抗体介导的切昆贡亚热病毒的中和制造技术

本发明专利技术涉及结合并中和切昆贡亚热病毒(Chikungunya virus)(CHIKV)的抗体及其使用方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
抗体介导的切昆贡亚热病毒的中和
[0001]本申请是申请号为201680034592.6(申请日：2016年4月14，专利技术名称： 抗体介导的切昆贡亚热病毒的中和)的中国专利申请的分案申请。
[0002]本申请要求于2015年4月14日提交的美国临时申请系列No.62/147,354的 优先权的权益，其全部内容在此通过引用并入。
[0003][0004][0005]专利技术背景
1.

[0006]本公开一般涉及医药、传染疾病和免疫学领域。更具体地，本公开涉及 中和切昆贡亚热病毒的抗体。政府对本专利技术享有特定的权益。
2.
技术介绍

[0007]切昆贡亚热病毒(Chikungunya virus，CHIKV)是披膜病毒科(Togaviridae) 甲病毒属(Alphavirus)中的包膜的正义RNA病毒，由伊蚊(Aedes)蚊子传播。成 熟的CHIKV病毒体含有两种糖蛋白，E1和E2，它们是由前体多聚蛋白p62
‑
E1 通过蛋白水解切割产生的。E2在病毒附着中起作用，而E1介导膜融合以允许 病毒进入(Kielian等,2010)。在人类中，CHIKV感染引起发热和关节疼痛，这 可能是严重的并且在某些情况下持续多年(Schilte等,2013；Sissoko等,2009； Staples等,2009)。CHIKV在撒哈拉以南非洲大部分地区以及亚洲、欧洲、印 度洋和太平洋的部分地区引起爆发。2013年12月，在西半球发生了CHIKV 的第一次传播，在圣马丁(CDC 2013)鉴定了本地病例(autochthonous case)。 该病毒迅速蔓延到加勒比地区的所有岛屿以及中美洲、南美洲和北美洲。在 不到一年的时间里，西半球就有超过一百万的CHIKV疑似病例被报道，包括 美国在内的40多个国家的流行传播被记录在案(CDC，2014)。目前，没有获 得许可的疫苗或抗病毒治疗来预防或治疗CHIKV感染。
[0008]尽管对人类CHIKV感染的保护性免疫机制尚未完全了解，但体液应答控 制感染并限制组织损伤(Chu等,2013；Hallengard等,2014；Hawman等,2013； Kam等,2012b；Lum等,2013；Pal等,2013)。免疫人γ
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球蛋白中和培养细胞 中的感染性，并当在病毒接种后24小时内施用时预防小鼠发病(Couderc等, 2009)。已经描述了几种中和CHIKV感染的鼠单克隆抗体(mAb)(Brehin等, 2008；Goh等,2013；Masrinoul等,2014；Pal等,2013；Pal等,2014)，包括一 些当联合使用以治疗CHIKV攻击后的小鼠或非人灵长类动物时具有功效的 (Pal等,2013；Pal等,2014)。相比之下，已经报道了有限数量的人CHIKV mAb， 其中绝大多数显示出适度的中和活性(Fong等,2014；Fric等,2013；Lee等, 2011；Selvarajah等,2013；Warter等,2011)。

技术实现思路

[0009]因此，根据本公开，提供了一种检测受试者中的切昆贡亚热病毒感染的 方法，其
包括(a)使来自所述受试者的样品与具有分别来自表3和4的克隆配 对重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)通过所述抗体或抗体 片段与所述样品中的E2的结合检测所述样品中的切昆贡亚热病毒糖蛋白E2。 所述样品可以是体液，如血液、痰液、眼泪、唾液、粘液或血清、尿液或粪 便。检测可包括ELISA、RIA或蛋白质印迹。所述方法可进一步包括第二次 进行步骤(a)和(b)，和确定与第一次测定相比E2水平的变化。所述抗体可以 通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可 变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或 具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2 的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是 重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab
’
)2片段或Fv片段。所述抗体 可以是IgG和/或嵌合抗体。
[0010]在另一个实施方式中，提供了一种治疗感染有切昆贡亚热病毒的受试 者，或降低处于感染(contracting)切昆贡亚热病毒风险的受试者的感染可能性 的方法，其包括向所述受试者递送抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段具 有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可变序列具 有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或具有由如 表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2的克隆配 对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是重组ScFv(单 链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab
’
)2片段或Fv片段。所述抗体可以是IgG和/ 或嵌合抗体。所述抗体和抗体片段可以在感染前或感染后施用。递送可包括 抗体或抗体片段施用，或使用编码所述抗体或抗体片段的RNA或DNA序列或 者载体进行遗传递送。
[0011]在又一个实施方式中，提供了一种单克隆抗体，其中，所述抗体或抗体 片段的特征在于分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述抗体 可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配 对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码， 或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自 表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以 是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab
’
)2片段或Fv片段。所述抗 体可以是嵌合抗体，或靶向除糖蛋白之外的切昆贡亚热病毒抗原的双特异性 抗体。所述抗体可以是IgG。所述抗体或抗体片段进一步包含细胞穿透肽和/ 或是内抗体。
[0012]还提供的是编码抗体或抗体片段的杂交瘤或工程细胞，其中所述抗体或 抗体片段的特征在于分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述 抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克 隆配对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列 编码，或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或 与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片 段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab
’
)2片段或Fv片段。 所述抗体可以是嵌合抗体和/或IgG。所述抗体或抗体片段可进一步包含细胞 穿透肽和/或是内抗体。
[0013]在一个实施方式中，分离的特异性结合切昆贡亚热病毒糖蛋白E2的单克 隆抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链和轻链可变序列对：SEQ IDNO:53/54、55/56本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的和/或重组的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含克隆配对重链和轻链CDR序列，其选自：i)分别为SEQ ID NO：106、107和108的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：190、191和192的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；ii)分别为SEQ ID NO：109、110和111的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：193、194和195的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；iii)分别为SEQ ID NO：112、113和114的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：196、197和198的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；iv)分别为SEQ ID NO：115、116和117的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：199、200和201的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；v)分别为SEQ ID NO：118、119和120的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：202、203和204的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；vi)分别为SEQ ID NO：121、122和123的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：205、206和207的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；vii)分别为SEQ ID NO：124、125和126的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：208、209和210的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；viii)分别为SEQ ID NO：130、131和132的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：211、212和213的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；ix)分别为SEQ ID NO：133、134和135的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：214、215和216的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；x)分别为SEQ ID NO：136、137和138的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：217、218和219的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；xi)分别为SEQ ID NO：139、140和141的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：220、221和222的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；xii)分别为SEQ ID NO：151、152和153的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID NO：223、224和225的氨基酸序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3；xiii)分别为SEQ ID NO：154、155和156的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别为SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：范德比尔特大学，
类型：发明
国别省市：