抗利妥昔单抗嵌合抗原受体及其用途制造技术

本文提供了编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，其包含特异性结合到CD19并且对利妥昔单抗结合具有抗性的CD19抗原结合结构域；以及包含这些CD19特异性CAR的免疫细胞，例如CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗利妥昔单抗嵌合抗原受体及其用途
[0001]相关申请交叉引用
[0002]本申请要求2019年4月26日提交的美国临时申请第62/839,455号；和2020年4月3日提交的美国临时申请第63/005,041号的优先权，所述美国临时申请的内容以全文引用的方式并入本文中。


[0003]本公开涉及嵌合抗原受体(CAR)，其包含与CD19结合的抗原结合分子、编码其的多核苷酸，以及使用其治疗患者的癌症的方法。
[0004]序列表
[0005]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交且以全文引用的方式并入本文。2020年4月21日创建的所述ASCII拷贝命名为AT
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028_03WO_SL.txt并且大小为81,460字节。

技术介绍

[0006]显示经基因修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的免疫细胞的过继转移有希望作为治疗癌症的新型方法(参见例如，Brenner等人,《免疫学新见(Current Opinion in Immunology)》,22(2):251
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257(2010)；Rosenberg等人,《自然综述：癌症(Nature Reviews Cancer)》,8(4):299
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308(2008))。免疫细胞可经基因修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，其为由CD19抗原识别部分和T细胞活化结构域构成的融合蛋白(参见例如，Eshhar等人，《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,90(2):720
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724(1993)；和Sadelain等人,《免疫学新见(Curr.Opin.Immunol)》,21(2):215
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223(2009))。将含有CAR的免疫细胞(例如CAR
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T细胞(CAR
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T))工程改造以在保持或增强其识别和杀死靶细胞的能力的同时赋予其抗原特异性。
[0007]需要对癌症，并且确切地说，涉及CD19的异常表达的恶性病的治疗。本文提供解决这一需要的方法和组合物。

技术实现思路

[0008]本文提供了嵌合抗原受体(CAR)，其包含与CD19特异性结合的CD19抗原结合结构域；编码这些CAR的多核苷酸；以及表达这些CD19特异性CAR的免疫细胞，例如CAR
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T细胞。本专利技术还提供了制造和使用这些CD19特异性CAR的方法，以及包含这些CD19特异性CAR的免疫细胞。
[0009]在一方面，本公开提供了一种编码包含与SEQ ID NO:9至少70％一致的抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的多肽的经分离多核苷酸，其中所述多肽不包含利妥昔单抗结合位点，并且其中所述多核苷酸包含能够在哺乳动物T细胞中表达抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的短EF1a启动子。
[0010]在一些实施例中，短EF1a启动子不包含SEQ ID NO:15的核酸序列内的内含子序
列。在一些实施例中，内含子包含SEQ ID NO:39的核酸序列。
[0011]在一些实施例中，启动子包含SEQ ID NO:16的核酸序列，
[0012]在一些实施例中，启动子为包含SEQ ID NO:15的核酸序列的全长EF1a启动子。
[0013]在一些实施例中，启动子包含SEQ ID NO:15的核酸序列，并且多核苷酸编码与SEQ ID NO:8
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14中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的多肽。
[0014]在一些实施例中，多肽还包含安全开关。
[0015]在一些实施例中，使用接头肽将安全开关连接到CD19 CAR。
[0016]在一些实施例中，使用T2A接头将安全开关连接到抗CD19 CAR。
[0017]在一些实施例中，安全开关包含抗体结合位点。
[0018]在一些实施例中，安全开关包含突变的CD20模拟表位。
[0019]在一些实施例中，多肽还包含CD8铰链/跨膜结构域。
[0020]在一些实施例中，多肽包含CD34表位。
[0021]在一些实施例中，CD34表位是QBEND
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10表位。
[0022]在一些实施例中，经分离多核苷酸包含与SEQ ID NO:1
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7中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的核酸序列。
[0023]在一些实施例中，分离的多核苷酸编码与SEQ ID NO:8
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14中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的多肽。
[0024]在另一方面，本公开提供了一种载体，其包含本文所述的分离的多核苷酸。
[0025]在一些实施例中，载体是逆转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。
[0026]在一个方面，本公开提供一种包含本文所述的经分离多核苷酸的工程改造免疫细胞。
[0027]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO:3至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的核酸序列。
[0028]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸与如表1所示的抗CD19 CAR v1.2、v1.3、v1.4、v1.5或v1.6慢病毒构建体至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致。
[0029]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸与如表1所示的抗CD19 CAR v1.2慢病毒构建体至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致。
[0030]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸编码与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的多肽，具有或不具有信号序列。
[0031]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸包含SEQ ID NO:3的核酸序列，由包含SEQ ID NO:16的核酸的EF1a短启动子驱动。
[0032]在一些实施例中，本公开提供了一种包含多核苷酸的工程改造免疫细胞，所述多核苷酸编码SEQ ID NO:9或10的多肽序列、具有或不具有信号序列、由包含SEQ ID NO:16的
核酸的EF1a短启动子驱动。在一些实施例中，启动子不包含EF1a基因的第一内含子。
[0033]在一些实施例中，工程改造免疫细胞不包含利妥昔单抗模拟表位。
[0034]在一些实施例中，工程改造本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码包含与SEQ ID NO:9至少70％一致的抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的多肽的经分离多核苷酸，其中所述多肽不包含利妥昔单抗(rituximab)结合位点，并且其中所述多核苷酸包含能够在哺乳动物T细胞中表达抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的短EF1a启动子。2.根据权利要求1所述的经分离多核苷酸，其中所述短EF1a启动子不包含由SEQ ID NO:15构成的内含子。3.根据权利要求2所述的经分离多核苷酸，其中所述内含子包含SEQ ID NO:39的核酸序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述启动子包含SEQ ID NO:16的核酸序列，5.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽还包含安全开关。6.根据权利要求5所述的经分离多核苷酸，其中使用接头肽将所述安全开关连接到所述CD19 CAR。7.根据权利要求5所述的经分离多核苷酸，其中使用T2A接头将所述安全开关连接到所述抗CD19 CAR。8.根据权利要求5至7中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述安全开关包含抗体结合位点。9.根据权利要求5至7中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述安全开关包含突变的CD20模拟表位。10.根据权利要求5至9中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽包含CD34表位。11.根据权利要求10所述的经分离多核苷酸，其中所述CD34表位是QBEND
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10表位。12.根据权利要求5至11中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽还包含CD8铰链/跨膜结构域。根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:1
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7中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的核酸序列。13.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其编码与SEQ ID NO:8
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14中的任一者至少约80％、85％...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：艾洛基治疗公司，
类型：发明
国别省市：