL。
[0031]本专利技术检测方法中，步骤S3中，所述液相色谱
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串联质谱法中质谱的检测条件如下：
[0032]离子源类型：电喷雾离子源(H
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ESI)；
[0033]扫描方式：多反应监测(MRM)；
[0034]喷雾电压(Ion Spray Voltage)：正离子模式3600V，负离子模式2500V；
[0035]质谱离子源温度：325℃；
[0036]鞘气(Sheath Gas)：30Arb；
[0037]辅助气(Aux Gas)：10Arb；
[0038]尾气(Sweep Gas)：0Arb。
[0039]本专利技术检测方法进行定量检测时，可采用标准曲线法(外标法)；
[0040]根据化合物的极性不同，分别采用甲醇和二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂配置标准品储备溶液。首先在分析天平上准确称取准量的标准品(精确到0.01mg)，将称好标准品转移至10mL的容量瓶中，利用甲醇或DMSO将标准品溶解并定容到容量瓶中，配制完成的标准品储备溶液，放置于
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20℃冰箱中保存。在标准品储备溶液的基础上用甲醇稀释为1～2000μg/L的混合标准工作溶液，于
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20℃冰箱保存备用；各标准溶液均现用现配。
[0041]本专利技术检测方法具有如下有益技术效果：
[0042]目前生姜中姜辣素的检测方法大都是对姜酚、姜烯酚、姜酮中某一类化合物或某几种化合物进行定量分析，区分度及精确度较低，采用LC
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MS/MS方法对生姜中这8种姜辣素类化合物进行检测的方法尚未见报道，而多重反应监测MRM模式定量检测灵敏度高、特异性
好。因此，本专利技术检测方法的开发是生姜中姜辣素类特征品质成分形成规律及机制研究的重要前提和基础，为生姜的品种选育、品质评价和品质提升提供了可靠的技术手段。
附图说明
[0043]图1为不同提取溶剂对应回收率统计直方图。
[0044]图2为不同提取温度对应回收率统计直方图。
[0045]图3为不同超声提取时间对应回收率统计直方图。
[0046]图4为不同震荡提取时间对应回收率统计直方图。
[0047]图5为8种姜辣素的离子对色谱图。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生姜中姜辣素的液相色谱
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串联质谱检测方法，包括如下步骤：S1、生姜组织经预处理后粉碎过筛得生姜粉末；S2、向所述生姜粉末中加入甲醇进行提取，离心后取上清液；S3、采用液相色谱
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串联质谱法检测所述上清液，即实现所述生姜中姜辣素的定性定量检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述生姜组织为根状茎、地上茎和叶片。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述姜辣素包括姜酮、6
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姜酚、6
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姜烯酚、8
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姜酚、1
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脱氢6
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姜酮、10
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姜酚、8
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姜烯酚和10
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姜烯酚。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的检测方法，其特征在于：步骤S1中，所述预处理的步骤如下：将所述生姜组织速冻后进行冷冻干燥；所述冷冻干燥的温度为
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60～
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70℃；所述生姜粉末的粒度为40～80目。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述甲醇水溶液中，甲醇的体积含量为0.1％～0.2％；所述甲醇水溶液的用量为：20～40mL/g所述生姜粉末。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁瑞，钱永忠，刘秀华，邱静，刘平香，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：