一种酪氨酸酚裂解酶突变体、工程菌及在催化合成左旋多巴中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酪氨酸酚裂解酶突变体、工程菌及在催化合成左旋多巴中的应用，所述突变体编码基因核苷酸序列为SEQ ID No.5所示；本发明专利技术所提供的酪氨酸酚裂解酶突变体与野生型相比，具有更优良的催化性能。TPL突变体合成左旋多巴累积浓度高达146g/L以上，与野生型相比提高了25％～45％，光学纯度大于99.5％；底物邻苯二酚的转化率达到99.8％以上，与野生型相比较提高了15％

【技术实现步骤摘要】
一种酪氨酸酚裂解酶突变体、工程菌及在催化合成左旋多巴中的应用
(一)

[0001]本专利技术涉及一种酪氨酸酚裂解酶突变体，工程菌及应用。
(二)
技术介绍

[0002]随着全球老龄化的加剧，老年性疾病日渐增多已是无法回避的现实，帕金森病是近年来逐渐引起公众密切关注的一种老年性疾病，是一种中枢神经系统常见的慢性病。
[0003]多巴胺是治疗帕金森综合症的主要物质，但由于其不能通过血脑屏障到达中枢神经系统发挥作用，而左旋多巴(β
‑
3,4
‑
二羟苯基
‑
α
‑
丙氨酸，3,4
‑
dihydroxyphenyl
‑
L
‑
alanine，L
‑
DOPA)能过通多血脑屏障，达到中枢神经系统，在脱羧酶的作用下，转化为多巴胺，进而发挥治疗帕金森综合症的作用，因此左旋多巴作为治疗帕金森综合症的首选药物。由于帕金森病患者数目日益增加，左旋多巴的需求量也不断增加。
[0004]酪氨酸酚裂解酶(TPL)因其反应条件本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因，其特征在于所述编码基因核苷酸序列为SEQ ID No.5所示。2.一种由权利要求1所述酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因构建的基因工程菌。3.一种权利要求1所述酪氨酸酚裂解酶突变体在合成左旋多巴中的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以邻苯二酚、丙酮酸钠和乙酸铵为底物，以亚硫酸钠和EDTA
·
Na2为助剂，以磷酸吡哆醛为辅酶，以pH 6.0～10.5的缓冲液为反应介质构成转化体系，在温度5～30℃、转速100～200rpm条件下进行转化反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得左旋多巴；所述转化体系中，邻苯二酚加入终浓度5～50g/L，丙酮酸钠加入终浓度5～50g/L，乙酸铵加入终浓度0.1～1.4M，亚硫酸钠加入终浓度0.5～10g/L，EDTA
·
Na2加入终浓度0.5～10g/L，磷酸吡哆醛加入终浓度0.05～5mM，湿菌体用量为2～50g/L。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化反应过程中对邻苯二酚、丙酮酸钠和乙酸铵进行补料，每隔0.5～4h补料一次，其中邻苯二酚每次补料...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑仁朝，王江平，汤晓玲，索慧，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：