一种细胞传代方法技术

本发明专利技术公开一种细胞传代方法，所方法包括以下步骤：1.细胞传代前准备；2.细胞清洗；3.细胞消化；4.终止消化。本发明专利技术通过电机转动的方式来转动细胞瓶，通过转速控制器来控制消化的强度，通过电子定时器设定时间，能更精确控制消化程度。并且通过串联的方式能同时实现多瓶细胞同时甩瓶的技术，有效提高了效率。有效提高了效率。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞传代方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养领域，具体涉及一种细胞传代方法。

技术介绍

[0002]现有技术中，在细胞培养过程中大多数采用转瓶生产工艺进行生产，基本都是采用通过用力甩动细胞瓶使细胞能从细胞瓶上分散开或脱落。如果传代或收获的瓶数较多，或使用较大规格的细胞瓶如10L、15L得瓶子，瓶子较重，则需要用较多的力气来甩瓶，同时有一些细胞其细胞间的连接比较紧密或者细胞贴壁较牢固的，通过轻轻的甩动细胞瓶很难让细胞均匀的分散开或从细胞瓶上脱离下来，通常是采用更多人力去用力的去甩瓶来完成，这样的结果是耗费人力，并且消化程度不够均匀。

技术实现思路

[0003]为克服现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供一种高效率的细胞代方法。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0005]一种细胞传代方法，所述方法包括以下步骤：
[0006]1.细胞传代前准备：
[0007]1.1)将待传代的若干瓶细胞瓶口连接上带有进液口快接头和出液口快接头的塞子，准备好所需要的液体，将可加热的保温缓冲垫包覆到细胞瓶上，将包覆好保温缓冲垫的细胞瓶固定到旋转装置上；
[0008]1.2)细胞传代时，打开温度控制器，设置预定温度，使细胞传代过程当中细胞所处的环境温度稳定；
[0009]2.细胞清洗：
[0010]2.1)首先将细胞瓶的进液口与PBS瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的PBS溶液；
[0011]2.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，设定时间到了，电机停止转动，清洗结束；
[0012]3.细胞消化：
[0013]将细胞瓶的进液口与分散液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的分散液，开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间；结束后将细胞瓶的出液口与废液收集瓶通过快接头连接并开启蠕动泵将废液抽出；
[0014]4.终止消化：
[0015]4.1)细胞消化完成后，将细胞瓶的进液口与营养液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入适量营养液；
[0016]4.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶使营养液混合均匀，根据不同细胞设定对应的转速和时间；
[0017]4.3)补液分装：将细胞瓶出液口快接头与细胞分装瓶连接，将细胞分装至各个细胞瓶中。
[0018]进一步的，步骤1.2)中，ST细胞传代设定温度38℃；Marc
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145细胞传代时设定温度37℃；Vero细胞传代时设定温度36℃。
[0019]进一步的，步骤2.2)中，ST细胞和Marc
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145细胞传代时设定转速60r/min，时间为20s；Vero细胞传代时设定转速60r/min，时间为10s；清洗结束后将出液口快接头与废液收集装置连接并开启蠕动泵将废液抽出；其中ST细胞、 Marc
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145细胞传代重复步骤2.1)和2.2)清洗2次，而Vero细胞清洗一次。
[0020]进一步的，步骤3中，ST细胞传代时设定转速为60r/min，时间为60s； Marc
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145细胞传代时设定转速为60r/min，时间为40s；Vero细胞传代时设定转速为60r/min，时间为20s。
[0021]进一步的，步骤4.2)中，ST细胞传代时设定转速为200r/min，时间为60s； Marc
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145细胞传代时设定转速为180r/min，时间为40s；Vero细胞传代时设定转速为150r/min，时间为30s。
[0022]进一步的，所述保温垫含有5mm厚的保温层。
[0023]进一步的，所述旋转装置包括由电机驱动旋转的底座，底座上设有带有可调节卡扣的细胞瓶固定支架。
[0024]本专利技术采用以上技术方案，细胞传代的时候不再需要一瓶一瓶传代，同时需要传代几瓶细胞可以同时进行，节约时间，提高了效率。
具体实施方式
[0025]本专利技术一种细胞传代方法，方法包括以下步骤：
[0026]1.细胞传代前准备：
[0027]1.1)将待传代的若干瓶细胞瓶口连接上带有进液口快接头和出液口快接头的塞子，准备好所需要的液体(PBS、分散液、营养液等)，将可加热的保温缓冲垫包覆到细胞瓶上，将包覆好保温缓冲垫的细胞瓶固定到旋转装置上；
[0028]1.2)细胞传代时，打开温度控制器，设置预定温度(ST细胞传代设定温度 38℃，Marc
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145细胞传代时设定温度37℃，Vero细胞传代时设定温度36℃)，使细胞传代过程当中细胞所处的环境温度稳定；
[0029]2.细胞清洗：
[0030]2.1)首先将细胞瓶的进液口与PBS瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的PBS溶液，通过蠕动泵的加量，PBS溶液的量是可以固定的，相比人工倒入PBS溶液更加的精确；
[0031]2.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中ST细胞和Marc
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145细胞传代时设定转速 60r/min，时间为20s；Vero细胞传代时设定转速60r/min，时间为10s；清洗结束后将出液口快接头与废液收集装置连接并开启蠕动泵将废液抽出；其中ST 细胞、Marc
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145细胞传代重复步骤2.1)和2.2)清洗2次，而Vero细胞清洗一次。
[0032]设定时间到了，电机停止转动，清洗结束；
[0033]3.细胞消化：
[0034]将细胞瓶的进液口与分散液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的分散液，通过蠕动泵的加量，分散液的量是可以固定的，相比人工倒入分散液更加的精确，开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中，ST细胞传代时设定转速为60r/min，时间为60s；Marc
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145细胞传代时设定转速为60r/min，时间为40s；Vero细胞传代时设定转速为60r/min，时间为20s；结束后将细胞瓶的出液口与废液收集瓶通过快接头连接并开启蠕动泵将废液抽出；
[0035]4.终止消化：
[0036]4.1)细胞消化完成后，将细胞瓶的进液口与营养液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入适量营养液，通过蠕动泵的加量，营养液的量是可以固定的，相比人工倒入营养液更加的精确；
[0037]4.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶使营养液混合均匀，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中，ST细胞传代时设定转速为200r/min，时间为60s；Marc
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞传代方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1.细胞传代前准备：1.1）将待传代的若干瓶细胞瓶口连接上带有进液口快接头和出液口快接头的塞子，准备好所需要的液体，将可加热的保温缓冲垫包覆到细胞瓶上，将包覆好保温缓冲垫的细胞瓶固定到旋转装置上；1.2）细胞传代时，打开温度控制器，设置预定温度，使细胞传代过程当中细胞所处的环境温度稳定；2.细胞清洗：2.1）首先将细胞瓶的进液口与PBS瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的PBS溶液；2.2）开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，设定时间到了，电机停止转动，清洗结束； 3.细胞消化：将细胞瓶的进液口与分散液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的分散液，开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间；结束后将细胞瓶的出液口与废液收集瓶通过快接头连接并开启蠕动泵将废液抽出；4.终止消化：4.1）细胞消化完成后，将细胞瓶的进液口与营养液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入适量营养液；4.2）开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶使营养液混合均匀，根据不同细胞设定对应的转速和时间；4.3）补液分装：将细胞瓶出液口快接头与细胞分装瓶连接，将细胞分装至各个细胞瓶中。2.根据权利要求1所述的一种细胞传代方法，其特征在于：步骤1.2）中，ST细胞传代设定温度38℃；Marc
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈静怡，李红平，范珞菲，郭玉兰，赖婷婷，叶晓慧，
申请(专利权)人：兆丰华生物科技南京有限公司北京科牧丰生物制药有限公司兆丰华生物科技南京有限公司北京生物医药科技中心，
类型：发明
国别省市：