一种抗II型糖尿病中性海参多糖、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种抗II型糖尿病中性海参多糖、制备方法及其应用，包括步骤：淡干海参磨碎，蛋白酶酶解，阴离子交换柱柱分离得到海参多糖，通过胰岛素抵抗Hep G2细胞评价其抗糖尿病活性。本发明专利技术方法得到的海参中性多糖为首次报道其活性及其活性，可显著提高胰岛素抵抗Hep G2细胞葡萄糖摄取能力，由于其类淀粉结构，在制剂压片过程中，作为活性物质的同时，也可以做为辅料稳定剂。可以做为辅料稳定剂。可以做为辅料稳定剂。

【技术实现步骤摘要】
一种抗II型糖尿病中性海参多糖、制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医疗保健领域，也是一种对海参的综合利用，具体涉及一种具有抗II型糖尿病中性海参多糖、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种以长期高血糖为主要特征的慢性内分泌代谢性疾病，主要分为I型和II型两种，其中I型糖尿病主要表现为胰岛素的缺失及不足，但II型糖尿病更为复杂，普遍表现为胰岛素抵抗，即胰岛素靶器官对胰岛素的反应性降低，由此引起的糖、脂肪代谢紊乱所带来的一系列并发症严重威胁着人类健康，目前糖尿病已成为继心脑血管疾病和癌症之后的第三大致残和致死性疾病。因此，提高胰岛素敏感性，改善糖尿病患者的胰岛素抵抗状态，对II型糖尿病及其并发症的治疗具有重要意义。
[0003]海参是一种无脊椎动物，归属于无脊椎动物棘皮动物门(Echinodermata)的海参纲(Holothuridea)。海参中含量最多的为胶原蛋白，因其高蛋白含量，有着极高的营养价值，味道鲜美位列海洋八珍之首，是海洋中重要的食物和药物资源。近几年来，国内外在海参的生物活性物质及其药理作用等方面的研究较多，已经先后从几十种海参中分离获得了多种活性物质，包括多肽、多糖、脂类、三萜皂苷、凝集素、神经肽和糖肽等。海参中最重要的活性物质是海参多糖，海参多糖在海参体壁中通过共价键连接在胶原蛋白纤维上。其中海参多糖中研究最多的是带有硫酸根的酸性多糖，包括岩藻糖基化硫酸软骨素和岩藻聚糖硫酸酯。其中海参硫酸酯多糖因其结构与肝素类似，因此具有较高的抗凝血、抗血栓、活性，同时还具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎和抗糖尿病等活性。罗兰在研究一种海参Holothuria edulis的硫酸根多糖时，偶然发现一种中性多糖，但遗憾的是，后续没有这种中性多糖的结构和活性报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种中性海参多糖、制备方法及其应用，发现一种具有抗糖尿病活性的新颖的中性海参多糖。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的具体实施方法如下：一种抗II型糖尿病中性海参多糖，其化学结构式如下：。
[0006]一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将淡干海参磨碎得海参粉，酶解；
（2）将步骤（1）中获得的海参粉酶解液提取多糖，同时柱分离纯化，得纯净多糖；（3）对步骤（2）制备的海参多糖用胰岛素抵抗Hep G2细胞模型评价抗糖尿病活性；（4）对步骤（2）制备的海参多糖同时作为活性成分和辅料制作海参多糖降糖压片；一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述海参为市售淡干海参。
[0007]一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述海参粉酶解所用生物酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或几种；酶解条件为料液比1:5~1:20；温度30~60℃；酶解时间10~24小时。
[0008]一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述柱层析方法所用填料为阴离子交换树脂，包括但不限于DEAE、DE52、QFF，以0M， 2M NaCl水溶液洗脱两步即可获得中性多糖组分，取水洗脱组分透析冻干，透析冻干得精制中性海参多糖。
[0009]一种抗II型糖尿病中性海参多糖的应用，其特征在于该抗II型糖尿病中性海参多糖应用于抗II型糖尿病。
[0010]本专利技术有益的技术效果在于：海参多糖目前的工业化制备受限主要是因为其酸性多糖的分离纯化成本过高。但是海参多糖中的中性多糖常常被忽略，本专利技术中的中性多糖提取率为5.4%，显著高于酸性多糖FCS及Fucoidan的2.3%和1.7%。经鉴定，中性多糖的结构为α
‑
1,4糖苷键连接的主链，每7~8个单糖重复单元通过α
‑
1,6糖苷键连接一分子单糖的葡聚糖，为首次报道。
附图说明
[0011]图1：海参中性多糖NPsj的结构鉴定。A)单糖组成分析；B)FTIR分析；C, D)一维核磁分析图2：海参中性多糖NPsj抗糖尿病活性测定。A)MTT法测定细胞活力；B)NPsj对胰岛素抵抗Hep G2细胞葡萄糖摄取能力的影响。*代表相对于对照组有显著性差异（p < 0.05），#代表相对于模型组有显著性差异（p < 0.05）。
[0012]具体实施方式：下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明，但不限于此。
[0013]同时下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0014]实施例1：一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备及其应用，具体工艺参数如下：(1) 取淡干海参500 g，磨碎，加入5 g木瓜蛋白酶，2500 mL水混匀， 50℃酶解20h，煮沸20 min灭酶，调节pH=2.5，离心得上清液，加入7500 mL 2 M KAc乙醇溶液，于4 ℃冰箱过夜，离心冻干得粗多糖，用DEAE阴离子交换柱，以0M， 2M NaCl水溶液洗脱，取水洗脱组分透析冻干；(2) 以2M 三氟乙酸110℃降解海参多糖6h，用PMP
‑
HPLC法检测单糖组成；KBr压片后进行FTIR分析，重水交换后用400 M核磁获取其氢谱和碳谱。其结果见附图1；实施例2：一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备及其应用，其抗糖尿病活性测定方法如
下：(1) 采用肝癌Hep G2细胞检测海参多糖抗糖活性，Hep G2细胞按照1
ꢀ×ꢀ
105个细胞/mL浓度铺板后，利用18 mM葡萄糖胺诱导24h产生胰岛素抵抗，加入海参多糖样品，同时以罗格列酮为阳性对照，检测海参多糖对肝癌细胞胰岛素抵抗的抑制作用；(2) 收集细胞培养上清液，利用葡萄糖氧化酶法测定其葡萄糖含量，从而计算各实验组其葡萄糖消耗，同时用MTT法检测各浓度海参多糖对细胞活力的影响。其结果见附图2；实施例3：一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备及其应用，其抗糖尿病压片配方及制备如下：取上述制备的海参多糖100g，枸杞多糖提取物80g，罗汉果皂苷提取物20g，微晶纤维素100g，木糖醇50g，硬脂酸镁5g，于混料机中混匀，压片，200mg每片。
[0015]上述的具体3种实施方式是示例性的，目的在于使得技术人员能够理解本专利，在本专利的基础上的所作的任何同等变更或修改，均在本专利包括的范围内。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗II型糖尿病中性海参多糖，其化学结构式如下：。2.一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将淡干海参磨碎得海参粉，酶解；（2）将步骤（1）中获得的海参粉酶解液提取多糖，同时柱分离纯化，得纯净多糖；（3）对步骤（2）制备的海参多糖用胰岛素抵抗Hep G2细胞模型评价抗糖尿病活性；（4）对步骤（2）制备的海参多糖同时作为活性成分和辅料制作海参多糖降糖压片；根据权利要求2所述的一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述海参为市售淡干海参。3.根据权利要求2所述的一种抗II型糖尿病中性海参多糖的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠静，吴彦超，公丕贤，
申请(专利权)人：威海海洋生物医药产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：