抗新型冠状病毒的广谱中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗新型冠状病毒的广谱中和抗体及其应用。本发明专利技术提供了一种抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段，该广谱中和抗体或其抗原结合片段具有包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区和包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区，并且其中VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3分别包含SEQ ID No.1、2和3所示的氨基酸序列，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3分别包含SEQ ID No.4、5和6所示的氨基酸序列。最终筛选出的抗体具有高效且广谱的中和活性，对新型冠状病毒的野生型以及13个突变株的IC

【技术实现步骤摘要】
抗新型冠状病毒的广谱中和抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫
，尤其是涉及抗新型冠状病毒的广谱中和抗体及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)在传播过程中会随机产生突变形成各种突变株，而其中一些携带关键突变位点的突变株具有更强的免疫逃逸能力，进而引起了突破性感染。以奥密克戎(Omicron)突变株(B.1.1.529)为例，其在重要靶位的大量突变极大地降低了免疫血清的中和活性，对疫苗的保护效果构成了威胁。因此，急需高效广谱的预防和治疗手段来控制SARS
‑
CoV
‑
2的流行。广谱中和抗体(broadly neutralizing antibodies，bNAbs)可有效应对不同突变株的免疫逃逸，既可在感染后用药，通过Fab阻断病毒感染，以及通过Fc效应功能增强机体对病毒的免疫应答；也可在感染前被动免疫，快速发挥预防作用。
[0003]目前获准或处于不同研究阶段的抗SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体对Alpha、Beta、Gamma和Delta等突变株的中和活性多数无显著降低或仅有部分降低，但超过85%的抗体对奥密克戎(Omicron)突变株几乎完全耐药。因此，需要分离和鉴定更多具有高效和广谱特征的抗SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体，来应对已有和未来可能出现的突变株和流行株，为临床应用提供更多的候选抗体。
专利技术内容
[0004]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请的主要目的在于提供一种高效的抗新型冠状病毒的广谱中和抗体及其应用。
[0005]在一方面，本专利技术提供了一种抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区和包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区，并且其中VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3分别包含SEQ ID No. 1、2和3所示的氨基酸序列，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3分别包含SEQ ID No. 4、5和6所示的氨基酸序列。
[0006]在另一方面，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码根据本专利技术的抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段。
[0007]在再一方面，本专利技术提供了一种表达载体，该表达载体包含根据本专利技术的多核苷酸。
[0008]在又一方面，本专利技术提供了一种重组细胞，该重组细胞包含根据本专利技术的多核苷酸或者包含根据本专利技术的表达载体。
[0009]在另一方面，本专利技术提供了一种制备根据本专利技术的抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养根据本专利技术的重组细胞，并且回收得到所述广谱中和抗体或其抗原结合片段。
[0010]在再一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，该药物组合物包含根据本专利技术的抗
新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
[0011]在又一方面，本专利技术提供了一种试剂盒，该试剂盒包含根据本专利技术的抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段。
[0012]在另一方面，本专利技术提供了根据本专利技术的抗新型冠状病毒的广谱中和抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、重组细胞、或药物组合物在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染的药物中的应用。
[0013]在本专利技术中，通过单个特异性记忆性B细胞的流式分选快速高效获得与特定病原体靶抗原结合的B细胞，联合分子克隆技术以及高通量的结合和中和实验筛选技术，短期内获得了大量的天然候选抗体。分选样本来源于新型冠状病毒灭活疫苗免疫后的健康人群，避免了感染者样本可能产生的生物安全风险，以及动物源性抗体所需的人源化改造。最终筛选出的抗体具有高效且广谱的中和活性，其中，抗体10
‑
5B与野生型新型冠状病毒RBD的亲和力K
D
为2.68 nM，对新型冠状病毒的野生型以及Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron BA.1和Omicron BA.2等13个突变株的IC
50
均小于0.05
ꢀµ
g/ml，对WT、Beta、Delta和Omicron BA.1活病毒的IC
50
均小于0.1
ꢀµ
g/ml。
附图说明
[0014]图1是本申请的实施例中流式细胞分选的结果。其中，A为全部计数中圈出的淋巴细胞，B为从A中圈出单细胞，C为再次从B中圈出单细胞，D为从C中圈出CD3
‑
CD8
‑
CD14
‑
DAPI
‑
CD19
+
的B细胞，E为从D中圈出CD19
+
CD27
+
的B细胞，F为从E中圈出RBDo
+
的B细胞。
[0015]图2是本申请的实施例中不同的记忆性B细胞的第二轮巢式PCR产物的凝胶电泳结果。从上到下分别为重链可变区IgH、轻链(κ)可变区Igκ和轻链(λ)可变区Igλ的结果。
[0016]图3是本申请的实施例中筛选出的抗体序列的参数。其中，A中从左到右依次为重链可变区胚系基因占比、轻链κ链可变区胚系基因占比、轻链λ链可变区胚系基因占比的统计结果；B中从左到右依次为重链CDR3的长度和轻链CDR3的长度统计结果；C为重链可变区和轻链可变区的突变率的统计结果。
[0017]图4是本申请的实施例中293T细胞系统中抗体表达的Western印迹结果，上方为重链，下方为轻链。
[0018]图5是本申请的实施例中抗体对不同抗原的结合活性筛选结果。其中，从左到右分别是以新型冠状病毒野生型RBD蛋白、奥密克戎(Omicron)突变株的RBD蛋白、Beta突变株的S1蛋白和Delta突变株的S1蛋白作为筛选抗原的结果，横坐标为倒数上清稀释度(reciprocal supernatants dilutions)，纵坐标为OD值(OD
450
‑
OD
630
)。
[0019]图6是本申请的实施例中抗体的中和活性筛选结果。其中，A为结合活性筛选出的10个抗体的表达上清不同稀释条件下对奥密克戎(Omicron BA.1)突变株假病毒的中和活性的比较结果，B为抗体10
‑
5B的表达上清在不同稀释条件下对不同假病毒的中和活性检测结果。
[0020]图7是本申请的实施例中抗体10
‑
5B转染的大规模表达和纯化的电泳结果。其中，A为大规模表达的Western印迹鉴定结果，B为亲和层析纯化后的产物的电泳检测结果。
[0021]图8是本申请的实施例中抗体10
‑
5B的亲和力检测结果。
[0022]图9是本申请的实施例中抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗新型冠状病毒的中和抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区和包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区，并且其中VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3分别包含SEQ ID No. 1、2和3所示的氨基酸序列，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3分别包含SEQ ID No. 4、5和6所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗新型冠状病毒的中和抗体或其抗原结合片段，其中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID No. 1、2和3，且VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID No. 4、5和6。3.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒的中和抗体或其抗原结合片段，其中：所述重链可变区包含SEQ ID No. 7所示的序列，或与SEQ ID No. 7所示的序列具有至少80%的同源性的序列；并且所述轻链可变区包含SEQ ID No. 8所示的序列，或与SEQ ID No.8所示的序列具有至少80%的同源性的序列。4.一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码权利要求1至3中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：程功，刘玉斌，邹艳，盛洁，
申请(专利权)人：深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：