一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列及其应用，属于生物基因技术领域。本发明专利技术通过对SARS

【技术实现步骤摘要】
一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列及其应用


[0001]本专利技术涉及生物基因
，具体涉及一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列及其应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒为RNA病毒，分为α、β、γ和δ四个属，其中，新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS
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2)为β属的一种新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭网形，常为多形性，直径60
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140nm。S蛋白是新型冠状病毒的主要蛋白之一，其编码基因用于病毒分型，通过S
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蛋白与人ACE2互作的分子机制，来感染人的呼吸道上皮细胞，因此新型冠状病毒对人有很强的感染力。这种由新型冠状病毒引起的肺部感染，被称为新型冠状病毒肺炎。N蛋白包裹病毒基因组，可作为诊断抗原。根据对SARS
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2的研究，其对热敏感，56℃30min、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒，氯己定则不能有效灭活病毒。
[0003]新型冠状病毒感染的肺炎患者的临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，会出现缺氧低氧状态。重症病例多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。值得注意的是，重症、危重症患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。部分患者起病症状轻微，可无发热，多在1周后恢复。多数患者预后良好，少数患者病情危重，甚至死亡。目前尚无针对新型冠状病毒肺炎的有效预防和治疗手段，研制有效的预防性和/或治疗性疫苗是除了物理隔离以外预防和/或缓解疫情的有效手段。以SARS
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2病毒表面蛋白Spike(刺突蛋白)即S蛋白为抗原的疫苗，包括核酸疫苗，亚单位疫苗和病毒载体疫苗，其S蛋白的表达水平、蛋白结构决定了疫苗的有效性。
[0004]目前已经有关于新型冠状病毒疫苗的相关研究，如专利CN111218459B公开了一种以人5型复制缺陷腺病毒为载体的新型冠状病毒疫苗，可在短时间内诱导机体产生细胞及体液免疫反应，具有良好的免疫保护效果。该专利中的新冠疫苗为病毒载体疫苗。专利CN111778264A公开了一种基于新型腺病毒载体Sad23L和/或Ad49L的新型冠状病毒肺炎COVID
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19疫苗，能够在动物体内诱导产生高水平的体液和细胞免疫，在动物免疫之后没有发现副作用的出现。
[0005]现有的新型冠状病毒疫苗种类较少，因此亟需一种表达量高，免疫力强的核酸疫苗用于预防和/或治疗新型冠状病毒。

技术实现思路

[0006]针对上述不足，本专利技术提供了一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列。本专利技术通过对SARS
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2冠状病毒的S蛋白基因进行密码子优化，导入分泌型缺陷型腺病毒载体，包装得到相应重组腺病毒。该重组腺病毒能够在体内表达SARS
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2病毒S蛋白，且含有分泌肽，因此该重组腺病毒疫苗在体内表达后，能被分泌至细胞外，更有效地激活体液免疫及
细胞免疫，从而提高对新型冠状病毒SARS
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2的预防和/或治疗效果。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列。
[0009]具体地，所述的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
[0010]具体地，所述的核苷酸序列根据编码SARS
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2病毒S蛋白(SARS
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2病毒表面蛋白Spike)结构域11
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685位氨基酸序列的野生型序列经密码子优化得到，所述的野生型序列为SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0011]另一方面，本专利技术提供了一种载体，所述的载体包含上述核苷酸序列。
[0012]具体地，所述的载体包括但不限于质粒、病毒、噬菌体、RNA。
[0013]进一步具体地，所述的载体为病毒载体，优选为复制缺陷型腺病毒载体。
[0014]进一步具体地，所述的复制缺陷型腺病毒为E1和/或E3区完全缺失和/或部分缺失的C亚类的5型腺病毒。
[0015]进一步具体地，所述的复制缺陷型腺病毒还包含分泌肽的编码序列，所述的分泌肽的编码序列为SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
[0016]进一步具体地，所述的复制缺陷型腺病毒内装CMV启动子和BGH基因polyA序列。
[0017]又一方面，本专利技术提供了上述核苷酸序列或载体在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
[0018]又一方面，本专利技术提供了一种新型冠状病毒疫苗，所述的疫苗包含上述核苷酸序列或载体。
[0019]又一方面，本专利技术提供了上述核苷酸序列、载体或新型冠状病毒疫苗在制备预防和/或治疗SARS
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2病毒相关疾病的药物中的应用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的积极和有益效果在于：
[0021]本专利技术通过对SARS
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2病毒S蛋白的编码核苷酸序列进行优化，并将其制备成腺病毒疫苗，安全性较好，且与野生型序列相比，本专利技术所述的新型冠状病毒疫苗能够极大地提高抗原蛋白的基因转录和表达，且具有更高效的体液及细胞免疫反应。
附图说明
[0022]图1为体外表达检测结果图。
[0023]图2为免疫原性检测结果图。
[0024]图3为针对SARS
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2S1的体液免疫检测结果图。
[0025]图4为针对SARS
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CoV
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2S
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RBD的体液免疫检测结果图。
[0026]图5为针对SARS
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2S蛋白肽池的细胞免疫检测结果图。
[0027]图6为针对SARS
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S1蛋白的细胞免疫检测结果图。
[0028]图7为哺乳动物体内，针对SARS
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CoV
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2S1的体液免疫检测结果图。
[0029]图8为哺乳动物体内，针对SARS
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CoV
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2S
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RBD的体液免疫检测结果图。
具体实施方式
[0030]下面结合具体实施例，对本专利技术作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本专利技术，仅用于说明本专利技术。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建新型冠状病毒疫苗的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列根据编码SARS
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CoV
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2病毒S蛋白结构域11
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685位氨基酸序列的野生型序列经密码子优化得到，所述的野生型序列为SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。3.一种载体，其特征在于：所述的载体包含权利要求1
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2任一项所述的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于：所述的载体为质粒、病毒、噬菌体或RNA。5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于：所述的载体为病毒载体，优选为复制缺陷型腺病毒载体；所述的复制缺陷型腺病毒为E1和/或E3区完全缺失和/或部分缺失的C亚类的5型腺病毒。6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于：所述的复制缺陷型腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：田烁，黄文林，
申请(专利权)人：广州达博生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：