一种抗体及其在抗肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗体及其在抗肿瘤中的应用。本发明专利技术提供了一种新型靶向ROR1的单克隆抗体，该抗体能够与目标抗原人ROR1高亲和力结合，特异性强，可有效抑制脱靶效益。该抗体可抑制多种造血系统肿瘤细胞和实体肿瘤细胞生长，在动物模型中也展现了较强的抗肿瘤效果，从而为相关抗肿瘤药物的开发提供了新的研究基础。为相关抗肿瘤药物的开发提供了新的研究基础。为相关抗肿瘤药物的开发提供了新的研究基础。

【技术实现步骤摘要】
一种抗体及其在抗肿瘤中的应用


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫治疗领域和生物
，具体提供了一种抗体及其在抗肿瘤中的应用。

技术介绍

[0002]肿瘤因其具有难治愈性、高死亡率、低愈后临床表现，而成为威胁人类健康的最严重的疾病之一，为此研究人员先后尝试了多种肿瘤治疗手段和技术，包括手术治疗、放射治疗、化学药物治疗、基因治疗等等，但是截至目前仍未找到行之有效的治疗手段。随着生物技术和免疫学研究的深入，肿瘤免疫治疗和抗肿瘤抗体受到业内的重视，自上世纪80年代以来，全球范围内已有上百种抗体被批准用于肿瘤治疗，目前每年提交申请进行临床试验的抗体更是多达数千种。这是由于抗体治疗具有较高的靶向性和选择性，且治疗效果明显，不但可有效抑制肿瘤细胞的生长和繁殖，还能够免于对正常组织或细胞造成不利影响，保证患者的正常生活状态，因而在白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等造血系统肿瘤和胃癌、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等实体肿瘤中都有广泛应用。
[0003]受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase
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like orphan receptor1，ROR1)是受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTKs)家族成员之一，与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性。人ROR1分子由胞外区、跨膜区和胞内区组成，其胞外区包括一个免疫球蛋白样结构域(immunoglobulin
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like domain，Ig/>‑
like)、两个富含半胱氨酸卷曲的结构域(cysteine
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rich domain or frizzled，CRD or FZD)和一个kringle(KNG)结构域；胞内区含有一个酪氨酸激酶结构域(tyrosine kinase domain，TKD)、两个富含丝氨酸/苏氨酸结构域(serine/threonines
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rich domain，Ser/ThrD)和一个富含脯氨酸富集结构域(proline
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rich domain，PRD)。大量研究显示ROR1在促进肿瘤的生长和转移、诱导肿瘤细胞耐药和抑制细胞凋亡等方面起到了关键性的作用，尤其是ROR1正常组织中低水平表达，而高表达于多种恶性肿瘤或组织中，如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌等等。ROR1在肿瘤组织中具有高度识别性，基于这种特性，使得ROR1成为一种新型的肿瘤特异性标志物和抗肿瘤靶点。
[0004]针对ROR1靶点，已经开发出了多种肿瘤免疫疗法，包括：(1)单克隆抗体，是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，该类抗体灵敏度高，特异性强，交叉反应少，制备成本低，是目前应用最为广泛的抗体药物。目前研究人员针对ROR1靶点开发了多种单克隆抗体，如JP2021522162A、WO2021202863A1、EP3842072A1、CN112384533A等公开了相应的抗ROR1单克隆抗体；(2)双特异性抗体，该类抗体含有2种特异性抗原结合位点，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁应，激发具有导向性的免疫反应，进一步增强抗体治疗的靶向性，EP2984107A1公开了针对ROR1和CD3靶点的双特异性抗体，可有效抵抗白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤；(3)嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)T细胞，CAR由两个主要的结构域组成：胞外域
和胞内信号转导区，胞外域位于细胞外部与环境相互作用，胞内信号转导区位于细胞内，将细胞外的信号传递到细胞内部，这种经过基因工程改造的T细胞能够特异性识别肿瘤细胞，而且能够利用激活的T细胞发挥强大的抗肿瘤作用，目前这种疗法在血液肿瘤上取得了较大成功，已有多款商品被批准上市。能够用于构建嵌合抗原受体的抗肿瘤靶点相当广泛，ROR1也已报道被用于构建CAR，如WO2021202863A1、WO2020014366A1等公开了靶向ROR1的CAR结构；(4)抗体偶联药物(antibody
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drug conjugate，ADC)，是通过一个化学链接将具有生物活性的小分子药物连接到单抗上，单抗作为载体将小分子药物靶向运输到目标细胞中，这种组合药物既具有生物分子的靶向性，又具有化学药较强的肿瘤杀伤能力，为了降低毒副作用，往往要求生物分子具有较高的特异性，对于连接生物分子和化学药物的连接子也需要进行精确设计，以便充分发挥协同效应。针对ROR1的ADC药物也已经被报道，如Peyman等(Peyman B，Mozafar M，Ali Hakakian.Anti
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ROR1 scFv
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EndoG as a novel anti
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cancer therapeutic drug，APJCP，2017，19(1)：97
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102)将抗ROR1 ScFv与免疫毒素结合，可快速导致肿瘤细胞凋亡；(5)抗体衍射物，除单克隆抗体、双特性抗体等具有经典结构的抗体之外，研究人员还针对ROR1靶点开发出诸如单链片段可变抗体(scFv)、Fab抗体片段等抗体衍生物，均取得了一定的治疗效果。
[0005]虽然以ROR1为靶点的肿瘤免疫疗法已被广泛报道，但是上述药物或产品仍面临靶向性不强，易形成脱靶效益，排斥反应强烈，肿瘤免疫逃逸现象时有发生，抗肿瘤活性有待强化等技术问题。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术中提供了一种新型的抗ROR1抗体，具体的该抗体包含重链可变区、和轻链可变区；所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0007]进一步的，该抗体所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0008]进一步的，所述抗体为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。
[0009]提供了一种编码上述抗体的核酸，以及包括所述核酸的重组表达载体和重组表达转化体。
[0010]提供了一种上述抗体的制备方法，包括如下步骤：培养如权利要求6所述的重组表达转化体，从培养物中获得所述抗ROR1抗体。
[0011]提供了一种上述抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述肿瘤为ROR1阳性造血系统恶性肿瘤或实体瘤，具体包括肺癌、乳腺癌、卵巢癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性粒细胞白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性粒细胞白血病(CML)、骨髓瘤等等。
[0012]有益效果
[0013]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗ROR1抗体，其特征在于，其包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。3.权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。4.一种编码如权利要求1
‑
3任一项所述的抗体的核酸。5.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：张克礼，雷林均，
申请(专利权)人：北京创世客生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：