【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，更确切地说，它涉及一种片状纳米铝佐剂核酸系统的制备方法和应用。
技术介绍
1、核酸药物在疫苗及疾病治疗中发挥了重要作用。代表性地，信使rna(mrna)和质粒(pdna)通过在靶细胞中表达特定的蛋白来发挥作用，而小干扰rna(sirna)则通过敲降目标基因来发挥治疗作用。然而，除sirna外，根据目的蛋白分子量的不同，mrna(2000-15000b)与pdna的分子量分布范围较广(2000-15000bp)，而传统的脂质体递送系统仅适用于特定分子量范围的核酸药物，这导致许多的核酸药物面临无递送系统可用的现状。
2、铝佐剂是疫苗的重要组成部分，在递送抗原和免疫调节性小分子进入免疫细胞，并诱导持久的诱导体液免疫应答中被广泛应用。现有铝佐剂包括硫酸铝钾、磷酸铝、氢氧化铝，均在疫苗制剂中广泛使用。在这些铝佐剂中，金属离子或阴离子的不同并未对佐剂活性造成显著差异。然而这些铝佐剂均面临注射后即在注射位点结块，难以进入淋巴系统，且递送抗原至免疫细胞效率低下的现状。
技术实现思路
1、第一方面，本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提出了一种片状纳米铝佐剂核酸系统的制备方法和应用，使所得产品结构均一、粒径分布均匀、成本低、安全性高、质量可靠，且制备的纳米铝佐剂核酸递送系统能够将核酸分子如mrna有效递送进组织细胞中，使响应的组织细胞高效表达相应蛋白。上述方法包括：步骤1、制备二价金属氢氧化物的混悬液，调节二价金属氢氧化物的混悬液ph在7.0-9.0之间；>
2、步骤2、制备氢氧化铝的混悬液，氢氧化铝的摩尔浓度介于0.0001-1m；
3、步骤3、向所述氢氧化铝的混悬液加入所述二价金属氢氧化物的混悬液，并进行水热处理获得片状纳米铝佐剂；所述二价金属氢氧化物与氢氧化铝的摩尔比介于1-5:1之间；
4、步骤4、将核酸药物分散在蛋白溶液中，随后加入所述片状纳米铝佐剂并进行共吸附，获得均一化的纳米铝佐剂核酸系统。
5、作为优选，步骤3中，通过调控氢氧化物的混悬液的水热温度和时间来控制片状纳米铝佐剂的粒径；片状纳米铝佐剂的粒径介于20-1000nm；，水热温度介于0-200摄氏度之间；水热时间为0-336小时。
6、作为优选，步骤4中，蛋白和片状纳米铝佐剂的质量比为2-20：1。
7、作为优选，步骤4中，蛋白的种类包括：白蛋白、γ-球蛋白、马肌红蛋白、溶菌酶和血清中的至少一种。
8、作为优选，步骤4中，核酸药物的核酸分子种类为sirna、mrna或pdna，核酸分子的分子量介于10-20000碱基或碱基对之间。
9、作为优选，步骤4中，片状纳米铝佐剂对核酸分子完全吸附的质量比介于1-20:1之间。
10、作为优选，步骤4中，所述纳米铝佐剂核酸系统用于进入目标细胞，并对目标蛋白进行特异性表达或敲降；所述目标细胞包括肿瘤细胞、抗原呈递细胞和淋巴细胞。
11、作为优选，所述肿瘤细胞包括小鼠结肠癌细胞系ct26、乳腺癌细胞系4t1、黑色素瘤细胞系b16f10、人宫颈癌细胞系hela；所述抗原呈递细胞包括树突状细胞和巨噬细胞；所述淋巴细胞包括t细胞和b细胞。
12、第二方面，提供了如第一方面任一所述方法制备得到的片状纳米铝佐剂核酸递送系统。
13、第三方面，提供了如第一方面任一所述方法制备得到的片状纳米铝佐剂核酸递送系统在制备用于抑制实体瘤药物的应用，所述实体瘤包括黑色素瘤、结肠癌、肝癌和乳腺癌。
14、本专利技术的有益效果是：
15、1.本专利技术中片状纳米铝佐剂合成工艺简单，获得的产品粒径在20-1000nm范围内均一可控。
16、2.本专利技术中片层在纳米铝佐剂对不同分子量的核酸分子均具有高负载效率，且能够在微酸环境下快速释放核酸分子。
17、3.本专利技术中纳米铝佐剂核酸系统能够在体内外实现高效核酸递送，且其递送效率与市售商业化转染试剂lipofectamine(lipo m)相当。
18、4.本专利技术中纳米铝佐剂核酸递送系统，能够在体内编码肿瘤细胞表达特定抗原蛋白，显著提高肿瘤疫苗和t细胞疗法疗效。
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1.一种片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤3中，通过调控氢氧化物的混悬液的水热温度和时间来控制片状纳米铝佐剂的粒径；片状纳米铝佐剂的粒径介于20-1000nm；，水热温度介于0-200摄氏度之间；水热时间为0-336小时。
3.根据权利要求1或2所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，蛋白和片状纳米铝佐剂的质量比为2-20：1。
4.根据权利要求3所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，蛋白的种类包括：白蛋白、γ-球蛋白、马肌红蛋白、溶菌酶和血清中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，核酸药物的核酸分子种类为siRNA、mRNA或pDNA，核酸分子的分子量介于10-20000碱基或碱基对之间。
6.根据权利要求5所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，片状纳米铝佐剂对核酸分子完全吸附的
7.根据权利要求6所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，所述纳米铝佐剂核酸系统用于进入目标细胞，并对目标蛋白进行特异性表达或敲降；所述目标细胞包括肿瘤细胞、抗原呈递细胞和淋巴细胞。
8.根据权利要求7所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞包括小鼠结肠癌细胞系CT26、乳腺癌细胞系4T1、黑色素瘤细胞系B16F10、人宫颈癌细胞系Hela；所述抗原呈递细胞包括树突状细胞和巨噬细胞；所述淋巴细胞包括T细胞和B细胞。
9.一种如权利要求1至8任一所述方法制备得到的片状纳米铝佐剂核酸递送系统。
10.一种如权利要求1至8任一所述方法制备得到的片状纳米铝佐剂核酸递送系统在制备用于抑制实体瘤药物的应用，所述实体瘤包括黑色素瘤、结肠癌、肝癌和乳腺癌。
...【技术特征摘要】
1.一种片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤3中，通过调控氢氧化物的混悬液的水热温度和时间来控制片状纳米铝佐剂的粒径；片状纳米铝佐剂的粒径介于20-1000nm；，水热温度介于0-200摄氏度之间；水热时间为0-336小时。
3.根据权利要求1或2所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，蛋白和片状纳米铝佐剂的质量比为2-20：1。
4.根据权利要求3所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，蛋白的种类包括：白蛋白、γ-球蛋白、马肌红蛋白、溶菌酶和血清中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的片状纳米铝佐剂核酸递送系统的制备方法，其特征在于，步骤4中，核酸药物的核酸分子种类为sirna、mrna或pdna，核酸分子的分子量介于10-20000碱基或碱基对之间。
6.根据权利...
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