由C-1抑制剂耗尽的血浆生产免疫球蛋白制剂的方法技术

描述了一种用于由C1

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】quarantaine de tous les lots，由AFSSAPS于2010年9月9日在线出版；以及Questions and answers on the suspension of the marketing authorisations for Octagam(human normal immunoglobulin 5％and 10％)，由European Medicines Agency于2010年9月23日在线出版)。
[0009]WO2014113659A1公开了一种从间
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α抑制剂蛋白(IαIp)耗尽的血液产品材料中分离出一种或多种血液产品的方法。该血液产品是通过将IαIp耗尽的冷沉淀物贫乏血浆(cryo
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poor plasma)与DEAE载体接触来从所述IαIp耗尽的冷沉淀物贫乏血浆中层析分离出来的。该参考文献没有公开C1
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INH耗尽的血浆上清液用于制造IgG的用途。它也没有公开用肝素处理血浆上清液从而降低IgG中的酰胺分解和促凝血活性。
[0010]由于对用于IgG制备的起始材料的有限供应和在纯化工艺期间大量IgG的损失的担忧日益增加，本领域中迫切需要提供一种增加用于制造IgG的大量可替代起始材料的可用性的方法。

技术实现思路

[0011]本专利技术解决了这些和其他问题。在一个实施方案中，本专利技术基于以下发现：C1
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INH耗尽的血浆上清液可用作用于制备免疫球蛋白G(IgG)富集级分的起始材料，因此使得可获得用于制备IgG的另一种起始材料。最近对这些组合物的酰胺分解含量与施用了血浆衍生的蛋白质组合物的患者的血栓栓塞事件的发生的关注已经突出了本领域对用于在这些生物制剂的制造期间减少丝氨酸蛋白酶(例如，FXIa和FXIIa)和丝氨酸蛋白酶酶原(例如，FXI和FXII)的方法的需要。有利地，本专利技术至少部分基于令人惊讶的发现，即肝素可被用于在分级分离工艺期间将促凝血和酰胺分解活性降低至可接受的水平。还提供了具有降低的丝氨酸蛋白酶活性、丝氨酸蛋白酶含量和/或丝氨酸蛋白酶酶原含量的治疗性血浆衍生蛋白质组合物。还提供了通过施用本专利技术的组合物来治疗或预防疾病的方法。
[0012]在一个实施方案中，本专利技术提供了用于由包含免疫球蛋白G(IgG)的C1
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INH耗尽的上清液级分制备IgG富集级分的方法。该方法包括：
[0013](a)使C1
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INH耗尽的上清液级分与肝素接触，从而形成肝素化的C1
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INH耗尽的级分；以及
[0014](b)从肝素化的C1
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INH耗尽的级分中分离IgG，从而形成IgG富集级分。
[0015]在本文所述的方法的一个实施方案中，上清液级分是在C1
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抑制剂吸附后产生的上清液。
[0016]在示例性实施方案中，上清液级分是血浆上清液。
[0017]在一个实施方案中，血浆上清液是C1
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INH耗尽的冷沉淀物贫乏血浆。
[0018]在各种实施方案中，血浆上清液源自双耗尽的冷沉淀物贫乏血浆(DDCPP)。
[0019]在示例性实施方案中，上清液级分被耗尽了选自因子II、VII、IX、X以及它们的混合物的一种或多种其他凝血因子。
[0020]在一个实施方案中，在进一步加工之前将上清液级分浓缩至正常血浆的蛋白质值。
[0021]在示例性实施方案中，肝素以每mL上清液级分约1至约20单位的量添加。
[0022]在示例性实施方案中，肝素以每mL上清液级分约5至约10单位的量添加。
[0023]在一个实施方案中，肝素以每mL上清液级分约5单位的量添加。
[0024]在各种实施方案中，肝素以每mL上清液级分约10单位的量添加。
[0025]在一些实施方案中，该方法还包括：
[0026](c)从含有C1
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INH的冷沉淀物贫乏血浆级分中去除C1
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INH酯酶抑制剂(C1
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INH)，从而形成C1
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INH耗尽的上清液级分。
[0027]在一个实施方案中，IgG富集级分含有上清液级分中发现的IgG含量的约60％至约80％。
[0028]在一个实施方案中，IgG富集级分含有上清液级分中发现的IgG含量的至少约50％。
[0029]在上述方法的一个实施方案中，IgG富集级分中的γ
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球蛋白的纯度为至少约95％。
[0030]在上述方法的一个实施方案中，IgG富集级分中的γ
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球蛋白的纯度为约95％至约99.9％。
[0031]在示例性实施方案中，本专利技术提供了用于从肝素化级分中分离IgG的方法，该方法包括呈任何顺序或组合的以下步骤中的一个或多个：
[0032](i)在约7.0至约7.5的pH下用约6％至约10％乙醇(例如水性乙醇)沉淀肝素化级分，以获得级分I沉淀物和级分I上清液；以及
[0033](ii)在约6.7至约7.3的pH下用约18％至约27％乙醇(例如水性乙醇)从级分I上清液中沉淀IgG以形成级分II+III沉淀物。
[0034]在上述方法的一个实施方案中，该方法还包括在约6.7至约7.3的pH下用约18％至约27％乙醇(例如水性乙醇)从肝素化级分中沉淀IgG以形成级分I+II+III沉淀物。
[0035]在一个实施方案中，该方法还包括呈任何顺序或组合的以下步骤中的一个或多个：
[0036](iii)将级分II+III沉淀物或级分I+II+III沉淀物悬浮在悬浮缓冲液中，从而形成IgG悬浮液；
[0037](iv)将细碎的二氧化硅(SiO2)与IgG悬浮液混合，例如持续至少约30分钟；
[0038](v)过滤IgG悬浮液，从而形成滤液和滤饼。
[0039]在一个实施方案中，该方法还包括呈任何顺序或组合的以下步骤中的一个或多个：
[0040](vi)用至少约1个压滤机死体积的pH为约4.9至约5.3的洗涤缓冲液洗涤滤饼，从而形成洗涤溶液；
[0041](vii)将滤液与洗涤溶液合并，从而形成合并溶液，并用去污剂处理合并溶液；
[0042](viii)将步骤(vii)的合并溶液的pH调节至约7.0并向其中添加乙醇至最终浓度为约20％至约30％，从而形成沉淀物G沉淀物；
[0043](ix)将沉淀物G沉淀物溶解在包含选自溶剂、去污剂及其组合的成员的水性溶液中，并温育该溶液例如至少约60分钟，从而形成经温育溶液；
[0044](x)使经温育溶液通过阳离子交换层析柱并且将吸附在柱上的蛋白质在洗脱液中洗脱；
[0045](xi)使洗脱液通过阴离子交换层析柱以产生流过级分；
[0046](x)使流过级分通过纳滤器以产生纳滤液；
[0047](xi)通过超滤浓缩纳滤液以产生第一超滤液；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于由包含免疫球蛋白G(IgG)的C1
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INH耗尽的上清液级分制备IgG富集级分的方法，所述方法包括：(a)使所述C1
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INH耗尽的上清液级分与肝素接触，从而形成肝素化级分；以及(b)从所述肝素化级分中分离出IgG，从而形成IgG富集级分。2.如权利要求1所述的方法，其中所述上清液级分是C1
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抑制剂吸附后上清液。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述上清液级分是血浆上清液。4.如权利要求3所述的方法，其中所述血浆上清液是C1
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INH耗尽的冷沉淀物贫乏血浆。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述上清液级分被耗尽了选自因子II、VII、IX和X或它们的混合物的其他凝血因子中的一者或多者。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中在进一步加工之前将所述上清液级分浓缩至正常血浆的蛋白质值。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述肝素以每ml上清液级分约1至约20单位的量添加。8.如权利要求7所述的方法，其中所述肝素以每ml上清液级分约5单位的量添加。9.如权利要求7所述的方法，其中所述肝素以每ml上清液级分约10单位的量添加。10.如权利要求1
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9中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)之前从含有C1
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INH的冷沉淀物贫乏血浆级分中去除C1
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INH酯酶抑制剂(C1
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INH)，从而形成所述C1
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INH耗尽的上清液级分。11.如权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述IgG富集级分含有所述上清液级分中发现的IgG含量的至少约50％。12.如权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述IgG富集级分中的IgG纯度为至少95％。13.如权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中所述在b)中从所述肝素化级分中分离出IgG包括：(i)在约7.0至7.5的pH下用约6％至约10％乙醇沉淀所述肝素化级分，以获得级分I沉淀物和级分I上清液；以及(ii)在约6.7至约7.3的pH下用约18％至约27％醇从所述级分I上清液中沉淀IgG以形成级分II+III沉淀物。14.如权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中所述在b)中从所述肝素化级分中分离出IgG包括：(i)在约6.7至约7.3的pH下用约18％至约27％醇从所述肝素化级分中沉淀IgG以形成级分I+II+III沉淀物。15.如权利要求13或14所述的方法，其还包括：(iii)将所述级分II+III沉淀物或所述级分I+II+III沉淀物悬浮在悬浮缓冲液中，从而形成IgG悬浮液；(iv)将细碎的二氧化硅(SiO2)与所述IgG悬浮液混合至少约30分钟；(v)过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：