具有中和活性的抗H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体ZCMU-H1N1及其应用制造技术

本发明专利技术提供抗H1N1流感病毒血凝素蛋白的中和性单克隆抗体ZCMU

【技术实现步骤摘要】
具有中和活性的抗H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体ZCMU
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H1N1及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及抗H1N1流感病毒血凝素蛋白中和性单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗血凝素蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗血凝素蛋白的单克隆抗体ZCMU
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H1N1，鉴定为IgG1、κ型，再通过亲和纯化等技术实现对该抗体的应用。

技术介绍

[0002]季节性流感病毒仍然是全球公共卫生威胁，其流行给公众健康和社会经济带来严重的影响。据估计，每年由流感病毒引起的死亡人数超过30万人，而引起人类流感感染最常见的病因是甲型流感病毒(包括H1N1和H3N2亚型)。2009
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2010年，甲型流感病毒(H1N1 pdm09)率先在墨西哥、加拿大和美国出现并迅速在全球蔓延，在流行期间第一年导致全球有至少15万人死亡。随后，甲型流感(H1N1 pdm09)取代了先前流行的季节性H1N1病毒，并一直保持季节性流行。另外，流行病学分析表明，在早期甲型H1N1流感大流行期间80％的死亡病例发生在年轻人(≤65岁)中，31％的甲型H1N1感染患者出现了继发性细菌性肺炎，这显著增加了住院率和死亡率。
[0003]当前接种流感疫苗仍然是控制流感的最经济有效的方法，但季节性流感病毒流行每年仍然会造成数以百万的感染以及数十万的住院病例发生。流感的早期临床症状与普通感冒相似，易被轻视，但流感患者病情可迅速进展，突然高热、肺炎，重者可以出现呼吸衰竭、多器官损伤，甚至死亡，病死率达6％。
[0004]当前临床治疗流感感染的治疗原则主要为抗病毒药物治疗(如奥司他韦)和支持治疗。其中抗病毒药物治疗需在症状出现后48小时内用药，否则抗病毒治疗的疗效将明显下降。另外，在临床研究中发现流感病毒在药物暴露期间会出现耐药突变，导致出现对奥司他韦耐药。由于耐药率增加、治疗时间窗等受限，寻求新型治疗流感感染的药物迫在眉睫。单克隆抗体因其具有高度的特异性和良好的安全性而得到广泛的应用，除了用于治疗癌症和自身免疫疾病外，一些单克隆抗体药物已被批准用于预防和治疗各种传染病的临床试验，例如帕利珠单克隆抗体预防呼吸道合胞病毒感染。
[0005]基于以上背景，本专利技术选定H1N1流感病毒血凝素蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该中和性单克隆抗体的成功获得，为治疗H1N1流感病毒感染提供新思路。
[0006]本专利技术用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种抗H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，能识别H1N1季节性流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，命名为ZCMU
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H1N1，能特异性识别流感病毒的血凝素蛋白。
[0008]SEQ ID No.1
[0009]Heavy chain:DNA sequence(360bp)
[0010]Signal sequence
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[0012]SEQ ID No.2
[0013]Heavy chain:Amino acid sequence(120AA)
[0014]Signal peptide
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[0017]Signal sequence
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[0019]SEQ ID No.4
[0020]Light chain:Amino acid sequence(108AA)
[0021]Signal peptide
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CDR2
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FR3
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CDR3
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[0022]QIVLSQSPTTMAASPGEKITITCSAS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗H1N1流感病毒血凝素蛋白中和性单克隆抗体ZCMU
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H1N1，该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，能与H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原特异结合。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体ZCMU
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H1N1，其特征在于：抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体ZCMU
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H1N1，其特征在于：所述抗体由杂交瘤细胞产生。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体ZCMU
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H1N1，其特征在于：产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞是由免疫的BALB/C小鼠脾淋...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆如凤，吴海波，杨帆，
申请(专利权)人：浙江省中医院，浙江中医药大学附属第一医院浙江省东方医院，
类型：发明
国别省市：