活性增强的BCMACAR-T细胞制造技术

本文提供了工程化免疫细胞，其包含组成型活性嵌合细胞因子受体(CACCR)和B细胞成熟抗原(BCMA)特异性嵌合抗原受体(CAR)。本文还提供了包含编码所述CACCR和BCMACAR的一种或多种核酸，例如双顺反子载体如病毒载体的工程化免疫细胞，以及从所述核酸表达CACCR和BCMACAR两者的工程化免疫细胞，例如工程化自体或同种异体T细胞。当存在于携带嵌合抗原受体(CAR)的工程化免疫细胞上时，所述CACCR允许增加免疫细胞的活化、增殖、持久性和/或效力。本文还提供了制备和使用本文所述的工程化免疫细胞的方法，诸如通过向患有病症的患者施用至少一个适当剂量的所述细胞来治疗疾病或所述病症的方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】活性增强的BCMA CAR
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T细胞
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年2月24日提交的美国临时申请号62/980,914；2020年5月6日提交的美国临时申请号63/020,713；2020年7月17日提交的美国临时申请号63/053,409；和2020年10月16日提交的美国临时申请号63/092,681的优先权权益，所有这些申请的内容特此通过引用整体并入。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并特此通过引用整体并入。于2021年2月2日创建的所述ASCII副本命名为AT
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034
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05WO_SL.txt且大小为312,069字节。


[0005]本公开涉及CAR
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T细胞，尤其是活性增强的BCMA特异性CAR
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T细胞，及其制备方法和用途。

技术介绍

[0006]经遗传修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的免疫细胞(例如T细胞)的过继转移正显示出作为治疗癌症的新方法的前景。例如，T细胞可以进行遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，该嵌合抗原受体是由抗原识别部分和T细胞活化结构域组成的融合蛋白。
[0007]一种将有用的CAR
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T细胞是识别B细胞成熟抗原(BCMA、CD269或TNFRSF17)的细胞。BCMA是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员并且参与促存活信号传导。BCMA是在含有a t(4；16)易位的人恶性T细胞淋巴瘤中鉴定的。在多发性骨髓瘤(MM)和一些其他浆细胞恶性肿瘤(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤，DLBCL)的所有阶段，BCMA在正常浆细胞和恶性浆细胞上高水平表达。BCMA也在大多数或所有骨髓瘤细胞上表达，而在非B细胞谱系中不存在表达。示例性的BCMA CAR在美国专利号10,294,304中公开并描述，该专利整体特此通过引用并入本文。BCMA CAR
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T细胞可用于治疗多种疾病，包括多发性骨髓瘤(MM)，一种以克隆浆细胞积聚为特征的恶性肿瘤。MM在很大程度上仍然是不可治愈的，且大多数受试者随着时间的推移会产生抗性。
[0008]T细胞增殖、细胞毒性效力和持久性是由信号转导途径驱动的。常规的CAR设计提供两种信号：CD3ζ活化(信号1)和共刺激(信号2，例如，通过4
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1BB、OX40和/或CD28表达)。在一些情况下，第三种信号(信号3)，细胞因子诱导的细胞因子受体信号传导(例如，用于免疫增强的细胞因子支持)可能是令人期望的。然而，提供信号3的方法已经受到显著的限制。
[0009]一般来说，提供细胞因子支持的一种方法包括将CAR
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T细胞疗法与重组细胞因子/细胞因子模拟物的全身性输注相结合，并工程化CAR
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T细胞以在细胞外分泌/表达细胞因子。由于细胞因子具有多效性作用并且还可以影响其他细胞类型的功能，通过CAR
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T细胞全身性施用或产生免疫增效细胞因子具有至少两个主要缺点：(i)这些方法可以在人类中引起全身性毒性，和(ii)在同种异体CAR
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T细胞治疗的情况下，这些方法可以引起旁观者宿主
免疫活化，旁观者宿主免疫活化可以加速同种异体CAR
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T细胞的排斥，从而损害治疗功效。提供细胞因子支持的另一种方法基于引入组成性活化的二聚化细胞因子受体IL
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7Ra，这限制了信号传导输出的性质(仅IL
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7信号传导)和量级。提供细胞因子支持的又一种方法涉及将信号3直接掺入到CAR分子中(Nat Med.2018年3月；24(3):352
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359)。这种方法的局限性在于信号3的强度取决于CAR活化的强度。在靶标(和CAR活化)不存在的情况下，信号3不会被转导。
[0010]需要通过以可调节的方式使细胞因子信号特异性靶向BCMA CAR
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T细胞来克服这些缺点的解决方案，从而提高安全性和治疗功效。

技术实现思路

[0011]本专利技术提供了含有组成型活性嵌合细胞因子受体(CACCR)的BCMA CAR免疫细胞，诸如BCMA CAR
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T细胞。当存在于具有BCMA嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(CAR
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I细胞，例如BCMA CAR
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T细胞)上时，此类CACCR允许增加免疫细胞的活化、增殖、持久性和/或效力。BCMA CAR
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T细胞活性的增强依赖于靶BCMA的存在。还提供了在BCMA CAR免疫细胞诸如BCMA CAR
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T细胞中制备和使用本文所述的CACCR的方法。
[0012]因此，在一个方面，本文提供了含有由两种单体组成的CACCR的BCMA CAR
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I细胞，例如BCMA CAR
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T细胞，每种单体包含：(a)跨膜结构域；(b)Janus激酶(JAK)结合结构域；和(c)募集结构域，其中所述单体组成型二聚化。
[0013]在一些实施例中，CACCR的跨膜结构域和/或JAK结合结构域源自TPOR/MPLR受体。在一些实施例中，该跨膜结构域和/或该JAK结合结构域源自SEQ ID NO:6的天然存在的TPOR/MPLR受体的氨基酸478
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582。在一些实施例中，该TPOR/MPLR受体包含选自H499L、S505N、W515K和G509N的一个或多个氨基酸取代。在一些实施例中，该TPOR/MPLR受体包含H499L、S505N和W515K取代，或S505N和W515K取代。
[0014]在一些实施例中，该募集结构域是STAT募集结构域。在一些实施例中，该募集结构域包括来自IL7Ra的STAT募集结构域，例如IL7Ra(316
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459)。在一些实施例中，该募集结构域包括来自IL2Rb的STAT募集结构域，例如IL2Rb(333
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551)、IL2Rb(393
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433,518
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551)、IL2Rb(339
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379,393
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433,518
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551)、IL2Rb(333
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551,Y381S,Y384S,Y387S)或IL2Rb(333
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551,Y364S,Y381S,Y384S,Y387S)。在一些实施例中，该募集结构域包括来自IL12Rb1的STAT募集结构域，例如IL12Rb1(622
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662)。在一些实施例中，该募集结构域包括来自IL12Rb2的STAT募集结构域，例如IL12Rb2(714
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862)或IL12Rb2(775
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825)。在一些实施例中，该募集结构域包括来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含抗BCMA嵌合抗原受体(CAR)和组成型活性嵌合细胞因子受体(CACCR)的工程化免疫细胞，其中所述CACCR包含两种单体，每种单体包含：跨膜结构域；Janus激酶(JAK)结合结构域；和募集结构域。2.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述跨膜结构域和JAK结合结构域存在于多肽(“TM/JAK多肽”)中，所述多肽包含与天然存在的TPOR/MPLR受体的氨基酸478
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582(SEQ ID NO:7的氨基酸序列)有至少约90％同一性的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的工程化免疫细胞，其中所述TM/JAK多肽包含所述天然存在的TPOR/MPLR受体的所述氨基酸478
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582序列(SEQ ID NO:7的氨基酸序列)的经修饰型式，其中所述经修饰型式在选自H499、S505和W515的氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代。4.如权利要求3所述的工程化免疫细胞，其中所述天然存在的TPOR/MPLR受体的所述氨基酸478
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582序列的所述经修饰型式包含选自由H499L、S505N和W515K组成的组的至少一个氨基酸取代。5.如权利要求1
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4中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述募集结构域包含与来自IL7Ra、IL2Rb、IL12Rb1、IL12Rb2或IL21R的STAT募集结构域有至少约90％同一性的氨基酸序列。6.如前述权利要求中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述募集结构域包含与来自IL2Rb的所述STAT募集结构域有至少约90％同一性的氨基酸序列。7.如前述权利要求中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述募集结构域包含与包含IL2Rb的氨基酸339
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379、393
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433和518
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551的氨基酸序列(SEQ ID NO:78)有至少约90％同一性的氨基酸序列，或与包含IL2Rb的氨基酸393
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433和518
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551的氨基酸序列(SEQ ID NO:77)有至少约90％同一性的氨基酸序列。8.如权利要求7所述的工程化免疫细胞，其中所述募集结构域包含IL2Rb的氨基酸339
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379、393
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433和518
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551(SEQ ID NO:78)或IL2Rb的氨基酸393
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433和518
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551(SEQ ID NO:77)。9.如权利要求4所述的工程化免疫细胞，其中所述TM/JAK多肽包含氨基酸取代S505N和W515K(SEQ ID NO:13)，并且进一步地，其中所述募集结构域包含IL2Rb的氨基酸393
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433和518
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551(SEQ ID NO:77)。10.如权利要求4所述的工程化免疫细胞，其中所述TM/JAK多肽包含氨基酸取代H499L、S505N和W515K(SEQ ID NO:12)，并且进一步地，其中所述募集结构域包含IL2Rb的氨基酸339
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379、393
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433和518
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551(SEQ ID NO:78)。11.如权利要求4所述的工程化免疫细胞，其中所述TM/JAK多肽包含氨基酸取代H499L、S505N和W515K，并且进一步地，其中所述募集结构域包含IL2Rb的氨基酸393
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433和518
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551(SEQ ID NO:77)。12.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述CACCR包含与SEQ ID NO:99、100、143、180、181、182、184、185或186的氨基酸序列有至少约90％同一性的氨基酸序列。13.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述CACCR包含SEQ ID NO:99、100、143、180、181、182、184、185或186的氨基酸序列。
14.如权利要求1
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13中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述BCMA CAR包含细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。15.如权利要求14所述的工程化免疫细胞，其中所述细胞外配体结合结构域特异性识别并结合人BCMA。16.如权利要求15所述的工程化免疫细胞，其中所述细胞外配体结合结构域包含单链可变片段(scFv)。17.如权利要求16所述的工程化免疫细胞，其中所述scFv包含通过柔性接头连接的重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。18.如权利要求17所述的工程化免疫细胞，其中所述VH区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列并且所述VL区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，或所述VH区包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列并且所述VL区包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列。19.如权利要求17或18所述的工程化免疫细胞，其中所述VH区包含：VHCDR1，其包含SEQ ID NO:146、147或148的氨基酸序列；VHCDR2，其包含SEQ ID NO:149或150的氨基酸序列；和VHCDR3，其包含SEQ ID NO:151的氨基酸序列；并且所述VL区包含：VLCDR1，其包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列；VLCDR2，其包含SEQ ID NO:153的氨基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO:154的氨基酸序列。20.如权利要求15
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18中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述VH区包含：VHCDR1，其包含SEQ ID NO:157、158或159的氨基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO:160或161的氨基酸序列；和VHCDR3，其包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列；并且所述VL区包含：VLCDR1，其包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列；VLCDR2，其包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列；和VLCDR3，其包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列。21.如权利要求14
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20中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述BCMA CAR的所述细胞内信号传导结构域包含CD3ζ(CD3zeta)信号传导结构域...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：艾洛基治疗公司，
类型：发明
国别省市：