一种蛋白粉中酵母β-葡聚糖的提取及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白粉中酵母β

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白粉中酵母
β
‑
葡聚糖的提取及检测方法


[0001]本专利技术属于食品检测
，具体涉及一种蛋白粉中酵母β
‑
葡聚糖的提取及检测方法。

技术介绍

[0002]酵母β
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葡聚糖为国家新食品原料，是存在于酵母细胞壁中的一种具有增强免疫力活性的多糖，并具有改善血脂、抗辐射、改善肠道功能的作用。
[0003]因食品中酵母β
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葡聚糖添加量低，基质多且复杂，酵母β
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葡聚糖原料的检测方法不适用于食品中酵母β
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葡聚糖的检测，如《QB/T 4572
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2021酵母β
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葡聚糖》和美国药典的方法。目前针对食品中酵母β
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葡聚糖的检测方法有《QB/T4572
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2021酵母β
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葡聚糖附录A》和《食品安全国家标准食品中酵母β
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葡聚糖的测定
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征求意见稿》，且两种方法内容一致，可认为是同一个检测方法，其检测方法主要参考了美国药典的方法。采用现有的食品中酵母β
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葡聚糖的方法检测酵母β
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葡聚糖蛋白粉中酵母β葡聚糖会有如下问题和困难：
[0004]1.方法适用性问题，目前的方法适用于调制乳、风味发酵乳、调制乳粉和婴幼儿配方乳粉中不溶性酵母β
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葡聚糖的测定，而酵母β
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葡聚糖蛋白粉为蛋白食品类，不属于乳品类。乳品类食品按此方法处理可以分离出纯度比较高的酵母β
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葡聚糖，残渣量也很少，这对后续的碱处理以及定量操作均有帮助，而酵母β
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葡聚糖蛋白粉按方法处理获得的残渣量非常多，并影响了后面的碱处理以及定量操作，说明该方法对酵母β
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葡聚糖蛋白粉的除杂能力不够。因此，酵母β
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葡聚糖蛋白粉对该方法的适用性不好。
[0005]2.方法的精密度问题，该方法没有严格的定容操作，在酵母β
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葡聚糖的提取分离过程中会造成一定的损失，在酶解的过程中又经过了多次的吸量、稀释操作，放大了检测误差，因此，方法的精密度只能做到≤15％。
[0006]3.方法的可操作性问题，方法每次均需要按不同品种引入不同的空白样品和酵母β
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葡聚糖对照品来校正检测结果，引入空白样品会增加检测量，而且须保留不同配方的空白样品，且对酵母β
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葡聚糖对照品有特殊要求，必须为水不溶性酵母β
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葡聚糖，对日常检测和外部检测都难以实现；方法操作步骤多，对人的操作能力要求高，整个检测过程耗时2
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3天，检测效率并不高；而且酶解过程影响因素多，检测过程难以把控。
[0007]4.方法的成本问题，方法所需的酶价格昂贵，对大批量样品检测成本高。
[0008]因此，亟需提供一种提取方法简单、准确性好，检测成本低的酵母β
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葡聚糖的提取及检测方法。

技术实现思路

[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种酵母β
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葡聚糖的提取及检测方法，该专利技术能够从酵母β葡聚糖蛋白粉中提取、分离、纯化酵母β
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葡聚糖，且提取方法简单、准确，检测成本低。
[0010]为实现上述专利技术目的，本专利技术技术方案如下：
[0011]一种酵母β
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葡聚糖的提取方法，包括以下步骤：向样品中加入预处理液混匀水浴处理，得到处理液。
[0012]优选地，所述样品和预处理液的质量体积比为0.2：9
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11；最优选为0.2：10.0。
[0013]优选地，所述预处理液为缓冲液和热稳定α
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淀粉酶。
[0014]进一步优选地，所述缓冲液与热稳定α
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淀粉酶的体积比为10：0.04
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0.06；最优选为10：0.05。
[0015]优选地，所述的缓冲液为Tris缓冲液。
[0016]在一些优选的实施例中，所述酵母β
‑
葡聚糖的提取方法，还包括蛋白酶解。
[0017]具体地，所述蛋白酶解，包括以下步骤：
[0018](1)将处理液离心，得到沉淀，向沉淀中加入Tris缓冲液、中性蛋白酶和碱性蛋白酶，混匀，水浴加热，冷却，得到酶解溶液；
[0019](2)将步骤(1)得到的酶解溶液离心，得到沉淀，向沉淀中加水和氯化铝溶液，混匀，再加入氨水，混匀，离心，得到沉淀物；
[0020](3)用苯酚硫酸溶液将步骤(2)得到的沉淀物溶解，得到待提取液。
[0021]优选地，步骤(2)中所述氯化铝溶液的质量浓度为4.5
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5.5％；最优选为5％。
[0022]优选地，步骤(2)中所述氯化铝溶液和氨水的体积比为4
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6：1；最优选为5：1。
[0023]本专利技术还提供了一种酵母β
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葡聚糖的检测方法，具体为：利用上述提取方法对样品中的酵母β
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葡聚糖进行提取后，采用硫酸苯酚法测定酵母β
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葡聚糖。
[0024]本专利技术的有益效果为：
[0025]本专利技术根据酵母β
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葡聚糖为水不溶的特性，样品先经过淀粉酶水解，离心去离心液，去除淀粉、糊精、水溶性糖、水溶性蛋白质等水溶性杂质；再用蛋白酶水解去除不溶性蛋白质，离心去离心液，残留的残渣即为酵母β
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葡聚糖，残渣用沉淀剂吸附，防止洗涤时损失；最后用苯酚硫酸溶液溶解残渣、检测。相比于目前的检测方法，本专利技术具有以下优势：
[0026](1)除杂效果好，该方法最终能到一种结构松散的粉末，与酵母β葡聚糖原料的性状一致；专属性高，通过阴性样品试验，确认其它杂质对检测无明显干扰；检测结果准确，检测结果能够达到实际含量的97％。
[0027](2)精密度高，本专利技术对酵母β
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葡聚糖的损失非常少，采用容量瓶定容，定容准确，检测精密度可做到≤5％，优于目前常规的≤15％。
[0028](3)可操作性好，本专利技术仅针对样品检测，不需额外增加修正检测结果的方法，也不涉及复杂的酶解、稀释操作，且酶的性质稳定，不存在不稳定性的因素；耗时短，1天即可完成检测。
[0029](4)成本低，本专利技术不需要购买价格高昂的酶制剂，其它试剂均为实验室常规试剂，检测成本非常低。
[0030](5)灵敏度高，目前常规的检测方法可检测酵母β
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葡聚糖的范围为1.5mg至12.5mg酵母β
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葡聚糖，而本专利技术的检测范围为0.25mg至5mg酵母β
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葡聚糖，方法的灵敏度更高。
附图说明
[0031]图1为实施例1检测方法的标准工作曲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酵母β
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葡聚糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：向样品中加入预处理液混匀水浴处理，得到处理液。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述样品和预处理液的质量体积比为0.2：9
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11。3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述预处理液为缓冲液和热稳定α
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淀粉酶。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述缓冲液与热稳定α
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淀粉酶的体积比为10：0.04
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0.06。5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述的缓冲液为Tris缓冲液。6.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，还包括对处理液进行蛋白酶解。7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述蛋白酶解包括以下步骤：(1)将处理液离心，得到沉淀，向沉淀中加入Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨祖伟，苏杜威，李珍，黄玲，邱春媚，付小蓉，蔡良平，黄双庆，陈翠婷，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：