CIK免疫细胞在治疗癌症中的用途制造技术

本发明专利技术涉及CIK免疫细胞在治疗癌症中的用途。本发明专利技术通过针对IL

【技术实现步骤摘要】
CIK免疫细胞在治疗癌症中的用途


[0001]本专利技术涉及生物领域，更具体的涉及一种转基因的CIK细胞在治疗癌症中的用途。

技术介绍

[0002]CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN
‑
γ，IL
‑
2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群，其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。
[0003]CIK细胞中的效应细胞CD3+和CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见，仅1％―5％。CIK特点CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见，仅1％～5％，在体外经多因子培养28～30天，CD3+CD56+细胞迅速增多，较培养前升幅可达1000倍以上。实验证明，扩增出的CD3+CD56+细胞来源于CD3+CD56
‑
T细胞，而非CD3
‑
CD56+NK细胞。同时发现在CD3+CD56
‑
的T细胞中，除CD4
‑
CD8
‑
T细胞外，其余三种T细胞亚群(CD4
‑
CD8+、CD4
‑
CD8
‑
、CD4+CD8+)均可通过体外多因子培养而获得CD56分子的表达，而由于CD4+CD8+细胞和CD4
‑
CD8
‑
细胞在正常人外周血中含量极低而间接提示此CD3+CD56+细胞绝大多数来源于外周血中CD4
‑
CD8+T细胞。而由于CD4
‑
CD8
‑
T细胞在培养1个月后有近56％的T细胞同时表达CD56和CD3，表明其也是CIK细胞的重要来源。比较CD3+CD56+CIK细胞中表达CD8+和CD8
‑
,的两群细胞其杀瘤活性没有显着性差异，提示CIK细胞的细胞毒性与CD3CD56表达成相关趋势，而与CD8的表达未表现出相关性。
[0004]CIK细胞能够通过三种途径杀灭肿瘤细胞和病毒感染细胞：CIK细胞对肿瘤细胞和病毒感染细胞的直接杀伤：CIK细胞可以通过不同的机制识别肿瘤细胞，释放颗粒酶/穿孔素等毒性颗粒，导致肿瘤细胞裂解。CIK细胞释放的大量炎性细胞因子具有抑瘤杀瘤活性：体外培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子，如IFN
‑
γ、TNF
‑
α、IL
‑
2等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。CIK细胞能够诱导肿瘤细胞的凋亡：CIK细胞在培养过程中表达FasL(Ⅱ型跨膜糖蛋白)通过与肿瘤细胞膜表达的Fas(I型跨膜糖蛋白)结合，诱导肿瘤细胞凋亡。
[0005]由于外源性IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12可以显着促进淋巴细胞的生长，研究表明IL
‑
7对T细胞生长具有直接的作用。近年来，随着基因技术的发展，多种细胞因子基因的转染由于CIK细胞扩增对外源性细胞因子有依赖，因此通过基因转移方法将相关基因转入CIK细胞，不仅可减少外源性细胞因子的使用量，还可提高CIK细胞自身的抗瘤活性。比如将包含人IL
‑
2基因片段的重组质粒用电穿孔法导入CIK细胞治疗转移性实体瘤，发现转染后细胞可分泌较高水平的IL
‑
2。虽然转染前后CIK细胞表面各种膜蛋白表达并无显着变化，但体外检测转染后CIK细胞在增殖率和细胞杀伤活性上均高于未转染细胞。
[0006]但是目前高活性的外源性细胞因子基因已经是本领域普遍的追求，如陈曦等开发了高效低毒的新型IL
‑
2突变体，但是针对IL
‑
7的研究还不够多。因此，开发IL
‑
7高效突变体是目前重要的研究方向。

技术实现思路

[0007]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供了一种增强的IL
‑
7的突变体以及含有所述突变体的CIK细胞。
[0008]一方面，本专利技术提供一种改进的增强的IL
‑
7突变体，其基因序列如下所示(SEQ ID NO：2)。
[0009]进一步的，本专利技术还提供一种转基因CIK细胞，所述细胞转染了SEQ ID NO：2所示的IL
‑
7突变体基因。
[0010]进一步的，本专利技术提供一种药物组合物，包含本文所述修饰的CIK细胞和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
[0011]本申请还提供了通过给予有此需要的受试者有效抑制癌细胞量的本专利技术修饰的CIK细胞或本专利技术药物组合物来抑制癌细胞的方法。不受任何特定理论的约束，据信修饰的CIK细胞通过一种或多种CIK细胞功能抑制癌细胞：增强细胞毒性，刺激癌特异性T淋巴细胞增殖或IFN
‑
分泌。
[0012]本专利技术药物组合物或修饰的CIK细胞的给药途径包括，但不限于，静脉内，肌内，皮下，口服，局部，皮内，透皮，皮下，胃肠外，直肠，脊柱或表皮给药。在一个实施方案中，修饰的CIK细胞通过静脉注射或输注给药。
[0013]本申请的药物组合物可以制备成注射剂，液体溶液或悬浮液，或适合于在注射前在液体载体中溶解或悬浮液的固体形式。
[0014]将本专利技术的修饰的CIK细胞配制成药物组合物，用于递送至哺乳动物受试者。CIK该药物组合物单独给药，和/或与药学上可接受的载体，赋形剂或载体混合。CIK合适的载体是例如盐水(例如生理盐水)，葡萄糖，甘油，富血小板血浆(PRP)等及其组合。CIK此外，该载体可含有少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂，pH缓冲剂或助剂。CIK药学上可接受的载体可包含生理上可接受的化合物，其起到例如稳定，或增加或减少本申请的药物组合物的吸收或清除速率的作用。CIK生理上可接受的化合物可包括，例如，碳水化合物，如葡萄糖，蔗糖或葡聚糖，抗氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白质，洗涤剂，脂质体载体，或赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲剂。CIK其它生理上可接受的化合物包括润湿剂，乳化剂，分散剂或防腐剂。本申请的药物组合物还可以包括辅助物质，例如药理学试剂，细胞因子或其它生物反应调节剂。
[0015]修饰的CIK细胞或本专利技术的药物组合物可按计划在适合年龄的时间段内以单剂量治疗或以多剂量治疗给予，CIK受试者的体重和状况，CIK所用的特定组合物，CIK以及给药途径，CIK无论修饰的CIK细胞或本专利技术的药物组合物用于预防或治疗目的，CIK例如，CIK在一个实施例中，CIK本申请的修饰的CIK细胞或药物组合物每月给药一次，CIK每月两次，CIK每月三次，CIK每隔一周，CIK每周一次，CIK每周2次，每周3次，每周4次，每周5次，每周6次，每隔一天，每天)，每天2次，每天3次或每天4次。
[0016]所述药物组合物被配制为包含有效量的本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转基因的CIK细胞在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途，其中所述转基因的CIK细胞为在CIK细胞中导入了序列如SEQ ID NO：2所示的IL
‑
7突变体mut1基因序列。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述癌症是肺腺癌。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述药物组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：张克礼，顾超，
申请(专利权)人：北京创世客生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：