PDCoV全长基因的构建方法及引物技术

本发明专利技术公开了一种用于构建PDCoV全长基因的引物，其包括15组引物对，其序列如SEQ ID No.1～30所示。本发明专利技术还公开了PDCoV全长基因的构建方法、用于检测PDCoV的试剂盒。本发明专利技术中的引物具有良好的特异性，可高效地构建PDCoV全长基因，为PDCoV的全基因组测序、致病机理研究、抗PDCoV的疫苗/药物的研制提供良好的基础。础。础。

【技术实现步骤摘要】
H2O 16～20μL；
[0015]PCR反应条件为：
[0016]50～55℃预变性25～35min；
[0017]90～95℃变性15～40s，50～55℃退火20～35s，70～75℃延伸2～3min，重复30～40 个循环；
[0018]70～75℃延伸10～15min。
[0019]作为上述技术方案的改进，PCR反应体系为：PrimeScript 1Step Enzyme Mix 1μL，2
×
1Step Buffer 25μL，上下游引物各2μL，模板3μL，RNase
‑
free H2O 17μL；
[0020]PCR反应条件为：
[0021]50℃预变性30min；
[0022]94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸2.5min，重复35个循环；
[0023]72℃延伸10min。
[0024]相应的，本专利技术还公开了一种用于检测PDCoV的试剂盒，其包括上述的引物。
[0025]作为上述技术方案的改进，还包括上述的PCR反应体系。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于构建PDCoV全长基因的引物，其特征在于，包括15组引物对，其序列如SEQ ID No.1～30所示。2.一种PDCoV全长基因的构建方法，其特征在于，包括将如权利要求1所述的引物进行扩增的步骤。3.如权利要求2所述的PDCoV全长基因的构建方法，其特征在于，包括：提取PDCoV病毒RNA；以提取得到的PDCoV病毒RNA为模板，利用如权利要求1所述的引物进行PCR扩增，PCR扩增产物经测序后拼接即得PDCoV全长基因。4.如权利要求2所述的PDCoV全长基因的构建方法，其特征在于，PCR反应体系为：PrimeScript 1Step Enzyme Mix 0.5～1.5μL，2
×
1Step Buffer 20～28μL，上下游引物各1～3μL，模板2～4μL，RNase
‑
free H2O 16～20μL；PCR反应条件为：50～55℃预变性25～35min；90～95℃变性15～40s，50～55℃退火20～35s，70～75℃延伸2～3min，重复30～40个循环；70～7...

【专利技术属性】
技术研发人员：易宏波，谢永生，王丽，蒋宗勇，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：