支原体培养基制剂制造技术

本发明专利技术涉及用于支原体生长的不含猪血清和动物(主要是牛脑和脊髓)来源成分的培养基制剂。合理地设计培养基制剂，以保持支原体的抗原性。在这些培养基制剂中生长的支原体可用于疫苗，特别是多价猪疫苗。特别是多价猪疫苗。特别是多价猪疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】支原体培养基制剂


[0001]本专利技术涉及不含猪血清并且具有最少或没有动物来源成分的培养基制剂。所述培养基制剂可用于支原体物种的生长，特别是猪肺炎支原体。合理地设计培养基制剂，以优化支原体生长，同时保持抗原性基因表达。在所公开的培养基制剂中生长的支原体适用于猪疫苗。

技术介绍

[0002]支原体是一种缺乏细胞壁的小型革兰氏阴性菌，通常不具移动性，并且经常对哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类、昆虫以及甚至植物是寄生性或致病性的。大量的支原体物种被归入支原体科。支原体可能是共生细菌，并且经常在哺乳动物的粘膜中发现。多于一种的支原体可以定植于特定的粘膜表面。支原体被认为是各种疾病状态的病原体，尤其是在免疫受损的生物体中。在一些情况下，支原体致病性可能与病毒或其他细菌的存在有关。支原体也可以充当继发性感染因子。
[0003]为了控制、减少或预防支原体相关的疾病，需要有效的疫苗。需要支原体的培养物来生产用于此类疫苗的抗原，但支原体的本质存在困难。支原体是最小的自我复制的非病毒生物体，并且它们含有相应的小基因组，估计少于约一千个总基因。这种限制性的基因组缺乏许多生产必需营养物所需的酶，因此支原体依赖于宿主细胞因子或细胞培养补充剂用于生长。例如，支原体经常需要鸟嘌呤和胞嘧啶核苷以及胆固醇或其他脂质的外部来源。因此，支原体必须具有其环境的特征，这改变了抗原表达和免疫原性，并且含有支原体的疫苗的功效根据用于生长支原体的过程和补充剂而变化。
[0004]多种支原体与猪的疾病有关。猪滑液支原体被认为会导致猪关节炎，猪嗜血支原体可以导致贫血，并且猪鼻炎支原体可能会导致纤维蛋白性多浆膜炎，尤其是在年轻猪中。猪肺炎支原体(“Mhp”)引起地方性肺炎，并且是猪呼吸道疾病综合征(PRDC)以及猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒和流感病毒的因素。
[0005]当支原体抗原与一种或多种其他细菌或病毒(诸如例如PRRS病毒、流感病毒、猪细小病毒、非洲猪瘟病毒和/或猪圆环病毒
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2(PCV
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2))组合时，多价疫苗经常是期望的。然而，虽然当在猪血清中作为胆固醇来源等生长时，支原体作为抗原是最有效的，但血清含有可能干扰针对其他病原体(尤其是PCV
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2)的免疫的抗体。为了减少或消除抗PCV2抗体，其他人已经通过蛋白质A/G柱去除了抗体(参见例如美国专利第9,120,859号)，但这既费力又费钱。已经开发了低血清培养系统(参见例如美国专利第9,273,281号)，但这些可能含有污染性真核细胞因子，因此培养的支原体可能没有最佳的免疫原性。
[0006]需要一种改进的培养支原体的方法，其中生长被优化，但污染物被减少或消除，并且免疫原性被保留。出于商业目的，该方法应具有成本效益且易于实施，并且应限制不期望的污染物。本文公开了一种合理设计的培养支原体的方法、用于实施该方法的培养基制剂以及使用该方法制备的含有支原体的疫苗。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括氯化胆碱、烟酰胺、烟酸、L
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甲硫氨酸、L
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半胱氨酸、腐胺二盐酸盐、焦磷酸硫胺素、L
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抗坏血酸钠、精胺、5
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磷酸吡哆醛一水合物、四氢叶酸、3
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脱磷酸辅酶和核黄素。所述组合物可以被用作支原体生长补充剂(“MGS”)。使用MGS生长的支原体可能是猪滑液支原体；猪嗜血支原体；猪鼻炎支原体；或猪肺炎支原体(“Mhp”)。使用MGS生长的支原体可能是猪肺炎支原体。使用MGS生长的支原体可以是能够在猪动物、组织或细胞中或其上生长的任何支原体。MGS的组分可以以约0.5mg/L氯化胆碱；约0.025mg/L烟酰胺；约0.025mg/L烟酸；约0.1mM L
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甲硫氨酸；约1.5mM L
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半胱氨酸；约0.1mM腐胺二盐酸盐；约0.01mg/L焦磷酸硫胺素；约0.284mM L
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抗坏血酸钠；约0.1mM精胺；约0.025mg/L 5
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磷酸吡哆醛一水合物；约0.05mg/L四氢叶酸；约0.025mg/L 3
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脱磷酸辅酶A；和约0.01mg/L核黄素的最终浓度存在于完全生长培养基中。
[0008]本专利技术提供了一种培养支原体的方法，包括将支原体置于包括基础培养基、马血清和支原体生长补充剂的培养基中。基础培养基选自Frey培养基和猪脑心灌注(p
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BHI)培养基。MGS包括氯化胆碱、烟酰胺、烟酸、L
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甲硫氨酸、L
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半胱氨酸、腐胺二盐酸盐、焦磷酸硫胺素、L
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抗坏血酸钠、精胺、5
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磷酸吡哆醛一水合物、四氢叶酸、3
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脱磷酸辅酶和核黄素。MGS的组分可以以约0.5mg/L氯化胆碱；约0.025mg/L烟酰胺；约0.025mg/L烟酸；约0.1mM L
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甲硫氨酸；约1.5mM L
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半胱氨酸；约0.1mM腐胺二盐酸盐；约0.01mg/L焦磷酸硫胺素；约0.284mM L
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抗坏血酸钠；约0.1mM精胺；约0.025mg/L 5
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磷酸吡哆醛一水合物；约0.05mg/L四氢叶酸；约0.025mg/L 3
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脱磷酸辅酶A；和约0.01mg/L核黄素的最终浓度存在于完全生长培养基中。
[0009]本专利技术提供了一种培养支原体的方法，其中使用所述方法生长的支原体可以是能够在猪动物、组织或细胞中或其上生长的任何支原体。使用所述方法生长的支原体可以是猪滑液支原体；猪嗜血支原体；猪鼻炎支原体；或猪肺炎支原体(“Mhp”)。使用所述方法生长的支原体可以是猪肺炎支原体。
[0010]本专利技术提供了一种培养支原体的方法，包括将支原体置于包括基础培养基、马血清和支原体生长补充剂的培养基中。马血清可以以约2.5％v/v至约10％v/v存在于完全培养基中。马血清可以以约5％v/v至约10％v/v存在于完全培养基中。马血清可以以约10％v/v存在于完全培养基中。马血清可以以约2％、2.5％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％存在于完全培养基中。
[0011]本专利技术提供了一种培养支原体的方法，包括将支原体置于包括基础培养基、马血清和支原体生长补充剂的培养基中，并且将支原体在37℃下培养3
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15天。本专利技术提供了一种培养支原体的方法，包括将支原体置于包括基础培养基、马血清和支原体生长补充剂的培养基中，并且将支原体在37℃下培养3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15天。支原体培养也可以包括轨道摇动。
[0012]本专利技术提供了一种制备免疫原性组合物的方法，包括将支原体置于包括基础培养基、马血清和支原体生长补充剂的培养基中；在37℃下孵育支原体；和灭活支原体。基础培养基选自Frey培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，包括氯化胆碱、烟酰胺、烟酸、L
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甲硫氨酸、L
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半胱氨酸、腐胺二盐酸盐、焦磷酸硫胺素、L
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抗坏血酸钠、精胺、5
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磷酸吡哆醛一水合物、四氢叶酸、3
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脱磷酸辅酶和核黄素；其中所述组合物是支原体生长补充剂(“MGS”)。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述支原体选自由猪滑液支原体；猪嗜血支原体；猪鼻炎支原体；和猪肺炎支原体(“Mhp”)组成的群组。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述支原体是猪肺炎支原体。4.一种培养支原体的方法，包括将支原体置于培养基中，所述培养基包括：选自由Frey培养基和猪脑心灌注(p
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BHI)培养基组成的群组的基础培养基；马血清；和支原体生长补充剂。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述支原体选自由猪滑液支原体；猪嗜血支原体；猪鼻炎支原体；和猪肺炎支原体(“Mhp”)组成的群组。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述支原体是猪肺炎支原体。7.根据权利要求4所述的方法，其中所述马血清以约2.5％v/v至约10％v/v存在。8.根据权利要求4所述的方法，其中所述马血清以约5％v/v至约10％v/v存在。9.根据权利要求4所述的方法，其中所述马血清以约10％v/v存在。10.根据权利要求4所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：礼蓝美国公司，
类型：发明
国别省市：