针对冠状病毒NP蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了针对冠状病毒NP蛋白的单克隆抗体及其应用，上述单克隆抗体识别新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
针对冠状病毒NP蛋白的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学及细胞免疫学的医药
，尤其涉及针对冠状病毒NP蛋白 的单克隆抗体及其应用，具体地，上述单克隆抗体广谱识别新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2) 的NP蛋白和严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS
‑
CoV)的NP蛋白。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID
‑
19)，是由新型冠状病毒 (SARS
‑
CoV
‑
2)引起的一种严重的急性呼吸系统传染病。该病感染性强，致死率高。根 据感染症状，分为无症状、轻症、重症等不同类型。常见症状有呼吸道症状、发热、咳嗽、 气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭， 甚至死亡。
[0003]SARS
‑
CoV
‑
2和已知的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS
‑
CoV)、中东呼吸综合征 冠状病毒(MERS
‑
CoV)同属于冠状病毒科的β冠状病毒属。SARS
‑
CoV
‑
2为单股正链RNA 病毒，大小约30kb。
[0004]早期诊断对于感染病人的及早发现和新冠疫情的防控都至关重要。针对新冠病毒，有 三种主要的检测方式：核酸检测、抗原检测和抗体检测。核酸检测、抗原检测和抗体检测 分别针对的是病毒核酸、病毒蛋白和人体的血清抗体，前两种是采集口鼻呼吸道的分泌物， 而抗体检测是要抽取患者的血液。病毒感染人体后，在靶细胞中有一个复制的过程，首先 能够检测到抗原和核酸。一定时间后，我们的人体会对病毒产生相应的抗体。核酸检测速 度快，可以大批量检测，但是受病程的影响较大，有无症状感染者在检测数十次为阴性后 才检测为阳性，而且检测专业要求高。目前全球大范围内新冠疫苗的接种，使得抗体检测 已经不太能作为病毒感染的指标。相比之下，抗原可以比较早进行检测，而且它对专业要 求不是很高，不需要特定的设备，非专业人士进行简单学习就可以操作，而且检测速度很 快，是核酸检测的一种有效补充手段，特别适合面对检测需求量变大情况下的初筛以及居 家自我检测。
[0005]SARS
‑
CoV
‑
2的核衣壳为螺旋对称结构，主要由衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，NP) 组成，NP在宿主感染早期大量表达，含量最多，免疫原性较强，而且N蛋白在多数冠状病 毒中属于相对保守的抗原，因此，NP可作为血清学诊断SARS
‑
CoV
‑
2感染的靶点。为提高 血清学诊断的效率，需要进一步寻找灵敏度更高、特异性更强的NP抗体。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术中存在的问题，解决目前亟需有效的针对早期广谱检测SARS
‑
CoV
‑
2 的问题，本专利技术筛选获得了两株针对新型冠状病毒NP蛋白的单克隆抗体，其具有高效、广 谱性、多用途的特点。本专利技术进一步提供了使用针对新型冠状病毒NP蛋白的单克隆抗体用 于多种方法检查新型冠状病毒，上述单克隆抗体对SARS
‑
CoV
‑
2NP蛋白具有强的特异性结 合能力，并可通过多种方法检测新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)的NP蛋白和严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS
‑
CoV)的NP蛋白，上述两个单克隆抗体有望成为血清学早期诊
断 SARS
‑
CoV
‑
2和SARS
‑
CoV的检测抗体，为检测新型冠状病毒、SARS
‑
CoV及其突变株的 抗原检测提供了强有力的工具。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个方面是提供两株单克隆抗体，其识别新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的NP 蛋白和/或严重急性呼吸综合征冠状病毒SARS
‑
CoV的NP蛋白。
[0009]进一步地，所述单克隆抗体识别SARS
‑
CoV
‑
2的NP蛋白和SARS
‑
CoV的NP蛋白，其 中，SARS
‑
CoV
‑
2包括SARS
‑
CoV
‑
2原始株及其突变株，所述突变株包括Alpha、Beta、Delta 和Omicron。
[0010]进一步地，所述单克隆抗体为广谱性人源单克隆抗体，其对SARS
‑
CoV
‑
2的NP蛋白和 SARS
‑
CoV的NP蛋白具有反应性。
[0011]进一步地，所述单克隆抗体为第一种抗体(命名为P301
‑
F7)、第二种抗体(命名为 P301
‑
H5)或两者的组合物；其中，所述第一种抗体的重链可变区VH的CDR序列(具体 为CDR1
‑
H、CDR2
‑
H、CDR3
‑
H)如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.3所示，所述第一种抗体 的轻链可变区VL的CDR序列(具体为CDR1
‑
L、CDR2
‑
L、CDR3
‑
L)如SEQ ID NO.4
‑
SEQID NO.6所示；所述第二种抗体的重链可变区VH的CDR序列(具体为CDR1
‑
H、CDR2
‑
H、CDR3
‑
H)如SEQ ID NO.17
‑
SEQ ID NO.19所示，所述第二种抗体的轻链可变区VL的 CDR序列(具体为CDR1
‑
L、CDR2
‑
L、CDR3
‑
L)如SEQ ID NO.20
‑
SEQ ID NO.22所示。
[0012]进一步地，所述第一种抗体的重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.13所示或与 其具有至少80％一致性的氨基酸序列，所述第一种抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列如 SEQ ID No.14所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列；所述第二种抗体的重链可变 区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.29所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列，所述 第二种抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID No.30所示或与其具有至少80％一致 性的氨基酸序列。
[0013]可理解的是的，上述单克隆抗体均由重链序列和与之对应的轻链序列组成，轻链和重 链的可变区都决定对抗原的结合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体识别新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的NP蛋白和/或严重急性呼吸综合征冠状病毒SARS
‑
CoV的NP蛋白。2.根据权利要求1所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为第一种抗体、第二种抗体或两者的组合物；其中，所述第一种抗体的重链可变区VH的CDR序列如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.3所示，所述第一种抗体的轻链可变区VL的CDR序列如SEQ ID NO.4
‑
SEQ ID NO.6所示；所述第二种抗体的重链可变区VH的CDR序列如SEQ ID NO.17
‑
SEQ ID NO.19所示，所述第二种抗体的轻链可变区VL的CDR序列如SEQ ID NO.20
‑
SEQ ID NO.22所示。3.根据权利要求2所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述第一种抗体的重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.13所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列，所述第一种抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID No.14所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列；所述第二种抗体的重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.29所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列，所述第二种抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID No.30所示或与其具有至少80％一致性的氨基酸序列。4.一种与权利要求1～3中任一所述的单克隆抗体相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料选自下述(A)～(B)中的一种：(A)编码权利要求1～3中任一所述单克隆抗体的核酸分子；(B)含有(A)中所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞系。5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，编码SEQ ID NO.1所示的第一种抗体的CDR1
‑
H的核酸序列为SEQ ID NO.7；编码SEQ ID NO.2所示的第一种抗体的CDR2
‑
H的核酸序列为SEQ ID NO.8；编码SEQ ID NO.3所示的第一种抗体的CDR3
‑
H的核酸序列为SEQ ID NO.9；编码SEQ ID NO.4所示的第一种抗体的CDR1
‑
L的核酸序列为SEQ ID NO.10；编码SEQ ID NO.5所示的第一种抗体的CDR2
‑
L的核酸序列为SEQ ID NO.11；编码SEQ ID NO.6所示的第一种抗体的CDR3
‑
L的核酸序列为SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：张政，刘磊，鞠斌，郭慧敏，程林，周兵，宋硕，
申请(专利权)人：深圳市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：