HLA特异性嵌合抗原受体制造技术

包含编码FOXP3多肽的第一多核苷酸和编码嵌合抗原受体(CAR)的第二多核苷酸的载体，其中，CAR包含特异性结合人类白细胞抗原(HLA)的抗原识别域，其中，第一多核苷酸和第二多核苷酸可操作地连接至相同的启动子，并且其中，第一多核苷酸位于第二多核苷酸的上游。一多核苷酸位于第二多核苷酸的上游。一多核苷酸位于第二多核苷酸的上游。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HLA特异性嵌合抗原受体


[0001]本专利技术涉及编码FOXP3和HLA
‑
特异性嵌合抗原受体(CAR)的载体。本专利技术还涉及包含所述载体的工程化调节性T细胞及其治疗用途。

技术介绍

[0002]异体器官或组织的同种异体移植具有挽救生命的潜力，但可能导致严重的并发症。实体器官移植后，免疫介导的排斥要求使用长期的整体免疫抑制，限制了移植的同种异体移植物的寿命。(Perkey,E.和Maillard,I.,2018.Annual Review of Pathology:Mechanisms of Disease,13,第219
‑
245页).
[0003]例如，在基于他克莫司的免疫抑制方案中，15％
‑
25％的肝移植受者会发生急性细胞排斥(Choudhary,N.S.,等,2017.Journal of clinical和experimental hepatology,7(4),第358
‑
366页)。对于肾移植，急性免疫介导的排斥可高达30％
‑
40％(Roberts,D.M.,等,2012.Transplantation,94(8),第775
‑
783页.)。
[0004]虽然急性移植排斥反应通常对治疗反应良好，但慢性排斥可能是一个困难的情况。例如，很大一部分肝移植患者对增加的免疫抑制没有反应。慢性排斥通常会导致再移植或死亡(Choudhary,N.S.,等,2017.Journal of clinicaland experimental hepatology,7(4),第358
‑
366页)。
[0005]存在于移植器官中但不存在于患者体内的抗原是免疫介导的排斥的主要原因。特别地，存在于移植器官中但不存在于患者体内的人类白细胞抗原(HLA)是移植排斥的重要原因。HLA
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A、HLA
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B和HLA
‑
DR是主要的移植抗原，最近的临床数据表明HLA匹配也影响HSCT的临床结果。急性排斥主要是T细胞介导的反应的结果，而慢性排斥也可能是由于抗体介导的反应(Choo,S.Y.,2007.Yonsei medical journal,48(1),第11
‑
23页)。
[0006]HLA分型可以用于匹配移植患者和供体，并降低移植排斥的风险。例如，HLA匹配在肾脏和骨髓移植中具有很大的临床影响。然而，在心脏、肝脏和肺移植中，分配主要基于医疗紧迫性、供体的可用性和等待时间(Sheldon,S.和Poulton,K.,2006.In Transplantation immunology,第157
‑
174页,Humana Press；和Choo,S.Y.,2007.Yonsei medical journal,48(1),第11
‑
23页)。
[0007]此外，通过基于Sanger测序的分型(Sanger Sequencing
‑
Based Typing，SBT)进行的HLA匹配是目前的标准治疗，具有重要的局限性。SBT通常只对HLA基因区域的一个子集进行测序，排除了对这些区域之外潜在功能差异的识别。此外，SBT生成的DNA序列具有相位模糊性，这会影响多达53％的测试样本，从而提供大量潜在误差来源。HLA基因型模糊通常需要大量额外的测试以确保患者和潜在供体的准确匹配(Allen,E.S.,等,2018.Human immunology,79(12),第848
‑
854页)。
[0008]因此，仍然需要改进的方法来下调移植患者的免疫应答，特别是当移植器官中存在抗原(例如HLA)但患者体内不存在该抗原时。

技术实现思路

[0009]调节性T细胞(Treg)是一种调节免疫系统活性的T细胞。通常，Treg具有免疫抑制作用，下调对刺激的免疫应答。特别是，Treg抑制常规T细胞的活化和增殖，其中一些类型直接参与免疫应答(例如细胞毒性T细胞)。
[0010]Treg的抑制作用可以通过嵌合抗原受体(CAR)的表达来针对特定靶标，该受体识别靶细胞表面表达的抗原。本专利技术使用包含针对HLA抗原(例如HLA
‑
A2)的CAR的Treg来诱导受试者对移植物的耐受性，或治疗和/或预防移植物排斥。
[0011]然而，随着时间的推移，存在工程化Treg失去抑制免疫应答的能力的风险，这将降低任何Treg免疫疗法的功效和/或需要多次输注工程化Treg。还有一种风险是，工程化Treg(即表达CAR的Treg)可能会随着时间的推移而获得效应子表型。此外，如果，例如，T效应细胞存在于起始细胞群中，则有可能产生作为产生工程化Treg的副产物的工程化T效应细胞。
[0012]这是有问题的，因为与Treg的免疫抑制作用相反，工程化T效应细胞可能会增加或促进免疫介导的靶细胞损伤。
[0013]令人惊讶地发现，调节性T细胞(Treg)(其已经表达内源性FOXP3)中的外源性FOXP3表达可以增强它们的调节功能。
[0014]还令人惊讶地发现，在Treg(其已经表达内源性FOXP3)中外源性FOXP3的表达可以降低Treg获得效应子表型的风险，并降低在工程化Treg产生过程中生成工程化T效应细胞的风险。
[0015]此外，专利技术人已确定，在5
’
至3
’
方向上编码FOXP3的多核苷酸先于编码CAR的多核苷酸的构型，确保CAR表达仅在FOXP3已经表达时才会发生，而没有FOXP3时CAR的表达不会发生。在工程化Treg的当前情况下，这是一个特别的优势，因为它大大降低了工程化Treg获得效应子表型的风险和/或降低了与将CAR引入初始群体中存在的T效应细胞相关的风险。
[0016]因此，本专利技术提供了一种具有增强的功效和安全性的HLA
‑
特异性Treg。Treg可以用于诱导受试者对移植物的耐受性或用于治疗和/或预防移植排斥。
[0017]在第一方面，本专利技术提供了一种载体，所述载体包含编码FOXP3多肽的第一多核苷酸和编码嵌合抗原受体(CAR)的第二多核苷酸，其中CAR包含特异性结合人类白细胞抗原(HLA)的抗原识别域，其中，所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸可操作地连接至相同的启动子，并且其中，所述第一多核苷酸在所述第二多核苷酸的上游。
[0018]优选地，所述抗原识别域特异性结合HLA
‑
A2。
[0019]所述载体可以包含编码所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸之间的裂解位点和/或第一多核苷酸和第二多核苷酸之间的内部核糖体进入位点(IRES)的多核苷酸。适当地，所述载体可以在所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸之间包含自裂解序列，优选地其中，所述自裂解序列是编码2A自裂解肽的多核苷酸序列。所述2A自裂解肽可以选自由P2A肽、T2A肽、E2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:43或者分别由SEQ ID NO:41
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【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：圭尔医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：