一种益生菌组合物及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种益生菌组合物及其制备方法，所述益生菌组合物主要含有益生菌和抗过敏多肽，所述抗过敏多肽是从防己中筛选鉴定获得的。所述多肽通过细胞脱颗粒测定鉴定了其具有抗过敏特性，将所述多肽和益生菌制备成为冻干粉之后，可以有效的在过敏小鼠模型中实现治疗效果，具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种益生菌组合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，更具体的涉及抗过敏领域，主要是涉及一种益生菌组合物及其制备方法。

技术介绍

[0002]过敏性疾病(allergic disease)又称变态反应性疾病，包括过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、支气管哮喘、特应性皮炎、荨麻疹、食物过敏等，在世界各地均很常见，并且发病率逐年增高，已成为一种普遍的公共健康问题，据估计世界上有30％～40％的人口正遭受过敏性疾病的困扰；而且，过敏性疾病的发生率正逐年增加，造成了巨大的医疗负担。过敏性疾病的影响因素包括产前接触微生物、分娩方式、饮食、药物使用以及接触宠物和家畜等，与人类现代生活方式有着直接的关系。采用相关变应原疫苗进行脱敏治疗是治疗过敏性疾病的最佳手段，而对于尚未研制出疫苗的过敏症状，最主要的治疗方式是采用药物治疗来控制(即对症用药)；但是，药物治疗并不能改变过敏性疾病的进程，因而也就不能从根本上达到治愈的效果。随着肠道菌群紊乱与过敏性疾病的关系得到流行病学和实验的证实，以及人们在肠道菌群对黏膜免疫系统发育成熟、对免疫系统调节作用方面的深入研究，临床上应用益生菌药物治疗和预防过敏性疾病受到广泛的重视，这在目前全世界过敏性疾病逐渐增加的情况下，具有非常重要的现实意义，也有非常广阔的前景。
[0003]已有多项研究显示益生菌对过敏性疾病有一定的预防和治疗效果。使用含有保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus，108CFU
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mL
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1)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus，108CFU
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mL
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1)和副干酪乳杆菌亚种CNCMI
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1518的益生菌发酵乳(PFM)喂饲5周龄的BALB/c小鼠，使用OVA对小鼠致敏，发现小鼠抗OVA特异性IgE水平显著降低，而抗OVA特异性IgG和总分泌型IgA(S
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IgA)没有发生变化。PFM能调节Th2反应向Th1反应转变，增加IL
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10和IFN
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γ水平。将含有鼠李糖乳杆菌LOCK0900(L.rhamnosusLOCK0900)、鼠李糖乳杆菌LOCK090833和干酪乳杆菌LOCK0919的混合益生菌(Lmix)定植于近交系BALB/c小鼠(8周龄)，3周之后用重组桦树花粉致敏原蛋白Betv1致敏小鼠，最终结果显示Lmix定植能提高肠道上皮的屏障作用并降低对Betv1的敏感性；血清中抗原特异性IgE、IgG1和IgG2a水平明显降低，同时却提高了血清中总IgA水平和TGF
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β水平。此外，通过OVA敏感小鼠模型研究发现益生菌能够降低血清中OVA
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IgE和OVA
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IgG1水平，降低脾脏Th2细胞因子的释放并改善腹泻症状；而且通过16SrRNA分析发现起主要作用的益生菌是粪球菌属和立克菌属。而且，临床试验显示，益生菌对过敏性鼻炎、AD、哮喘和食物过敏等疾病具有一定的治疗效果；对过敏性疾病有效的益生菌一般为鼠李糖杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等；益生菌单一菌种和混合益生菌都能起到治疗的作用。
[0004]目前的研究可以初步确定，益生菌抑制过敏的主要功能包括：促进抗原的降解，改变其免疫原性，从而减少抗原对机体的刺激。调节促炎和抗炎因子的分泌，调控免疫系统的功能。调节菌群结构，使其恢复正常状态。恢复肠道的通透性，减轻肠道局部黏膜的炎症。通过分泌生物活性物质或抑制其粘附至肠黏膜表面，来降低致病菌对肠道黏膜的侵袭。在调
节免疫功能的角度上分析，益生菌调节机体免疫系统主要基于以下几点：平衡Thl/Th2细胞的数量。促进Thl细胞介导的细胞因子的分泌。降低IgE的分泌量。增强树突状细胞对抗原的耐受性。激活NK细胞。促进Toll样受体的功能。产生足够的分泌型IgA等作用效果。
[0005]但是目前采用益生菌特别是联合用药用于过敏治疗的研究还不够多，可提供的选择还不够丰富，值得进一步的研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供一种治疗过敏的药物组合物，特别是用于治疗过敏性鼻炎。
[0007]防己具有祛风除湿、利水消肿作用和抗过敏的作用。因此，从防己中筛选并获得了具有抗过敏作用的多肽，FJ
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1和FJ
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2，其中FJ
‑
1的序列SEQ ID NO：1所示。
[0008]本专利技术进一步的，提供一种益生菌冻干粉。
[0009]进一步的，所述益生菌冻干粉的制备方法为：
[0010]将
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80℃保藏的鼠李糖乳杆菌GG菌种接种于MRS培养基中，37℃培养18h，传代培养2次得到活化的菌种种子液；
[0011]在发酵罐中装入70％发酵培养基，接种5％(V/V)种子液，拌转速80r/min，37℃，恒pH6.0，无通气自然发酵15h，在发酵过程中，监测pH值，流加12.5％氨水作为中和剂维持pH在6.0；
[0012]发酵培养基组成如下：葡萄糖25.0g，酵母粉20.0g，KH2PO
4 2.5g，MgSO4·
7H2O 2.0g，柠檬酸三铵2.5g，CH3COONa
·
3H2O 6.25g，Tween80 1.0ml，蒸馏水1000ml，pH 6.2；121℃灭菌15min；
[0013]将发酵液于8000rpm高速离心机中离心5min，弃去上清，收集菌泥。在菌泥中，按复合保护剂及菌泥的体积比1:3进行添加，其中复合机保护剂配方及重量份数为脱脂奶粉2份，海藻糖5份，蔗糖1份，葡萄糖5份，明胶3份，甘氨酸0.1份，水20份；混合均匀后得含有保护剂的微生物悬液；
[0014]将含保护剂的微生物悬液于
‑
4℃预冻
‑
12h后置于真空冷冻干燥机中冷冻24h得益生菌冻干粉，真空冷冻的条件为：真空度5Pa、冷肼温度
‑
60℃、时间18h。
[0015]本专利技术另外一方面，提供一种含有益生菌以及抗过敏多肽的冻干粉，所述冻干粉的制备方法为将
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80℃保藏的鼠李糖乳杆菌GG菌种接种于MRS培养基中，37℃培养18h，传代培养2次得到活化的菌种种子液；
[0016]在发酵罐中装入70％发酵培养基，接种5％(V/V)种子液，拌转速80r/min，37℃，恒pH6.0，无通气自然发酵15h，在发酵过程中，监测pH值，流加12.5％氨水作为中和剂维持pH在6.0；
[0017]发酵培养基组成如下：葡萄糖25.0g，酵母粉20.0g，KH2PO4 2.5g，MgSO4
·
7H2O 2.0g，柠檬酸三铵2.5g，CH3COONa
·
3H2O 6.25g，Tween80 1.0ml，蒸馏水1000ml，pH 6.2；121℃灭菌15min；
[0018]将发酵液于80本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.益生菌以及抗过敏多肽的冻干粉在制备治疗过敏性鼻炎的药物组合物中的用途；其中抗过敏多肽为FJ
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1，序列为SEQ ID NO：1所示；所述益生菌为鼠李糖乳杆菌GG；所述冻干粉的制备方法为：将鼠李糖乳杆菌GG发酵液于8000rpm高速离心机中离心5min，弃去上清，收集菌泥；在菌泥中，按复合保护剂、菌泥、FJ
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1多肽的体积比1：3：0.2进行添加混匀，其中复合机保护剂配方及重量份数为脱脂奶粉2份，海藻糖5份，蔗糖1份，葡萄糖5份，甘氨酸0.1份，水20份，混匀；混合均匀后得含有保护剂的微生物悬液；将含保护剂的微生物悬液于
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4℃预冻
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【专利技术属性】
技术研发人员：张克礼，李娜，
申请(专利权)人：北京创世客生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：