【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及表达特异性识别人间皮素的细胞表面分子、白细胞介素15(il-15)和任选趋化因子(c-c基序)配体19(ccl19)的免疫细胞，包含所述免疫细胞的药物组合物，包含编码特异性识别间皮素的细胞表面分子的多核苷酸、编码il-15的多核苷酸和任选编码ccl19的多核苷酸的表达载体，使用方法，以及产生表达特异性识别人间皮素的细胞表面分子、il-15和任选ccl19的免疫细胞的方法，所述方法包括将编码特异性识别人间皮素的细胞表面分子的多核苷酸、编码il-15的多核苷酸和任选编码ccl19的多核苷酸引入免疫细胞。
技术介绍
1、恶性肿瘤是影响世界上许多人的疾病，并且通常通过化学疗法、放射疗法或手术疗法来广泛治疗。然而，存在各种问题，诸如不良反应的发生、一些功能的丧失以及无法治疗的复发或转移。因此，近年来，为了维持患者更高的生活质量(qol)，已经推进了免疫细胞疗法的开发。免疫细胞疗法包括从患者采集免疫细胞，进行增强所采集的免疫细胞的免疫功能的程序，扩增细胞，以及将细胞重新施用回患者。例如，免疫细胞疗法可以包括从患者收集t细胞，将编码嵌合抗原受体(组成型雄甾烷受体：在下文，也称为“car”)的核酸引入t细胞，并将t细胞重新施用回患者。尽管已经观察到car-t疗法在血癌中的早期成功；但是也观察到了在实体瘤治疗中的致命毒性和明显缺乏功效。因此，需要改良car-t疗法。
2、现有技术文献
3、专利文件
4、专利文件1：wo2020/045610
5、专利文件2：us2020/0101142
6、专利文件3：wo2013/063419
技术实现思路
1、本专利技术要解决的客观技术问题
2、用t细胞免疫疗法存在许多挑战，诸如向实体瘤的运输不足、对正常组织的高毒性、不能克服免疫抑制肿瘤微环境以及内源性免疫应答的激活不足。此外，已经证实经修饰以表达特异性识别间皮素的car的免疫细胞表现出最低的治疗功效。因此，要解决的客观技术问题是提供优化的经修饰的免疫细胞以靶向表达间皮素的癌症。
3、解决客观技术问题的手段
4、本专利技术人已经发现，经修饰以表达特异性识别间皮素的car、il-15和任选ccl19的免疫细胞可以提高免疫疗法的治疗功效并提高存活率。
5、一种分离的核酸分子，其包含编码嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸和编码白细胞介素15(il-15)的第二多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含特异性识别人间皮素的抗体和4-1bb胞内区。在一些实施方案中，car还包含cd8铰链区、cd8跨膜区和cd3ζ胞内区。在一些实施方案中，分离的核酸分子包含编码car的第一多核苷酸和编码il-15的第二多核苷酸。在一些实施方案中，分离的核酸分子还包含编码ccl19的第三多核苷酸。在一些实施方案中，il-15是人il-15。在一些实施方案中，ccl19是人ccl19。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh包含三个包含seq id no:16-18的互补决定区(cdr)，并且其中所述vl包含三个包含seq id no:19-21的cdr。在一些实施方案中，vh包含seq id no:22并且所述vl包含seq id no:23。在一些实施方案中，抗体包含单链可变片段(scfv)形式。在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1。在一些实施方案中，4-1bb胞内区包含seq id no:24。在一些实施方案中，cd3ζ胞内区包含seq id no:25。在一些实施方案中，4-1bb胞内区位于所述分离的核酸分子中cd3ζ胞内区的上游。在一些实施方案中，cd8铰链区包含seq id no:26。在一些实施方案中，cd8跨膜区包含seq id no:27。在一些实施方案中，car还包含长度为3至10个氨基酸残基的连接所述抗体和所述cd8铰链区的肽接头。在一些实施方案中，肽接头包含seq id no:4。在一些实施方案中，car分子还包含信号肽。在一些实施方案中，信号肽位于所述分离的核酸分子中特异性识别人间皮素的所述抗体的上游。在一些实施方案中，信号肽包含seq id no:2。在一些实施方案中，编码il-15的第二多核苷酸和任选编码ccl19的第三多核苷酸各自独立地在启动子下转录，所述启动子包含编码自裂解2a肽(2a肽)的多核苷酸。在一些实施方案中，2a肽包含seq id no:5。在一些实施方案中，il-15包含选自seq id no:8-11的序列。在一些实施方案中，il-15包含选自seqid no:28或29的序列。在一些实施方案中，ccl19包含seq id no:13。在一些实施方案中，编码所述car的所述第一多核苷酸和编码il-15的所述第二多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述car的所述第一多核苷酸-编码il-15的所述第二多核苷酸。在一些实施方案中，编码所述car的所述第一多核苷酸、编码il-15的所述第二多核苷酸和编码ccl19的所述第三多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述car的所述第一多核苷酸-编码il-15的所述第二多核苷酸-编码ccl19的所述第三多核苷酸。在一些实施方案中，分离的核酸分子编码包含seq id no:14或31的多肽。在一些实施方案中，分离的核酸分子编码包含seq id no:34、35、36或15的多肽。在一些实施方案中，分离的核酸分子包含seq id no:37、38、39或40。
6、在某些实施方案中，本文公开了包含本文所述的核酸分子的载体。在一些实施方案中，载体是病毒载体，任选地是表达载体。在一些实施方案中，病毒载体选自逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒(aav)载体。在一些实施方案中，病毒载体是psfg载体、pmsgv载体或pmscv载体。在一些实施方案中，载体是质粒。
7、在某些实施方案中，本文公开了包含本文所述的核酸分子或本文所述的载体的免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞还包含编码gamma-tcr(γtcr)的多核苷酸和编码delta-tcr(δtcr)的多核苷酸。在一些实施方案中，γtcr是v gamma 9tcr(vγ9tcr)，并且所述δtcr是v delta 2tcr(vδ2tcr)。
8、在某些实施方案中，本文公开了一种免疫细胞，所述免疫细胞表达：a)嵌合抗原受体(car)，其包含特异性识别人间皮素的抗体、cd8铰链区、cd8跨膜区、4-1bb胞内区和cd3ζ胞内区；和b)il-15；和c)任选ccl19。在一些实施方案中，免疫细胞是t细胞、自然杀伤(nk)细胞、b细胞、抗原呈递细胞或粒细胞，任选地是t细胞或nk细胞。在一些实施方案中，免疫细胞源自诱导多能干细胞(ipsc)。在一些实施方案中，免疫细胞不表达alpha tcr(αtcr)和/或beta tcr(βtcr)，任选地不表达αβtcr。在一些实施方案中，免疫细胞表达γδtcr。在一些实施方案中，γ本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸分子，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的第一多核苷酸和编码白细胞介素15(IL-15)的第二多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含特异性识别人间皮素的抗体和4-1BB胞内区。
2.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述CAR还包含CD8铰链区、CD8跨膜区和CD3ζ胞内区。
3.如权利要求1或2所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含编码CAR的所述第一多核苷酸和编码IL-15的所述第二多核苷酸。
4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含编码CCL19的第三多核苷酸。
5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述IL-15是人IL-15。
6.如权利要求1-5中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述CCL19是人CCL19。
7.如权利要求1-6中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含三个包含SEQ ID NO:16-18的互补决定区(CDR)，并且其中所述VL包含三个包含SEQ ID NO:19
8.如权利要求1-7中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述VH包含SEQ ID NO:22，并且所述VL包含SEQ ID NO:23。
9.如权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含单链可变片段(scFv)形式。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1。
11.如权利要求1-10所述的分离的核酸分子，其中所述4-1BB胞内区包含SEQ ID NO:24。
12.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述CD3ζ胞内区包含SEQ ID NO:25。
13.如权利要求2或12所述的分离的核酸分子，其中所述4-1BB胞内区位于所述分离的核酸分子中所述CD3ζ胞内区的上游。
14.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述CD8铰链区包含SEQ ID NO:26。
15.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述CD8跨膜区包含SEQ ID NO:27。
16.如权利要求2或14所述的分离的核酸分子，其中所述CAR还包含长度为3至10个氨基酸残基的连接所述抗体和所述CD8铰链区的肽接头。
17.如权利要求16所述的分离的核酸分子，其中所述肽接头包含SEQ ID NO:4。
18.如权利要求1-17中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述CAR还包含信号肽。
19.如权利要求18所述的分离的核酸分子，其中所述信号肽位于所述分离的核酸分子中特异性识别人间皮素的所述抗体的上游。
20.如权利要求18或19所述的分离的核酸分子，其中所述信号肽包含SEQ ID NO:2。
21.如权利要求1-20中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码IL-15的所述第二多核苷酸和任选地编码CCL19的所述第三多核苷酸各自独立地在启动子下转录，所述启动子包含编码自裂解2A肽(2A肽)的多核苷酸。
22.如权利要求21所述的分离的核酸分子，其中所述2A肽包含SEQ ID NO:5。
23.如权利要求1-22中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述IL-15包含选自SEQ IDNO:8-11的序列。
24.如权利要求1-22中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述IL-15包含选自SEQ IDNO:28或29的序列。
25.如权利要求1-24中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述CCL19包含SEQ ID NO:13。
26.如权利要求1-25中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码所述CAR的所述第一多核苷酸和编码IL-15的所述第二多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述CAR的所述第一多核苷酸-编码IL-15的所述第二多核苷酸。
27.如权利要求1-25中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码所述CAR的所述第一多核苷酸、编码IL-15的所述第二多核苷酸和编码CCL19的所述第三多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述CAR的所述第一多核苷酸-编码IL-15的所述第二多核苷酸-编码CCL19的所述第三多核苷酸。
28.如权利要求1-27中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子编码包含SEQ ID NO:14或31的多肽。
29.如权利要求1-27中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的核酸分子，其包含编码嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸和编码白细胞介素15(il-15)的第二多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含特异性识别人间皮素的抗体和4-1bb胞内区。
2.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述car还包含cd8铰链区、cd8跨膜区和cd3ζ胞内区。
3.如权利要求1或2所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含编码car的所述第一多核苷酸和编码il-15的所述第二多核苷酸。
4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含编码ccl19的第三多核苷酸。
5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述il-15是人il-15。
6.如权利要求1-5中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述ccl19是人ccl19。
7.如权利要求1-6中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh包含三个包含seq id no:16-18的互补决定区(cdr)，并且其中所述vl包含三个包含seq id no:19-21的cdr。
8.如权利要求1-7中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述vh包含seq id no:22，并且所述vl包含seq id no:23。
9.如权利要求1-8中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含单链可变片段(scfv)形式。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含seq id no:1。
11.如权利要求1-10所述的分离的核酸分子，其中所述4-1bb胞内区包含seq id no:24。
12.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述cd3ζ胞内区包含seq id no:25。
13.如权利要求2或12所述的分离的核酸分子，其中所述4-1bb胞内区位于所述分离的核酸分子中所述cd3ζ胞内区的上游。
14.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述cd8铰链区包含seq id no:26。
15.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其中所述cd8跨膜区包含seq id no:27。
16.如权利要求2或14所述的分离的核酸分子，其中所述car还包含长度为3至10个氨基酸残基的连接所述抗体和所述cd8铰链区的肽接头。
17.如权利要求16所述的分离的核酸分子，其中所述肽接头包含seq id no:4。
18.如权利要求1-17中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述car还包含信号肽。
19.如权利要求18所述的分离的核酸分子，其中所述信号肽位于所述分离的核酸分子中特异性识别人间皮素的所述抗体的上游。
20.如权利要求18或19所述的分离的核酸分子，其中所述信号肽包含seq id no:2。
21.如权利要求1-20中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码il-15的所述第二多核苷酸和任选地编码ccl19的所述第三多核苷酸各自独立地在启动子下转录，所述启动子包含编码自裂解2a肽(2a肽)的多核苷酸。
22.如权利要求21所述的分离的核酸分子，其中所述2a肽包含seq id no:5。
23.如权利要求1-22中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述il-15包含选自seq idno:8-11的序列。
24.如权利要求1-22中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述il-15包含选自seq idno:28或29的序列。
25.如权利要求1-24中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述ccl19包含seq id no:13。
26.如权利要求1-25中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码所述car的所述第一多核苷酸和编码il-15的所述第二多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述car的所述第一多核苷酸-编码il-15的所述第二多核苷酸。
27.如权利要求1-25中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码所述car的所述第一多核苷酸、编码il-15的所述第二多核苷酸和编码ccl19的所述第三多核苷酸在所述核酸分子中从5’末端到3’末端排列为编码所述car的所述第一多核苷酸-编码il-15的所述第二多核苷酸-编码ccl19的所述第三多核苷酸。
28.如权利要求1-27中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子编码包含seq id no:14或31的多肽。
29.如权利要求1-27中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子编码包含seq id no:34、35、36或15的多肽。
30.如权利要求1-27中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含seq id no:37、38、39或40。
31.一种载体，其包含如权利要求1-30中任一项所述的核酸分子。
32.如权利要求31所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地是表达载体。
33.如权利要求32所述的载体，其中所述病毒载...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·夏皮罗，武千央，葛西义明，何星月，C·库恩，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：
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