【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于甲壳类病原防控，具体涉及一种甲壳类病原血卵涡鞭虫和肌孢虫的感染和药物筛选模型及其应用。
技术介绍
1、血卵涡鞭虫(hematodinium spp.)是一类海水甲壳类的寄生性甲藻(parasiticdinoflagellate)，自1931年首次报道以来，世界范围内40多种甲壳动物中有该病原的阳性检出。目前该属仅有两个正式命名的物种，即典型种h.perezi和h.australis。
2、血卵涡鞭虫在2004年中国浙江舟山地区养殖的三疣梭子蟹中首次发现，目前该病原已成为三疣梭子蟹(portunus trituberculatus)、拟穴青蟹(scylla paramamosain)、锯缘青蟹(scylla serrata)和脊尾白虾(exopalaemon carinicauda)等重要经济甲壳类的重要病原之一。以山东青岛地区为例，2018年血卵涡鞭虫在夏季发病高峰的三疣梭子蟹中，宿主有90％的阳性检出率。基于血卵涡鞭虫第一内转录间隔区(internal transcribedspacer 1，its1)基因序列的遗传比对分析，h.perezi被分为三个基因型，其中h.perezi ii型为我国的流行株。
3、血卵涡鞭虫致病机制目前仍并不明确，新宿主不断被发现。近年来的调查发现，山东沿海地区三疣梭子蟹养殖池塘中的多种野生蟹类为该病原的自然宿主，包括有天津厚蟹(helice tientsinensis)、伍氏拟厚蟹(helice wuana)、绒螯近方蟹(hemigrapsuspenicill
4、微孢子虫(microsporidia)是一种细胞内专性寄生的真菌类寄生虫，能感染几乎所有的脊椎动物和无脊椎动物。近年来，新微孢子虫属种也在不断发现中。目前已经发现至少187个属的微孢子虫，约1500个种，其中超过80个属可感染水生生物，40多个属可感染甲壳类。当前可感染海水蟹类的微孢子虫约有5个属，分别是abelspora spp.、ameson spp.、areospora spp.、nadelspora spp.和thelohania spp.。
5、微孢子虫近年来ameson spp.各类微孢子虫感染海水蟹的报道相对较多，其中肌孢虫(a.portunus)自2017年首次报道以来，现已成为三疣梭子蟹和拟穴青蟹的重要寄生病原，感染甲壳动物后最常见的症状表现为动物腹部出现不透明或白色，其下的肌肉组织具有“煮熟状”或“棉花状”外观，所感染三疣梭子蟹也被称为“牙膏蟹”。另外，生活在切萨皮克湾马里兰州海岸，路易斯安那州和密西西比州海岸的墨西哥湾的蓝蟹中有a.michaelis感染报道。
6、目前，甲壳类寄生性甲藻血卵涡鞭虫和肌孢虫均没有有效防控的方法。动物的感染模型及药物筛选模型在病原的致病、宿主免疫及药物筛选中可发挥重要作用。选择合适的感染模型进行药物筛选十分重要，若采用养殖蟹类如三疣梭子蟹作为两种病原的感染对象，存在个体大，成本高，对养殖条件要求高等问题，该蟹通常是池塘养殖(如北方的山东地区)，一年养殖一季，因此获得合适规格大小的该蟹的时间有限，影响相关实验的正常开展。另外常用常规方法的药物评估存在个体差异大而影响对药物效果的评估。为克服以上问题，有必要开展病原的感染模型和药物筛选模型的研究，该研究中也有必要解决个体差异给药物评估效果带来的影响。
技术实现思路
1、针对甲壳类血卵涡鞭虫和肌孢虫尚没有感染及药物筛选模型的现状，以及现有常规的药物筛选及评估技术中存在的缺陷,本专利技术提供了一种甲壳类病原的感染和药物筛选模型及其应用。
2、本专利技术通过以下技术方案实现：
3、一种甲壳类病原的感染和药物筛选模型，所述模型所用的动物为短身大眼蟹(macrophthalmus abbreviatus)和天津厚蟹(helice tientsinensis)；所述病原为寄生性甲藻血卵涡鞭虫(h.perezi)和肌孢虫(a.portunus)。
4、所述感染模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
5、所述药物筛选模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
6、所述人工感染包括以下方法：
7、(1)通过向健康蟹注射病原的粗提液或纯化液，其注射部分为蟹类第五附肢关节膜处；
8、(2)通过向健康蟹的养殖水体中加入病原的粗提液或纯化液，或通过将健康蟹与感染病原的病蟹进行共栖；
9、(3)通过投喂感染病原的病蟹的病料给健康蟹。
10、所述感染模型应用于病原消毒剂的筛选、病原致病机理及宿主免疫研究。
11、所述感染模型的病原感染效果的评价，可采用对血淋巴中病原加上染色后再显微镜下的病原计数或定量pcr方法对血淋巴中病原进行定量检测分析。
12、所述药物筛选模型应用于抗甲壳类病原的药物的研究及筛选。
13、所述药物筛选模型的应用方法，对所述模型进行用药，采集血淋巴，通过检测用药前后血淋巴中病原数量或载量的变化，对药物进行筛选和效果评估，用药后，若病原数量或载量下降，则药物有效。
14、所述用药方式包括：
15、(1)注射药物，将药物注射到模型体内，注射部位可以为蟹类第五附肢关节膜基部处，注射前用75％的酒精棉球进行消毒处理；
16、(2)浸泡药物，将药物溶于所述模型的养殖水体中；
17、(3)口服药物，将药物加入饲料中进行投喂。
18、所述血淋巴中病原数量或载量的检测方法包括：
19、(1)将血淋巴中的病原加以染色后在显微镜下计数；其中血卵涡鞭虫的染色方法参见huang等(2021)(huang qian；li meng；wang fei；song shuqun；licaiwen.transmissionpattern of the parasitic dinoflagellate hematodiniumpereziin polyculture ponds of coastal china.[j].aquaculture.2021:736549.)，肌孢虫的染色方法可参见zhao等(2020)用calcofluor white(cfw)对微孢子虫的染色方法(ruo-heng zhao,wen gao,liang qiu,xing chen,xuan dong,chen li,jie huang,astaining method for detection of enterocytozoon hepatopenaei(ehp)spores withcalcoflu本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述模型所用的动物为短身大眼蟹和天津厚蟹。
2.根据权利要求1所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述病原为寄生性甲藻血卵涡鞭虫和肌孢虫。
3.根据权利要求2所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述感染模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
4.根据权利要求2所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述药物筛选模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
5.根据权利要求3或4所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述人工感染包括以下方法：
6.一种权利要求1所述甲壳类病原的感染和药物筛选模型的应用，其特征在于：所述感染模型应用于病原消毒剂的筛选、病原致病机理及宿主免疫研究。
7.一种权利要求1所述甲壳类病原的感染和药物筛选模型的应用，其特征在于：所述药物筛选模型应用于抗甲壳类病原药物的研究及筛选。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述用药方式包括：
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述血淋巴中病原数量或载量的检测方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述模型所用的动物为短身大眼蟹和天津厚蟹。
2.根据权利要求1所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述病原为寄生性甲藻血卵涡鞭虫和肌孢虫。
3.根据权利要求2所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述感染模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
4.根据权利要求2所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述药物筛选模型为自然或人工感染血卵涡鞭虫和/或肌孢虫的短身大眼蟹和/或天津厚蟹。
5.根据权利要求3或4所述的甲壳类病原的感染和药物筛选模型，其特征在于：所述人工感染包括以下方法：
【专利技术属性】
技术研发人员：谢国驷，黄倢，刘正敏，杨柳鑫，毕竞男，万晓媛，王海亮，史成银，张庆利，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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