丙肝病毒检测相关肽及其可视时间分辨荧光微球试纸条制造技术

本发明专利技术提供了用于HCV检测的质控肽、HCV半抗原和抗原、以及基于它们的试纸条，可用于同时荧光或肉眼检测HCV核心抗原和HCV抗体。时荧光或肉眼检测HCV核心抗原和HCV抗体。

【技术实现步骤摘要】
丙肝病毒检测相关肽及其可视时间分辨荧光微球试纸条


[0001]本专利技术属于免疫学领域，具体涉及一种基于可视时间分辨荧光微球快速检测丙型肝炎病毒抗原抗体免疫层析试纸条及其中的相关肽。

技术介绍

[0002]丙型肝炎(丙肝，HCV)是世界性传染病之一，据世界卫生组织统计，全球HCV感染率已达3％，而高度慢性化是该病的最大特征，所产生的抗
‑
HCV可存在于患者体内长达数年至十几年，甚至是终身存在，与乙肝相比，其危害性明显大于乙肝，丙肝80％患者会发展成慢性肝炎，且有相当的比例发展成肝硬化、肝癌，给患者及其家庭、社会带来长期痛苦和巨大的经济负担。
[0003]目前免疫检测HCV的方法主要是HCV抗体检测，检测HCV
‑
Ab。然而，本专利技术人长期研究发现，该检测方法对灰区结果判读的可靠性较差，且抗体窗口期较长，一般情况下感染 HCV后需70天甚至数月才产生HCV抗体，故不能作为早期诊断丙肝的感染。另外，HCV
‑
Ab 也无法区别患者为现症感染或者既往感染，而且长期使用免疫抑制制剂及血液透析患者可出现HCV
‑
Ab持续阴性。
[0004]HCV核心抗原是HCV颗粒的结构蛋白，在各亚型HCV中高度保守，尤其是本专利技术人认识到，HCV核心抗原几乎与HCV
‑
RNA同时出现，二者检测窗口期仅差1～2天，极大的缩短了检测的窗口期，能检测早期急性感染，弥补了HCV抗体检测的不足。因而，在现有技术没有启示的情况下，本专利技术人试图开发能同时检测HCV抗体和HCV核心抗原的简便易用的检测产品(如，免疫层析试纸条产品)。
[0005]在开发中，以及以前大量免疫层析试纸条产品的开发中，本专利技术人注意到了为人忽视的关键中间产物，即质控肽，及其由其产生的抗体不能干扰检测反应的进行，然而，HCV的C、 E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B等蛋白产生的抗体以及人体由于感染其他病原体产生的抗体十分复杂，很容易造成干扰，导致需要重新测量。为此，本专利技术人在没有启示的情况下，精心研制了质控肽，至今在实际样品的检测中没有发现由于质控肽引起的错误。
[0006]另外，本专利技术人还优化了HCV半抗原和抗原，使之适合准确、灵敏、方便、快捷地同时检测HCV抗体和HCV核心抗原。并结合时间分辨荧光分析法(时间分辨荧光免疫分析， time
‑
resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)，选用合适的可视化时间分辨荧光微球，使得本专利技术的免疫层析试纸条产品既有时间分辨技术的灵敏度高、背景低的特点，又有胶体金技术特有的可肉眼观察结果，方便、快捷，同时适合装备荧光检测设备的实验室，也适合急诊检验、小型化验室或家中自测，具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题在于提供新的检测HCV的快速、可靠、便捷、同时适用范围广的免疫层析试纸条等检测产品及其中所用的相关肽。
[0008]具体而言，在第一方面，本专利技术提供了用于HCV检测的质控肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。质控肽的研究通常为人所忽视，然而，本专利技术人长期实践发现由于质控肽的设计不合理导致了实际60％的重测率，因此本专利技术人自主设计了本专利技术的质控肽，能够有效避开HCV和其他病原体所产生的天然抗体，大幅降低了重测率。在另一方面，本专利技术提供了质控肽
‑
BSA，其为本专利技术第一方面的质控肽与牛血清白蛋白的偶联物。偶联可以按照常规的半抗原与蛋白载体化学偶联的方法进行。在又一方面，本专利技术提供了靶向质控肽的抗体，其靶向本专利技术第一方面的质控肽。抗体优选是单克隆抗体(单抗)。抗体的制备可以通过常规的免疫动物的方法来制备，其中免疫原可以是以上质控肽
‑
BSA。还在一个方面，本专利技术提供了可视时间分辨荧光微球标记的质控肽
‑
BSA，其为本专利技术的质控肽
‑
BSA与可视时间分辨荧光微球的偶联物。偶联可以按照可视时间分辨荧光微球厂商提供的化学偶联的方法进行。
[0009]在第二方面，本专利技术提供了HCV半抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本专利技术第二方面的半抗原及靶向它的抗体不但能用于有效检测HCV核心抗原，而且与靶向本专利技术第三方面的半抗原的抗体之间没有可检测的交叉反应性，且不影响靶向本专利技术第三方面的半抗原的抗体对HCV核心抗原的结合。在另一方面，本专利技术提供了半抗原
‑
BSA，其为本专利技术第二方面的半抗原与牛血清白蛋白的偶联物。偶联可以按照常规的半抗原与蛋白载体化学偶联的方法进行。在又一方面，本专利技术提供了靶向半抗原的抗体，其靶向本专利技术第二方面的半抗原。抗体优选是单克隆抗体(单抗)。抗体的制备可以通过常规的免疫动物的方法来制备，其中免疫原可以是以上半抗原
‑
BSA。还在一个方面，本专利技术提供了可视时间分辨荧光微球标记的靶向半抗原的抗体，其为靶向本专利技术第二方面的半抗原的抗体与可视时间分辨荧光微球的偶联物。偶联可以按照可视时间分辨荧光微球厂商提供的化学偶联的方法进行。
[0010]在第三方面，本专利技术提供了HCV半抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。本专利技术第三方面的半抗原及靶向它的抗体不但能用于有效检测HCV核心抗原，而且与靶向本专利技术第二方面的半抗原的抗体之间没有可检测的交叉反应性，且不影响靶向本专利技术第二方面的半抗原的抗体对HCV核心抗原的结合。在另一方面，本专利技术提供了半抗原
‑
BSA，其为本专利技术第三方面的半抗原与牛血清白蛋白的偶联物。偶联可以按照常规的半抗原与蛋白载体化学偶联的方法进行。在又一方面，本专利技术提供了靶向半抗原的抗体，其靶向本专利技术第三方面的半抗原。抗体优选是单克隆抗体(单抗)。抗体的制备可以通过常规的免疫动物的方法来制备，其中免疫原可以是以上半抗原
‑
BSA。还在一个方面，本专利技术提供了可视时间分辨荧光微球标记的靶向半抗原的抗体，其为靶向本专利技术第三方面的半抗原的抗体与可视时间分辨荧光微球的偶联物。偶联可以按照可视时间分辨荧光微球厂商提供的化学偶联的方法进行。
[0011]在第四方面，本专利技术提供了HCV抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。该抗原与天然人体产生的针对诸多表位的抗体能高效结合，因而能高效用于HCV抗体检测。在另一方面，本专利技术提供了可视时间分辨荧光微球标记的抗原，其为本专利技术第四方面的抗原与可视时间分辨荧光微球的偶联物。偶联可以按照可视时间分辨荧光微球厂商提供的化学偶联的方法进行。
[0012]在第五方面，本专利技术提供了用于荧光和/或肉眼检测HCV核心抗原的试纸条，其依次连接有样品垫、玻璃纤维膜、含检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，玻璃纤维膜包含可视时间分辨荧光微球标记的靶向本专利技术第三或第二方面的半抗原的抗体和可
视时间分辨荧光微球标记的质控肽
‑
BSA，检测区包含靶向本专利技术第二或第三方面的半抗原的抗体，质控区包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于HCV检测的质控肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.HCV半抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.HCV半抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。4.HCV抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。5.用于荧光和/或肉眼检测HCV核心抗原的试纸条，其依次连接有样品垫、玻璃纤维膜、含检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，玻璃纤维膜包含可视时间分辨荧光微球标记的靶向权利要求3或2所述半抗原的抗体和可视时间分辨荧光微球标记的质控肽
‑
BSA，检测区包含靶向权利要求2或3所述半抗原的抗体，质控区包含靶向质控肽的抗体，其中，质控肽是权利要求1所述的质控肽，当靶向权利要求3或2所述半抗原的抗体是靶向权利要求3所述半抗原的抗体时，靶向权利要求2或3所述半抗原的抗体是靶向权利要求2所述半抗原的抗体；当靶向权利要求3或2所述半抗原的抗体是靶向权利要求2所述半抗原的抗体时，靶向权利要求2或3所述半抗原的抗体是靶向权利要求3所述半抗原的抗体。6.权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫，王雪，李晓，李鹏昆，杨晓娟，尹立龙，郭兰英，李振勇，
申请(专利权)人：苏州华益美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：