一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法技术

本发明专利技术公开了一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，包括步骤S1.构建pBWA(V)HS

【技术实现步骤摘要】
一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法


[0001]本专利技术涉及农作物育种
，具体涉及一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法。

技术介绍

[0002]番茄是茄科番茄属一年生或多年生植物，它是世界上最重要的蔬菜作物之一；γ
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氨基丁酸(Gamma
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aminobutyric,GABA)是一种非蛋白质氨基酸，广泛存在于高等动植物体内；谷氨酸在谷氨酸脱羧酶(GAD)催化下脱羧生成GABA，进入线粒体，在GABA转氨酶(GABA
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T)催化下形成琥珀酰半醛，然后在琥珀酰半醛脱氢酶(SSADH)催化下转化为琥珀酸盐，重新进入三羧酸循环，构成三羧酸循环的GABA循环支路；
[0003]研究表明，胁迫下植物快速积累GABA，可以提高抗逆性；GABA是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传递物质，具有稳定情绪等功效，食用富含GABA的果实可以调节肠道免疫、肠道氨基酸谱、肠道微生物群等；同时GABA还是重要的神经递质，有益于抑郁症、自闭症等的恢复治疗，GABA在预防或治疗氧化损伤相关心血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：包括步骤S1.构建pBWA(V)HS
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GAD2基因过表达载体；S2.在得到pBWA(V)HS
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GAD2基因过表达载体后，利用农杆菌浸染子叶法获得转基因，并对转基因苗进行培养，得到转GAD2基因番茄植株。2.根据权利要求1所述的一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：步骤S1所述的pBWA(V)HS
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GAD2基因过表达载体的构建过程包括：S101.设计引物，扩增番茄已知基因GAD2全长；S102.配制PCR反应体系，对经扩增的GAD2基因进行PCR鉴定和电泳鉴定，鉴定无误后，将回收产物与pMD18
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T载体进行连接；S103.对载体和PCR产物分别进行酶切，并将载体酶切物和回收片段酶切产物合并，用PCR纯化试剂盒纯化；S104.将纯化后的5
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10ul连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，转化涂抗性平皿，37℃培养12小时，进行菌斑PCR鉴定；S105.筛选重组子，对长出的菌落进行首先进行菌落PCR，筛选出能扩增出目的基因的阳性菌落，然后提取质粒DNA，进行BsaI/Eco31I双酶切鉴定，电泳显示有目的条带所对应的菌落，即筛选出pBWA(V)HS
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GAD2基因过表达载体。3.根据权利要求2所述的一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：步骤S01所述的扩增引物为：Gname(+):cagtGGTCTCacaacatggttctgtccaagatagcGname(
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):cagtGGTCTCatacattaacaaactcccatagtct。4.根据权利要求2所述的一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：步骤S102所述的PCR反应体系的容量为50ul，PCR反应过程为：94℃预变性5分钟，然后设置30个循环：94℃变性30秒；50℃复性45秒；72℃延伸91秒；30个循环结束后72℃延伸10min，16℃保温30min。5.根据权利要求2所述的一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：步骤S102所述的电泳鉴定的电泳液为1％琼脂糖电泳液，电泳的具体过程包括：(1)将1512bp的电泳片段切下，放在同一个体系中进行溶胶回收；(2)用总体积30ul的水溶解回收DNA，回收产物标记为：rDNAG1，并在检测无误后与载体进行连接。6.根据权利要求1所述的一种转GAD2基因番茄植株快速获得的方法，其特征在于：步骤S2所述的农杆菌浸染子叶法获得转基因，并对转基因苗进行培养，得到转GAD2基因番茄植株的过程包括：S201.配制重组表达载体的农杆菌菌液；S202.利用配制好的重组表达载体的农杆菌菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李妹芳，郭尚敬，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：