制备用于T细胞疗法的T细胞的方法技术

本文提供了制备用于T细胞疗法的T细胞的方法，所述方法包括使处于预定细胞密度的细胞群体与一定浓度的抗

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备用于T细胞疗法的T细胞的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月3日提交的美国临时申请号62/895,381的优先权权益，其内容特此通过引用整体并入。


[0003]本公开内容涉及制备用于T细胞疗法的一个或多个T细胞的方法。具体地，本公开内容涉及一种通过使具有预定细胞密度的细胞群体与一定浓度的抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触来增加细胞群体中至少一种T细胞亚型的百分比的方法，所述浓度经过选择以增加T细胞亚型的百分比。

技术介绍

[0004]人癌症本质上由正常细胞组成，这些细胞已经经历了遗传或表观遗传转化以变成异常癌细胞。在此过程中，癌细胞开始表达与由正常细胞表达的那些不同的蛋白和其它抗原。这些异常的肿瘤抗原可以被身体的先天免疫系统用来特异性地靶向和杀死癌细胞。但是，癌细胞采用各种机制来阻止免疫细胞(诸如T和B淋巴细胞)成功靶向癌细胞。
[0005]人T细胞疗法依赖于离体富集或修饰的人T细胞来靶向和杀死受试者(例如，患者)中的癌细胞。已经开发了各种技术来富集天然存在的T细胞的浓度，所述天然存在的T细胞能够靶向肿瘤抗原或遗传修饰T细胞以特异性靶向已知癌症抗原。这些疗法已被证明对肿瘤大小和患者存活具有有前途的效果。
[0006]混合T细胞群体的移植是可能阻碍T细胞疗法充分发挥其潜力的因素之一。在常规T细胞疗法中，收集供体T细胞，任选地对其进行修饰以靶向特定抗原(例如，肿瘤细胞)或针对抗肿瘤特征(例如，肿瘤浸润性淋巴细胞)进行选择，在体外扩增，并施用给有此需要的受试者。通常，得到的T细胞包含大部分成熟细胞的混合群体，其中许多是终末分化的。所以，这些细胞的预期体内持久性可能会受到限制，并且最初观察到的积极作用可能会随着时间的推移而消失，因为在没有移植的T细胞存在下肿瘤会反弹。因此，仍然需要增加用于T细胞疗法的T细胞的体内持久性。

技术实现思路

[0007]本公开内容提供了一种用于增加细胞群体中干记忆T细胞的百分比的方法，所述方法包括1)以一定体积比使一定体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质与一定体积的起始细胞群体接触，其中所述起始细胞群体是在至少约0.2x106个细胞/ml至约5.8x106个细胞/ml的细胞密度，且所述体积比是1体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.4体积或更少的起始细胞群体，和2)在培养基中培养所述细胞群体，其中得到的T细胞群体包含与第二T细胞群体相比增加的干记忆T细胞百分比，其中以一体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.5或更多体积的第二起始细胞群体的比例使相同细胞密度的第二起始细胞群体与抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触。
[0008]本公开内容提供了一种用于增加细胞群体中干记忆T细胞的百分比的方法，所述
方法包括1)以一定体积比使一定体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质与一定体积的起始细胞群体接触，其中所述起始细胞群体是在至少约0.2x106个细胞/ml至约5.8x106个细胞/ml的细胞密度，且所述体积比是1体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.4体积或更少的起始细胞群体，和2)在培养基中培养所述细胞群体，其中得到的T细胞群体包含与第二T细胞群体相比增加的干记忆T细胞百分比，其中以一体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.5或更多体积的第二起始细胞群体的比例使相同细胞密度的第二起始细胞群体与抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触，所述方法进一步包括在用抗
‑
CD3/CD28纳米基质培养所述起始细胞群体之前、过程中或之后转导和/或转染所述起始细胞群体。
[0009]本公开内容进一步提供了一种用于增加PBMC群体中的干记忆T细胞百分比的方法，所述方法包括1)以一定体积比使一定体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质与一定体积的起始PBMC群体接触，其中所述起始PBMC群体是在至少约0.50x106个细胞/ml至约2.00x106个细胞/ml的细胞密度，且所述体积比是1体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:5或10体积的起始细胞群体，和2)将所述PBMC群体在培养基中培养14至18天，其中得到的PBMC群体包含与第二PBMC群体相比增加的干记忆T细胞百分比，其中以一体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:20或40体积的第二起始PBMC群体的比例使相同细胞密度的第二起始PBMC群体与抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触并培养相同天数。
[0010]本公开内容进一步提供了一种用于增加纯化的T细胞群体中干记忆T细胞百分比的方法，所述方法包括1)以一定体积比使一定体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质与一定体积的起始纯化的T细胞群体接触，其中所述起始T细胞群体是在至少约0.80x106个细胞/ml至约1.60x106个细胞/ml的细胞密度，且所述体积比是1体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:10或15体积的起始细胞群体，和2)将纯化的T细胞群体在培养基中培养11至18天，其中得到的纯化的T细胞群体包含与第二纯化的T细胞群体相比增加的干记忆T细胞百分比，其中以一体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:20、25或50体积的第二起始T细胞群体的比例使相同细胞密度的第二起始纯化的T细胞群体与抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触并培养相同天数。
[0011]本公开内容进一步提供了治疗方法，其包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的得到的Tscm富集的T细胞群体。
附图说明
[0012]图1是条形图，其显示了对于用指定的Transact
TM
活化的细胞:细胞培养物体积比和相关对照，从第1天至第18天的总体实际细胞产量。
[0013]图2是条形图，其显示了对于用指定的Transact
TM
活化的细胞:细胞培养物体积比和相关对照，在G
‑
中培养细胞之前，从第1天至第8天的实际细胞产量。
[0014]图3是条形图，其显示了对于用指定的Transact
TM
活化的细胞:细胞培养物体积比和相关对照，从第8天至第18天在G
‑
中的实际细胞产量。
[0015]图4是描绘细胞扩增倍数与过程天数的关系的图，其显示了对于用指定的Transact
TM
活化的细胞:细胞培养物体积比和相关对照的总细胞扩增倍数。
[0016]图5的条形图和表描绘了对于用指定的Transact
TM
活化的细胞:细胞培养物体积比和相关对照，第0天至第1天、第1天至第4天、第4天至第6天、第6天至第8天、以及第8天至第18天的扩增倍数。
[0017]图6是条形图，其描绘了对于用指本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于增加细胞群体中干记忆T细胞的百分比的方法，所述方法包括：a)以一定体积比使一定体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质与一定体积的起始细胞群体接触，其中，i)所述起始细胞群体是在至少约0.2x 106个细胞/ml至约5.8x 106个细胞/ml的细胞密度；并且ii)所述体积比是1体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.4体积或更少的起始细胞群体；和b)在培养基中培养所述细胞群体，其中得到的T细胞群体包含与第二T细胞群体相比增加的干记忆T细胞百分比，其中以一体积的抗
‑
CD3/CD28纳米基质:17.5或更多体积的第二起始细胞群体的比例使相同细胞密度的第二起始细胞群体与抗
‑
CD3/CD28纳米基质接触。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述起始细胞群体得自外周血、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织、肿瘤、间质组织、T细胞系、诱导的多能干细胞或人工胸腺类器官(ATO)细胞培养系统。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述起始细胞群体选自T淋巴细胞、B淋巴细胞、辅助性T细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞、记忆T细胞、细胞毒性T细胞、天然杀伤T细胞、外周血淋巴细胞、肿瘤浸润性白细胞、外周血单核细胞、树突细胞、脐带血干细胞、多能干细胞和间质干细胞。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述起始细胞群体是外周血单核细胞(PBMC)、阳性选择的CD3、CD4或CD8 T细胞或阴性选择的CD3、CD4或CD8 T细胞或它们的组合。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述起始细胞群体是外周血单核细胞。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述起始细胞群体是包含CD4
+
和/或CD8
+
T细胞的纯化的T细胞群体。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中起始细胞密度是至少约0.50x 106至约6.00x 106、约0.56x 106至约5.72x 106、约0.80x 106至约4.0x 106、约1.00x 106至约3.0x 106、约2.00x 106至约3.5x 106或约2.50x 106至约3.5x 106。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞密度是约2.86x 106个细胞/ml。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中起始细胞密度是约1.50x 106个细胞/ml。10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中起始细胞密度是至少约0.28x 106至约2.86x 106、0.25x 106至约2.00x 106、约0.5x 106至约2.00x 106、约1.00x 106至约2.00x 106、约0.80x 106至约1.5x 106或约1.20x 106至约1.5x 106个细胞/ml。11.根据权利要求1至7或10中任一项所述的方法，其中所述细胞密度是约1.43x 106个细胞/ml。12.根据权利要求1至7或10中任一项所述的方法，其中起始细胞密度是约1.00x 106个细胞/ml。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述体积比是约1:5、1:6、1:7、1:8、
1:9、1:10、1:11、1.12、1:13、1:14、1:15、1:16或1:17的抗
‑
CD3/28纳米基质体积:起始细胞群体体积。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述起始细胞群体培养约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中得到的T细胞群体表达指示未分化的或未成熟的T细胞的一种或多种标志物。16.根据权利要求15所...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪亚瑾，张楚培，M，
申请(专利权)人：艾洛基治疗公司，
类型：发明
国别省市：