一种用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术属于疫苗技术领域，尤其是涉及一种用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗及其制备方法与应用。本发明专利技术所述编码猫冠状病毒抗原的mRNA，至少含有编码FCoV病毒的S蛋白和E蛋白中的至少一个蛋白，和/或，至少一个蛋白的片段的编码区。该mRNA编码具有较强免疫原性的S蛋白和/或E蛋白，以及这两个蛋白中至少一个蛋白的片段，使mRNA递送至体内后能够在机体内表达S蛋白和/或E蛋白，或作为抗原的S蛋白和E蛋白的至少一个片段，有效触发机体的免疫反应，可用于制备预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗。于制备预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗。于制备预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术属于疫苗
，尤其是涉及一种用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]猫传染性腹膜炎（FIP）是由猫冠状病毒（FCoV）感染引起的一种致死性传染病。猫冠状病毒是一种有囊膜、不分节段的单股正链RNA病毒，FCoV属于尼多病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属。FCoV基因大小约为29kb，由11个开放阅读框（ORFs）组成，其中两个主要的ORFs编码一个复制酶；四个ORFs编码结构蛋白：棘突蛋白S、包膜蛋白E、膜蛋白M和衣壳蛋白N；五个ORFs编码非结构蛋白3a、3b、3c、7a和7b。棘突蛋白S可分为两个部分，其一是介导膜融合亚基S2，可将蛋白固定在包膜上；其二则是受体结合亚基S1，是病毒附着的主要因素，并决定其抗体中和作用。
[0003]mRNA疫苗是通过将编码疾病特异性抗原的mRNA引入体内，利用宿主细胞的蛋白质合成机制产生抗原，从而触发免疫应答的新型疫苗。mRNA疫苗打破了传统灭活、减毒疫苗的免疫激活模式，创新性地利用动物本身细胞产生抗原，以此激活特异免疫。mRNA疫苗具有极高的有效保护率，并且由于其仅在细胞质进行翻译，并不进入细胞核，相较于其他创新型疫苗（如DNA疫苗、病毒载体疫苗）具有更高的安全性。目前，mRNA疫苗的生产采用体外转录的方式，其过程更类似于化学合成，因此不涉及动物源成分可能造成的污染，纯化方式也简单并且具有通用性。
[0004]有鉴于此，研究并开发用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗，对于猫传染性腹膜炎的防控具有积极的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种编码FCoV病毒抗原的mRNA，该mRNA递送至体内可以使机体产生免疫反应。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种用于预防猫传染性腹膜炎的mRNA疫苗，该疫苗包括编码上述FCoV病毒抗原的mRNA，或与其相关的生物材料。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提出了一种编码猫冠状病毒抗原的mRNA，所述mRNA至少含有编码FCoV病毒的S蛋白和E蛋白中的至少一个蛋白，和/或，至少一个蛋白的片段的编码区。具体的，蛋白的片段例如可以为但不限于为蛋白的亚基、功能区域或提供稳定抗原功能的片段。
[0008]猫冠状病毒基因组编码棘突蛋白（spike protein）、包膜蛋白（Envelope protein）、膜蛋白（Membrane protein）和核衣壳蛋白（Nucleocapsid）；其中，棘突蛋白（spike protein，S）被认为是猫冠状病毒血清型II侵入细胞使用的最重要的病毒表面膜蛋白。编码FCoV病毒抗原的mRNA递送至体内能够产生FCoV病毒S蛋白、S蛋白的片段、E蛋白和E蛋白的片段中的至少一种，作为抗原使机体产生免疫反应。
[0009]具体的，所述的编码猫冠状病毒抗原的mRNA，编码区编码的S蛋白和E蛋白中的至少一个蛋白，和/或，至少一个蛋白的片段的氨基酸序列来源于如下毒株中的至少一种：FCoV WSU791146、Feline coronavirus isolate 79
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1146、Feline infectious peritonitis virus strain DF
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2、Feline infectious peritonitis virus isolate HRB/XF17、Feline coronavirus strain WSU 79
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1683、FCoV/China/SMU
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CD59/2018、FCoV/NTU156/P/2007、FCoV/China/SMU
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CD61/2018、FCoV/China/SMU
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CQ18/2018、FCoV/China/SMU
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CQ14/2018或Canine coronavirus strain 171。
[0010]优选的，编码区的核苷酸序列经过优化，所述优化包括提高编码区的GC含量和/或密码子优化。在一些优选的实施方式中，编码区的核苷酸序列经过优化，包括：针对在猫内表达时的密码子偏好性进行调整、常用密码子的使用频率进行调整、提高序列的GC含量等，以使mRNA结构更稳定，目标蛋白翻译效率更高。
[0011]具体的，在一些优选的实施方式中，S蛋白含有两个亚基（subunit），S1和S2。其中S1主要包含有受体结合区（receptor binding domain，RBD），负责识别细胞的受体。S2含有膜融合过程所需的基本元件。在一些优选的实施方式中，编码区编码S蛋白全长或S1亚基中受体结合区（receptor binding domain，RBD）。
[0012]具体的，所述mRNA的编码区编码S蛋白的全长序列，其编码区序列如SEQID NO.1、SEQID NO.2或SEQID NO.3所示；其中，如SEQID NO.3所示序列的编码区效果更佳；具体的，所述mRNA编码S蛋白全长，其序列如SEQID NO.12所示。
[0013]具体的，所述mRNA的编码区编码S蛋白的受体结合区，其编码区序列如SEQID NO.4、SEQID NO.5或SEQID NO.6所示；其中，如SEQID N0.6所示序列的编码区效果更佳；具体的，所述mRNA编码S蛋白的受体结合区，序列如SEQID NO.13所示。
[0014]具体的，所述mRNA编码E蛋白的编码区的序列如SEQID NO.7、SEQID NO.8或SEQID NO.9所示；其中，如SEQID NO.9所示序列的编码区效果更佳；具体的，所述mRNA编码E蛋白全长，其序列如SEQID NO.14所示。
[0015]具体的，所述编码FCoV病毒抗原的mRNA除去编码区外还包括5'
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帽结构、3'
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端聚腺苷酸序列、5'
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UTR和3'
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UTR中的至少一种，优选同时含有5'
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帽结构、3'
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聚腺苷酸序列、5'UTR和3'UTR。
[0016]优选的，所述5'
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帽结构可以增加mRNA的稳定性，避免mRNA被核酸外切酶降解；所述5'
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帽结构优选包括ARCA、m7G(5)ppp(5)(2'OMeA)pG、m7G(5)ppp(5)(2'OMeG)pG、m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG)pG、m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pG、mCAP、dmCAP、tmCAP或dmCAP中的一种。
[0017]优选的，3'端聚腺苷酸序列能够避免mRNA被核酸外切酶降解，同时终结转录，所述3'
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端聚腺苷酸序列的长度为50
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250个A，例如包括但不限于为50、80、100、120本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码猫冠状病毒抗原的mRNA，其特征在于，所述mRNA至少含有编码FCoV病毒的S蛋白和E蛋白中的至少一个蛋白，和/或，至少一个蛋白的片段的编码区。2.根据权利要求1所述的编码猫冠状病毒抗原的mRNA，其特征在于，编码区编码的S蛋白和E蛋白中的至少一个蛋白，和/或，至少一个蛋白的片段的氨基酸序列来源于如下毒株中的至少一种：FCoV WSU791146、Feline coronavirus isolate 79
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1146、Feline infectious peritonitis virus strain DF
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2、Feline infectious peritonitis virus isolate HRB/XF17、Feline coronavirus strain WSU 79
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1683、FCoV/China/SMU
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CD59/2018、FCoV/NTU156/P/2007、FCoV/China/SMU
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CD61/2018、FCoV/China/SMU
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CQ18/2018、FCoV/China/SMU
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CQ14/2018或Canine coronavirus strain 171。3.根据权利要求1或2所述的编码猫冠状病毒抗原的mRNA，其特征在于：所述mRNA的编码区编码S蛋白的全长序列，其编码区序列如SEQID NO.1、SEQID NO.2或SEQID NO.3所示；所述mRNA编码S蛋白全长，其序列如SEQID NO.12...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘昊，张静，王海燕，汤波，聂思静，
申请(专利权)人：兆丰华生物科技南京有限公司北京生物医药科技中心兆丰华生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：