盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗肺纤维化药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗肺纤维化中的应用。本发明专利技术首次发现盐酸去亚甲基小檗碱对肺纤维化有治疗作用；具体而言，通过博来霉素（5U/kg）诱导C57BL/6小鼠建立肺纤维化模型，在博来霉素诱导一周后，分别灌胃给予小檗碱（100mg/kg）、盐酸去亚甲基小檗碱（100mg/kg）和吡非尼酮（300mg/kg），灌胃给药两周。研究结果表明，相同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱相比于小檗碱，能够更为显著的提高小鼠生存率和降低肺系数以及改善小鼠肺部结构损伤和胶原沉积，表明盐酸去亚甲基小檗碱相比于小檗碱具有更好的治疗效果。且相比于吡非尼酮，盐酸去亚甲基小檗碱治疗效果相近而给药剂量更低。此外，正常小鼠灌胃给药DMB两周，小鼠外观、活动、饮食和精神状态等均未改变，心、肝、脾、肾脏器系数也未见任何改变，以上结果表明DMB安全有效，具有较高的生物利用度。生物利用度。生物利用度。

【技术实现步骤摘要】
盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗肺纤维化药物中的应用

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[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗肺纤维化中的应用。

技术介绍
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[0002]肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是一种以进行性纤维化组织重塑和肺组织瘢痕为特征的慢性肺疾病。 多种因素如抽烟、感染、环境污染物、辐射和自身免疫反应等都会导致肺组织损伤并发生纤维化。
[0003]特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是肺纤维化中最具代表性的病因不明的特别严重 的进行性肺纤维化，诊断后中位生存时间为3
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5年。它是一种与年龄相关的疾病，绝大多数人在60岁以上 被诊断出来。IPF的特征是异常的伤口愈合反应，导致肺内细胞外基质(ECM)过度沉积，这个过程通常开 始于肺的基底和周围区域。随着病情恶化，肺部越来越不能促进气体交换,从而导致诸如劳力性呼吸困难、 慢性咳嗽、肺功能下降和生活质量损害等症状。
[0004]IPF的发病机制复杂，尚不完全清楚。目前的假设主要集中在慢性炎症、创面异常愈合、细胞衰老、 氧化应激、内质网应激、细胞可塑性、非编码RNA的作用等。根据最近的研究，IPF的发生和发展是由于 肺泡上皮细胞(AECs)的异常损伤和激活，导致促纤维化、凝血剂和炎症细胞因子的分泌控制增殖，成纤维 细胞的激活和分化为肌成纤维细胞，以及随之产生的细胞外基质(ECM)蛋白的分泌和沉积。因此到目前为 止，已经涉及到一系列的过程参与IPF，范围从凝血级联的激活到肌成纤维细胞的激活，甚至辅助过程， 如血管生成和氧化应激。但是，每一进程的参与程度还没有得到充分的说明，这使得开发安全有效的药物 特别具有挑战性。
[0005]尽管IPF的发病机制尚不完全清楚，但是存在过度的上皮
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间充质转化(EMT)在IPF的发展中发挥至关 重要的作用。约1/3的肺纤维化成纤维细胞是鉴定为上皮来源。上皮细胞经EMT转化为肌成纤维细胞后增 殖迅速，并产生过量的细胞外产物。肌成纤维细胞除了来源于上皮间质转化，来自骨髓的成纤维细胞和常 驻成纤维细胞也会增殖并分化为肌成纤维细胞。
[0006]从目前研究来看，抑制上皮间质转化、肌成纤维细胞激活和分化、减少氧化应激、清除细胞外基质沉 积等是改善肺纤维化的主要途径。鉴于IPF的发生日益普遍和相关死亡率的不断增加，迫切需要研发安全 有效的治疗肺纤维化的药物。
[0007]盐酸去亚甲基小檗碱，如式(Ⅰ)所示，又名去亚甲基小檗碱盐酸盐或脱亚甲基小檗碱盐酸盐。
[0008][0009]盐酸去亚甲基小檗碱(式Ⅰ)的英文名为Demethyleneberberine Hydrochloride或DemethyleneberberineChloride。本专利技术专利将它简称为DMB。式(Ⅰ)中的骨架结构为去亚甲基小檗碱，它是盐酸去亚甲基小 檗碱的活性成份。国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)将式(Ⅰ)中的有机结构部分去亚甲基小檗碱命 名9,10
‑
dimethoxy
‑
5,6
‑
dihydroisoquinolino[2,1
‑
b]isoquinolin
‑7‑
ium
‑
2,3
‑
diol，其中文名为9，10
‑
二甲氧基
‑
5， 6
‑
二氢异喹啉[2,1
‑
b]异喹啉
‑7‑
鎓
‑
2，3
‑
二羟基。它的分子式：C
19
H
18
NO
4+
，分子量为：324.35。化学文摘号 (CAS)为：25459
‑
91
‑
0。去亚甲基小檗碱(DMB)可以与无机酸或有机酸形成多种盐，如氯化盐、硫酸 盐、磷酸盐、溴化盐、碘化盐、枸橼酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、苹果酸盐和琥珀酸盐等分子形式存在。
[0010]迄今为止，现有技术中没有关于盐酸去亚甲基小檗碱对肺纤维化治疗作用的记载和报道。

技术实现思路
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[0011]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种治疗肺纤维化的化合物，特别是提供了如式 (Ⅰ)所示的盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)作为治疗肺纤维化药物的应用。
[0012]本专利技术通过建立肺纤维化动物模型，观察盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)对小鼠肺纤维化的治疗作用。 研究结果表明，盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)对肺纤维化具有良好的治疗作用。
[0013]本专利技术通过博来霉素(5U/kg)诱导C57BL/6小鼠建立肺纤维化模型，在博来霉素诱导一周后，肺纤 维化开始形成，盐酸去亚甲基小檗碱开始给药，分别灌胃给予小鼠50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg，给 药两周。研究结果表明，盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)不同剂量对肺纤维化均具有不同程度的改善作用。 博来霉素诱导后，小鼠死亡率明显增加，肺部肿大，肺系数升高，肺泡结构破坏，大量胶原沉积在肺部， 导致肺组织致密紧实，而经过盐酸去亚甲基小檗碱给药治疗后，小鼠生存率明显延长，肺系数明显减小， 肺部组织结构损伤明显改善，肺胶原沉积明显减少，同时去亚甲基小檗碱能够明显减轻小鼠肺组织氧化应 激，以上这些结果充分表明盐酸去亚甲基小檗碱能够有效治疗肺纤维化。
[0014]本专利技术通过A549细胞研究不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱的毒性作用，通过CCK
‑
8检测不同浓度、 不同孵育时间后细胞增殖情况。
[0015]本专利技术通过TGF
‑
β1诱导A549细胞，加入不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱，采用
DCFH
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DA探针检 测ROS水平，采用荧光显微镜拍照观察。
[0016]本专利技术通过TGF
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β1诱导A549细胞，加入不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱，采用DCFH
‑
DA探针检 测ROS水平，采用流式细胞仪检测。
[0017]本专利技术通过TGF
‑
β1诱导A549细胞，加入不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱，分别通过细胞划痕和 Transwell研究不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱对上皮细胞迁移的抑制作用；
[0018]本专利技术通过TGF
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β1诱导A549细胞，加入不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱，提取细胞蛋白，Western blot 检测vimentin蛋白表达。
[0019]本专利技术通过TGF
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β1诱导人肺成纤维细胞MRC
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5，加入不同剂量的盐酸去亚甲基小檗碱，提取细胞蛋 白，Western blot检测Fibronectin蛋白表达。
[0020]本专利技术通过TGF
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β1诱导人肺成纤维细胞MRC
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5，加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其中盐酸去亚甲基小檗碱如式(Ⅰ)所示的：2.盐酸去亚甲基小檗碱药物组合物在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的组合物为含...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉彬，葛闯，韩彦红，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：