提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法技术

本发明专利技术公开了提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，该方法步骤包括：1）将猪瘟病毒生产种毒研磨稀释过滤后备用；2）将滤液（即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液）接种兔体，采用至少两种接种方式；3）接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；4）收集24～48小时呈定型热兔体脾淋组织；5）对剩余的48小时内未呈定型热的兔体再次免疫滤液（即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液），接种方式同步骤2）；6）第二次接种后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；7）收集第二次接种后24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织，即收获猪瘟病毒抗原。本发明专利技术采用大于>1次免疫、大于1种免疫途径的方法，扩繁病毒，收集含毒组织，动物体利用率提升至95%以上，病毒含量比现有技术增加1.5倍～6倍以上。

【技术实现步骤摘要】
提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法。
技术介绍
猪瘟活疫苗(兔源)生产工艺采用猪瘟兔化弱毒株病毒耳静脉接种健康家兔，收获感染家兔的脾脏及肠系膜淋巴结，然后加入适宜的稳定剂，经冷冻真空干燥制成。家兔免疫途径为单次耳静脉接种，其兔体反应率在45％～85％之间，组织含毒量约为20000RID/g～80000RID/g。上述方法存在以下不足：1、兔体反应率参差不齐，反应率高的能达到85％左右，反应率最差时只在45％以下；2、组织含毒量还有较大提升空间；3、动物利用率较低；4、对动物要求严格，对动物日龄、体重、抗体水平等有严格要求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，包括以下步骤：1)取猪瘟病毒生产种毒，加入适量生理盐水，用研钵磨碎至细小颗粒状悬液后再用生理盐水稀释成5～50倍悬液，过滤，收集过滤液备用；2)将滤液即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液接种兔体，接种方式采用静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、皮内注射、肺内注射、点眼、口服、滴鼻、喷雾方式中的至少两种接种方式；3)接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；4)根据测温结果，收集24～48小时呈定型热兔体(定型热判定标准见附1)脾淋组织，即收获猪瘟病毒抗原；5)对剩余的48小时内未呈定型热的兔体再次免疫按照步骤1)方法制备的过滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)接种兔体，接种方式同步骤2)；6)第二次接种后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；7)根据测温结果收集第二次接种后24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织，收获猪瘟病毒抗原；8)测定收集的兔体脾淋组织的抗原含毒量，效价可达120000RID/g以上。进一步的，步骤1)中，所述过滤采用80～90目滤网过滤。进一步的，步骤2)中，用于接种的兔体应满足以下条件：兔体在接种前2～3天，每天上午、下午各测体温一次，体温均在38.0℃～40.0℃，上午、下午的体温波动＜1.0℃。进一步的，步骤2)中，用于接种的兔体在接种前20天，饲喂兔体的饲料中不加入抗病毒药物以及抗球虫药物，兔瘟疫苗免疫注射应在出生30日龄之前完成。进一步的，步骤2)中，各接种方式的接种剂量如下：静脉注射：1～2ml/只；肌肉注射：1～2ml/只；皮下注射：1～2ml/只；腹腔注射：1～2ml/只；皮内注射：0.5～1ml/只；肺内注射：1～2ml/只；点眼：1～2ml/只；口服：1～2ml/只；滴鼻：1～2ml/只；喷雾：2～10ml/只。本专利技术采用以上技术方案，即采用>1次免疫、>1种免疫途径的方法，扩繁病毒，收集含毒组织，动物体利用率提升至95％以上，病毒含量增加1.5倍～6倍以上。本专利技术具有以下有益效果：1、提高兔体反应率，减少在制备过程中动物的浪费。接种途径改进后，第一次接种可提高兔体定型热反应率10％～30％，2种以上途径2次接种后兔体定型热反应率可达95％以上。2、提高动物体内病毒含量，即提高产品效价，同时减少组织使用量，降低产品副反应。3、相同产量可减少动物体使用数量。4、对动物体要求放宽：由无本病毒抗体降至不含本病毒高抗体即可，对动物体日龄不做具体要求。具体实施方式一种提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，包括以下步骤：1)取猪瘟病毒(兔化弱毒株)生产种毒40g，先加入40ml生理盐水，用研钵磨碎至细小颗粒状悬液后再用生理盐水稀释成5～50倍悬液，80～90目滤网过滤，收集过滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)，备用；2)将滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)接种兔体，接种方式采用静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、皮内注射、肺内注射、点眼、口服、滴鼻、喷雾方式中的至少两种接种方式；兔体在接种前2～3天，每天上午、下午各测体温一次，体温均在38.0℃～40.0℃，上午、下午的体温波动＜1.0℃；3)接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；4)根据测温结果，收集24～48小时呈定型热兔体脾淋组织，即收获猪瘟病毒抗原。接种途径改进后可提高反应率10％～30％；5)对剩余的48小时内未呈定型热的兔体再次免疫按照步骤1)方法制备的过滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)，接种方式同步骤2)；6)第二次接种后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；7)根据测温结果收集第二次接种后24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织，即收获猪瘟病毒抗原，2种以上途径2次接种后兔体定型热反应率可达95％以上；8)测定收集的兔体脾淋组织的抗原含毒量，效价可达120000RID/g以上。采用>1次免疫、>1种免疫途径的方法，扩繁病毒，收集含毒组织，动物体利用率提升至95％以上，病毒含量增加1.5倍～6倍以上。表1免疫途径组合方式免疫剂量：根据不同接种途径选择不同剂量，范围在0.5ml～10ml免疫次数：≥1次，根据病毒繁殖情况，选择免疫次数。对于第一次免疫无反应的动物，可继续增加免疫次数与剂量，使病毒得以在动物体内大量繁殖，提高动物利用率。定型热判定标准：定型热反应(++)潜伏期24～48小时，体温上升呈明显曲线，超过常温1℃以上，至少有3个温次，并稽留18～36小时。表2：大兔质量标准要求对比表3本专利技术的有益效果实施例1猪瘟兔化弱毒株病毒抗原的制备方法1)取猪瘟病毒(兔化弱毒株)生产种毒40g，先加入40ml生理盐水，用研钵磨碎至细小颗粒状悬液后再用生理盐水稀释成10倍悬液，80目滤网过滤，收集滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)，备用；2)将滤液(即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液)耳静脉接种兔体1ml/只，皮下注射兔体1ml/只，肌肉注射1ml/只。兔体在接种前3天，每天上午、下午各测体温一次，体温均在38.0℃～40.0℃，上午、下午的体温波动＜1.0℃。大兔要求见表2。3)接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度。4)收集24～48小时呈定型热兔，接种途径改进后可提高反应率10％～50％。5)接种后兔体定型热反应达95％，收集24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织。6)测定收集的兔体抗原含毒量，效价为120000RID/g。采用>1种免疫途径的方法，扩繁病毒，收集含毒组织，动物体利用率提升至95％以上，病毒含量比现有技术最高病毒含量增加1.5倍以上。实施例2...

【技术保护点】
1.提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：/n1）取猪瘟病毒生产种毒，加入生理盐水，用研钵磨碎至细小颗粒状悬液后再用生理盐水稀释成5～50倍悬液，过滤，收集过滤液备用；/n2）将过滤液接种兔体，接种方式采用静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、皮内注射、肺内注射、点眼、口服、滴鼻、喷雾方式中的至少两种接种方式；/n3）接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；/n4）根据测温结果，收集24～48小时呈定型热兔体脾淋组织，收获兔体脾脏即猪瘟病毒抗原；/n5）对剩余的48小时内未呈定型热的兔体再次免疫按照步骤1）方法制备的滤液即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液接种兔体，接种方式同步骤2）；/n6）第二次接种后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；/n7）根据测温结果收集第二次接种后24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织，收获兔体脾淋组织即猪瘟病毒抗原。/n

【技术特征摘要】
1.提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：
1）取猪瘟病毒生产种毒，加入生理盐水，用研钵磨碎至细小颗粒状悬液后再用生理盐水稀释成5～50倍悬液，过滤，收集过滤液备用；
2）将过滤液接种兔体，接种方式采用静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、皮内注射、肺内注射、点眼、口服、滴鼻、喷雾方式中的至少两种接种方式；
3）接种24小时后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；
4）根据测温结果，收集24～48小时呈定型热兔体脾淋组织，收获兔体脾脏即猪瘟病毒抗原；
5）对剩余的48小时内未呈定型热的兔体再次免疫按照步骤1）方法制备的滤液即猪瘟兔化弱毒株病毒悬液接种兔体，接种方式同步骤2）；
6）第二次接种后每6小时测温一次并记录每只兔体温度；
7）根据测温结果收集第二次接种后24～48小时呈定型热的兔体脾淋组织，收获兔体脾淋组织即猪瘟病毒抗原。


2.根据权利要求1所述的提高动物体病毒含量或反应率的猪瘟病毒抗原制备方法，其特征在于：步骤1）中，所述过滤采用80～90目滤网过滤。

【专利技术属性】
技术研发人员：赵华娥，林晓荣，
申请(专利权)人：兆丰华生物科技南京有限公司，兆丰华生物科技福州有限公司，北京科牧丰生物制药有限公司，兆丰华生物科技南京有限公司北京生物医药科技中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32