mRNA及包含其的新冠病毒mRNA疫苗制造技术

本发明专利技术提供了mRNA，其包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白中的一种、两种、三种或四种蛋白或其片段的mRNA，编码S蛋白的mRNA的序列如SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19或SEQ ID NO.20所示；编码E蛋白的mRNA的序列如SEQ ID NO.21所示；编码M蛋白的mRNA的序列如SEQ ID NO.22所示；编码N蛋白的mRNA的序列如SEQ ID NO.23所示。还提供了一种包含所述mRNA的脂质体纳米颗粒、一种针对新冠病毒的mRNA疫苗等。本发明专利技术的mRNA在细胞水平高效产生病毒蛋白，或由产生的蛋白自组装成病毒样颗粒。将包含本发明专利技术的mRNA制备成疫苗时，安全性高、有效性好、不会产生非中和抗体而不会产生抗体依赖增强感染效应。会产生抗体依赖增强感染效应。

【技术实现步骤摘要】
mRNA及包含其的新冠病毒mRNA疫苗


[0001]本专利技术涉及一种mRNA及包含其的新冠病毒mRNA疫苗，本专利技术还涉及所述mRNA 及包含其的新冠病毒mRNA疫苗、脂质体纳米颗粒、药物组合物和试剂盒等。

技术介绍

[0002]近年来，基于体外转录(IVT)的信使RNA(mRNA)的治疗正显示出巨大的潜力。 它的原理是将体外制备的mRNA包裹成药物递送到体内组织被细胞内吞，外源mRNA到 达细胞后被核糖体识别并根据其编码信息合成相应的蛋白质。早在1990年Wolff等证明 注射到小鼠体内的mRNA能被翻译蛋白质[7]。1992年Jirikowski等显示注射到下丘脑部 位的vasopressin mRNA缓解了老鼠的尿崩症状[8]。mRNA药物在理论上有诸多优势：与 DNA疗法相比，mRNA不需要入核，无基因组整合的插入突变风险；相对于蛋白质药物， mRNA利用细胞自身的翻译系统，可实现高效和剂量依赖性的活性蛋白表达，解决了一 些蛋白的不可成药性问题。然而mRNA一直受到体外制备、稳定性和递送问题的困扰。 直到近几年IVT(in vitr本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO.40或SEQ ID NO.41所示，所述连接后的mRNA的序列优选如SEQ ID NO.35或36所示，其DNA序列优选如SEQ ID NO.28或29所示；或者，所述mRNA包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的S蛋白的mRNA；或者，所述mRNA包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的S蛋白的RBD结构域的mRNA；或者，所述mRNA包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的M蛋白、E蛋白和S蛋白的mRNA，所述M蛋白和E蛋白的mRNA连接后进行表达，所述连接优选通过编码2A肽段的mRNA的序列进行连接，所述2A肽段的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.42或SEQ ID NO.43所示，编码所述2A肽段的DNA序列优选如SEQ ID NO.38或SEQ ID NO.39所示，编码所述2A肽段的mRNA序列优选如SEQ ID NO.40或SEQ ID NO.41所示，所述连接后的mRNA的序列优选如SEQ ID NO.35或36所示，其DNA序列优选如SEQ ID NO.28或29所示，连接后的mRNA与所述S蛋白的mRNA的摩尔比优选为1.5:1～3:1，例如为2:1。5.如权利要求1～4任一项所述的mRNA，其特征在于，当所述的mRNA包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白中的两种、三种或四种蛋白或其片段的mRNA时，所述mRNA编码的蛋白自组装成病毒样颗粒。6.一种DNA，其包含编码来源于SARS-CoV-2病毒的S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白中的至少一种蛋白或其片段的DNA，其中，编码所述S蛋白的DNA的序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示；编码所述E蛋白的DNA的序列如SEQ ID NO.8所示；编码所述M蛋白的DNA的序列如SEQ ID NO.11所示；编码所述N蛋白的DNA的序列如SEQ ID NO.13所示；较佳地，所述片段为所述S蛋白的RBD结构域的片段，其DNA序列优选如SEQ ID NO.30所示。7.组合物，其包含多个或多于一个如权利要求1～5任一项所述的mRNA和/或如权利要求6所述的DNA。8.一种脂质体纳米颗粒，其包含如权利要求1～5任一项所述的mRNA、如权利要求6所述的DNA和/或如权利要求7所述的组合物；较佳地：所脂质体纳米颗粒还包括阳离子脂质和辅助脂质，所述阳离子脂质优选为DLin-MC3-DMA或DOTMA，所述辅助脂质优选为DSPC和/或胆固醇；和/或，所脂质体纳米颗粒为长循环阳离子脂质体纳米颗粒，优选为经PEG或其衍生物修饰的长循环阳离子脂质体纳米颗粒；所述PEG的相对分子质量优选为2000～5000，例如为2000、3000、4000或5000；更优选为包括DMPE-PEG2000的长循环阳离子脂质体纳米颗粒。9.一种病毒样颗粒，其由包含如权利要求1～5任一项所述的mRNA、如权利要求6所述的DNA和/或如权利要求7所述的组合物所表达的蛋白自组装而成，优选在细胞中表达所述蛋白，所述细胞优选为293T和/或293A；较佳地：所述的病毒样颗粒由编码SARS-CoV-2病毒的S蛋白、E蛋白、M蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冰，俞航，
申请(专利权)人：上海蓝鹊生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：