抗SARS-CoV-2的中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗SARS

【技术实现步骤摘要】
抗SARS
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CoV
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2的中和抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及抗新型冠状病毒的中和抗体及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)自2019年底首次报道以来，对公共卫生和社会生活的产生了巨大的挑战和影响。现有的疫苗能有效预防野生型毒株的感染，但是随着SARS
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CoV
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2全球大流行的持续，不断出现的突变株引起了突破性感染。尤其Omicron突变株(B.1.1.529)在重要靶位的大量突变，极大的降低了免疫血清的中和活性，对疫苗的保护效果构成了威胁。因此，急需高效广谱的预防和治疗手段来控制SARS
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CoV
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2的流行。抗SARS
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CoV
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2的广谱中和抗体可阻断病毒感染靶细胞，还可通过其Fc段发挥CDC、ADCC和ADCP等作用清除被感染的细胞。但随着SARS
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CoV
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2全球大流行的蔓延和持续，不断出现新的突变株对中和抗体的保护效果提出来很大的挑战。研究显示S蛋白417、484和501位氨基酸残基的突变，可以使部分中和抗体的活性显著降低甚至全部耐药。因此需要分选更多的中和抗体来应对已经出现或今后可能会出现的突变毒株。
[0003]广谱中和可通过多种途径获得，包括杂交瘤技术、EBV转化、噬菌体展示、流式分选、10X Genomics和beacon以及以上技术的联合使用等。样本也可有多种来源，如免疫后的动物、感染者和疫苗免疫后的志愿者等。其中单个特异性记忆性B细胞的流式分选可以快速且高效的获得与特定病原体靶抗原结合的B细胞，联合分子克隆技术以及高通量的结合和中和实验筛选技术，可在短期内获得大量的天然候选抗体。同时，使用新型冠状病毒疫苗免疫后的健康人群样本进行分选，可避免如感染者样本可能产生的生物安全风险，以及如动物源性的抗体需要进行人源化改造带来的耗时、耗力。总之，从疫苗免疫后的人群中分离抗病毒广谱中和抗体不失为一种安全高效的单克隆抗体制备方法。

技术实现思路

[0004]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请的主要目的在于提供一种高效广谱的抗SARS
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CoV
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2的中和抗体及其应用。
[0005]在一方面，本专利技术提供了一种抗SARS
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CoV
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2的中和抗体或其抗原结合片段，所述中和抗体或其抗原结合片段具有包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区和包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区，其中VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID No. 3中的第26
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33位、第51
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58位和第97
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111位的氨基酸序列，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3分别包含SEQ ID No. 4中的第27
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32位、第50
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52位和第89
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97位的氨基酸序列。
[0006]在另一方面，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码根据本专利技术的抗SARS
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CoV
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2病毒的中和抗体或其抗原结合片段。
[0007]在再一方面，本专利技术提供了一种重组表达载体，该重组表达载体包含根据本专利技术的多核苷酸。
[0008]在又一方面，本专利技术提供了一种重组细胞，该重组细胞包含根据本专利技术的多核苷
酸或者包含根据本专利技术的重组表达载体。
[0009]在另一方面，本专利技术提供了一种制备根据本专利技术的抗SARS
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CoV
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2病毒的中和抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养根据本专利技术的重组细胞，并且回收得到所述广谱中和抗体或其抗原结合片段。
[0010]在再一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，该药物组合物包含根据本专利技术的抗SARS
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CoV
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2病毒的中和抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
[0011]在又一方面，本专利技术提供了一种试剂盒，该试剂盒包含根据本专利技术的抗SARS
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CoV
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2病毒的中和抗体或其抗原结合片段。
[0012]在另一方面，本专利技术提供了根据本专利技术的抗SARS
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CoV
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2病毒的中和抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、重组表达载体、重组细胞、或药物组合物在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染的药物中的应用。
[0013]在本专利技术中，通过运用RBD和RBDsa (K417T, E484K, N501Y)蛋白对新型冠状灭活疫苗免疫后的志愿者进行特异性单个记忆B细胞的分选，获得了配对的抗体重链和轻链基因，并筛选得到抗SARS
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CoV
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2的中和抗体。该抗体具有高效的中和活性并且可以广谱中和SARS
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2的变异株。该中和抗体的发现不仅为SARS
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CoV
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2感染的预防和治疗提供了备选药物，也为抗病毒感染的单抗药物研发提供了技术参考。
附图说明
[0014]图1是28个样本对SARS
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CoV
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2野生型和不同突变株的中和滴度(ID
50
)的图。
[0015]图2是本申请的实施例中流式细胞分选的结果。依次为，从全部计数中圈出淋巴细胞，从淋巴细胞中圈出单细胞，再次从单细胞中圈出单细胞，从单细胞中圈出CD3
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CD8
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CD14
‑
DAPI
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CD19
+
的B细胞，从B细胞中圈出CD19
+
CD27
+
的记忆性B细胞，最后为记忆性B细胞中圈出RBD
+
或RBDsa
+
的B细胞。
[0016]图3是本申请的实施例中单个特异性记忆性B细胞的第二轮巢式PCR产物的凝胶电泳结果。从上到下分别为重链可变区IgH、轻链(κ)可变区Igκ和轻链(λ)可变区Igλ的结果。
[0017]图4是本申请的实施例中筛选出的抗体序列的参数。其中，A中从左到右依次为重链可变区胚系基因占比、轻链κ链可变区胚系基因占比、轻链λ链可变区胚系基因占比的统计结果；B中从左到右依次为重链CDR3的长度和轻链CDR3的长度统计结果；C为重链可变区和轻链可变区的突变率的统计结果。
[0018]图5是本申请的实施例中293T细胞系统中抗体表达的Western印迹结果，上方为重链，下方为轻链。
[0019]图6是本申请的实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗SARS
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CoV
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2的中和抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区和包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区，并且其中，VHCDR1包含SEQ ID No. 3中第26
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33位的氨基酸序列；VHCDR2包含SEQ ID No. 3中第51
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58位的氨基酸序列；VHCDR3包含SEQ ID No. 3中第97
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111位的氨基酸序列；VLCDR1包含SEQ ID No. 4中第27
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32位的氨基酸序列；VLCDR2包含SEQ ID No. 4中第50
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52位的氨基酸序列；和VLCDR3包含SEQ ID No. 4中第89
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97位的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗SARS
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CoV
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2的中和抗体或其抗原结合片段，其中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID No. 3中的第26
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33位、第51
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58位和第97
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111位的氨基酸序列，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID No. 4中的第27
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32位、第50
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52位和第89
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97位的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的抗SARS
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CoV
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2的中和抗体或其抗原结合片段，其中，所述中和抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、scFv、双体、单链抗体、融合抗体和完整抗体。4.一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码权利要求1至3中任一项所述的抗SARS
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CoV
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2的中和抗体或其抗原结合片段。5.如权利要求4所述的多核苷酸，其中，该多核苷酸的多核苷酸序列包含：包含SEQ ID No. 1中的第76
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99位的序列的编码所述VHCDR1的核苷酸序列；包含SEQ ID No. 1中的第151
‑
174位的序列的编码所述VHCDR2的核苷酸序列；包含SEQ ID No. 1中的第289
‑
333位的序列的编码所述VHCDR3的核苷酸序列；包含SEQ ID No. 2中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：程功，刘玉斌，太万博，邹艳，盛洁，
申请(专利权)人：深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：