本发明专利技术属于血液制品领域，具体涉及一种高纯度、低IgA含量的静注人免疫球蛋白的制备工艺。本发明专利技术所述静注人免疫球蛋白的制备工艺主要包括：组分I+III或组分III的制备、S/D灭活、第一次超滤、层析、第二次超滤、中间品配制、巴氏灭活、第三次超滤、纳米膜除病毒过滤、半成品配制、除菌灌装等；制备获得的静注人免疫球蛋白的收率高、纯度高、且IgA含量低。同时采用S/D灭活和巴氏灭活结合的病毒灭活工艺，达到灭活脂包膜和非脂包膜病毒的目的，进一步保证制品安全。安全。
【技术实现步骤摘要】
一种高纯度、低IgA含量静注人免疫球蛋白的制备工艺
[0001]本专利技术属于血液制品领域，具体涉及一种高纯度、低IgA含量静注人免疫球蛋白的制备工艺。
技术介绍
[0002]静注人免疫球蛋白是由健康人血浆经分离提取的免疫球蛋白组分，并经病毒灭活、去除等步骤精制而成。静注人免疫球蛋白具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用，临床使用广泛，在原发性或获得性免疫球蛋白缺陷症、细菌感染、病毒感染、血液系统疾病、川崎病等的治疗中有显著的效果。
[0003]作为血液制品的静注人免疫球蛋白，为了更好的控制临床效果，需要进行严格的质量控制。各国药典都对静注人免疫球蛋白的质量控制有相应的规定，其中静注人免疫球蛋白的质量控制标准：
①
主要成分应为IgG，其纯度应不低于蛋白总量的95.0％，且IgG亚类应齐全，其含量与正常人血清lgG亚类分布相近；
②
静注人免疫球蛋白制品应尽可能不含或少含IgA、IgE等非IgG免疫球蛋白成分(其中，IgA会导致先天性选择性IgA缺乏症出现过敏反应，其含量应当越少越好)；
③
应当保证静注人免疫球蛋白中抗体的生物活性、高滴度以及高效性；
④
还需要保证静注人免疫球蛋白制品的病毒安全性。
[0004]因此，控制静注人免疫球蛋白的制备工艺至关重要。目前，静注人免疫球蛋白的制备工艺基本都采用低温乙醇分离提取工艺。但是，目前的低温乙醇工艺制备的免疫球蛋白制剂中IgA的含量相对较高，先天性选择性IgA缺乏症患者输注后易发生不良反应，需要进行改进，如公开号为CN104402993B的专利申请文件中公开的方法，制备得到的人免疫球蛋白制品的IgA含量平均为9.3μg/ml。而且在静注人免疫球蛋白的制备过程中，常使用S/D灭活(国外部分血液制品企业选择在30℃下对静注人免疫球蛋白进行6h病毒灭活)或采用纳米膜过滤除去病毒，病毒灭活效果较一般，有部分病毒无法有效除去，影响产品临床使用安全性。例如，张战发表文献《不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响》，分别采用低pH孵放、纳米膜过滤、巴氏消毒和S/D病毒灭活工艺处理静注人免疫球蛋白原液，但是，对静注免疫球蛋白的质量有一定影响，且会影响静注免疫球蛋白的收率。
[0005]随着目前静注人免疫球蛋白市场需求量的提升，现有的静注人免疫球蛋白制备技术的产品收率、纯度已不够理想，因此，寻找一种产品收率、纯度都较高，IgA含量低，并且安全性较好的静注人免疫球蛋白的制备工艺，是目前急需解决的问题。
[0006]本专利技术公开了一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，本专利技术的主要步骤包括从组分I+II+III中分离组分I+III、经S/D灭活、第一次超滤、层析、第二次超滤、中间品配制、巴氏灭活、第三次超滤、纳米膜除病毒过滤、半成品配制、除菌灌装后制得的产品收率高、纯度高、IgA含量低，并且采取S/D灭活和巴氏灭活结合的病毒灭活工艺，达到灭活脂包膜和非脂包膜病毒的目的，灭活效果良好。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的在于提供一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，所述制备工艺包括以下步骤：
[0008](1)制备组分I+III或组分III；
[0009](2)S/D灭活：在组分I+III或组分III滤液中加入S/D溶液，24～26℃恒温处理6h，得S/D灭活液，其中所述S/D溶液为聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和磷酸三丁酯(TNBP)；
[0010](3)第一次超滤：调步骤(2)所述S/D灭活液的pH为3.5～4.0后进行超滤浓缩和透析，使蛋白含量＞60g/L；
[0011](4)层析：调步骤(3)所述超滤浓缩液的电导为1.9～2.3ms/cm，pH为6.4～6.8，蛋白浓度≥30g/L，上离子交换层析柱，收集流出液；
[0012](5)第二次超滤：调步骤(4)所述流出液pH为3.5～4.0后，进行超滤浓缩和透析，使蛋白含量≥60g/L；
[0013](6)中间品配置：在步骤(5)所述透析浓缩液中加入麦芽糖至终浓度为100～110g/L，用除菌滤芯进行过滤，得中间品；
[0014](7)巴氏灭活：在步骤(6)所述中间品中添加山梨醇至终浓度为32～34％w/v，调整pH为4.6～5.2，在59.5～60.5℃下恒温灭活10h，得巴氏灭活液；
[0015](8)第三次超滤：用0.85％的氯化钠溶液对步骤(7)所述巴氏灭活液进行透析浓缩至蛋白浓度应≥60g/L，得蛋白超滤液；
[0016](9)纳米膜过滤除病毒：用孔径20nm的纳米膜过滤步骤(8)所述的蛋白液，得原液；
[0017](10)成品静注人免疫球蛋白的制备：在步骤(9)所述原液中加入麦芽糖，调pH为3.9～4.3，蛋白终含量为40～60g/L，麦芽糖终含量100～110g/L得半成品，将所述半成品经0.45μm滤芯除菌后灌装制得成品静注人免疫球蛋白。
[0018]优选地，步骤(1)中所述组分I+III的制备过程为：用0～2℃，0.01mol/L氯化钠溶解组分I+II+III沉淀，调pH为5.05～5.15，在低于0℃条件下，加入温度低于-15℃的95％乙醇，使乙醇终浓度为17％v/v，控制温度-6.0～-4.0℃反应2h，分离反应液获得组分I+III滤液。
[0019]优选地，所述乙醇的加入速度≤80kg/h；所述分离为压滤分离，压滤压力为0.05～0.25MPa，出液温度为-5.5～-3.5℃。
[0020]优选地，步骤(2)中所述聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)的终浓度为1％，所述磷酸三丁酯(TNBP)的浓度为0.3％。
[0021]优选地，所述步骤(3)中，将所述S/D灭活液用0.45μm滤芯过滤后用30kDa超滤膜包进行浓缩，当所述蛋白含量为30～50g/L时，用5倍浓缩液体积2～8℃透析水连续等体积透析脱醇，使蛋白含量＞60g/L。
[0022]优选地，所述步骤(4)中，在透析液上离子交换层析柱前，先平衡层析柱，所述平衡层析柱的方法为：先用醋酸盐缓冲液处理层析柱，再用磷酸盐平衡缓冲液平衡层析柱。
[0023]优选地，所述离子层析柱为DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析柱，所述透析液的上样速度≤3L/min。
[0024]优选地，所述步骤(5)中，将流出液置于收集罐，调整转速为10～40rpm超滤浓缩，
当蛋白含量浓缩至40～50g/L时，用2～8℃透析水连续等体积透析，浓缩至蛋白含量≥60g/L。
[0025]优选地，步骤(9)中所述除病毒过滤过程中的前端过滤压力≤0.3MPa。
[0026]优选地，步骤(10)所述半成品中蛋白含量为50.5g/L，麦芽糖含量为100g/L。
[0027]本专利技术的有益效果是：
[0028]本专利技术所述制备工艺采取S/D灭活和巴氏灭活结合的病毒灭活工艺，达到灭活脂包膜和非脂包膜病毒的目的，灭活效果良好；本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括以下步骤：(1)从血浆中初步分离组分I+II+III沉淀或组分III；(2)S/D灭活：在组分I+III或组分III滤液中加入S/D溶液，24～26℃恒温处理6h，得S/D灭活液，其中所述S/D溶液为聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和磷酸三丁酯(TNBP)；(3)第一次超滤：调步骤(2)所述S/D灭活液的pH为3.5～4.0后进行超滤浓缩和透析，使蛋白含量＞60g/L；(4)层析：调步骤(3)所述超滤浓缩液的电导为1.9～2.3ms/cm，pH为6.40～6.80，蛋白浓度≥30g/L，上离子交换层析柱，收集流出液；(5)第二次超滤：调步骤(4)所述流出液pH为3.5～4.0后，进行超滤浓缩和透析，使蛋白含量≥60g/L；(6)中间品配制：在步骤(5)所述透析浓缩液中加入麦芽糖至终浓度为90～110g/L，用除菌滤芯进行过滤，得中间品；(7)巴氏灭活：在步骤(6)所述中间品中添加山梨醇至终浓度为32～34％w/v，调整pH为4.6～5.2，在59.5～60.5℃下恒温灭活10h，得巴氏灭活液；(8)第三次超滤：用0.85％的氯化钠溶液对步骤(7)所述巴氏灭活液进行透析浓缩至蛋白浓度应≥60g/L，得蛋白超滤液；(9)纳米膜过滤除病毒：用孔径20nm的纳米膜过滤步骤(8)所述的蛋白超滤液，得原液；(10)成品静注人免疫球蛋白的制备：在步骤(9)所述原液中加入麦芽糖，调pH为3.9～4.3，蛋白终含量为50～60g/L，麦芽糖终含量100～110g/L得半成品，将所述半成品经0.45μm滤芯除菌后灌装制得成品静注人免疫球蛋白。2.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤(1)中所述组分I+III或组分III的制备过程为：用0～2℃，0.01mol/L氯化钠溶解组分II+III沉淀或组分I...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕献忠，苏峰，崔婷婷，孙书秒，王雅琴，陈远洋，
申请(专利权)人：新疆德源生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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