用于工程化细胞的嵌合受体制造技术

本发明专利技术提供了一种核酸分子，其包含编码嵌合受体、特别是嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸序列，其中所述嵌合受体包含内结构域，该内结构域包含(i)STAT5结合基序，以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序和(ii)JAK3结合基序，其中(i)和(ii)通过接头或铰链连接。(i)和(ii)通过接头或铰链连接。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于工程化细胞的嵌合受体


[0001]本专利技术涉及工程化细胞，特别是工程化T细胞(例如，调节性T细胞)和此类细胞的治疗用途。具体而言，本专利技术涉及工程化细胞，特别是工程化T细胞(例如，调节性T细胞)，其对具有有限IL
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2可用性的微环境不敏感并且具有稳定的细胞(例如，Treg)表型。所述细胞被工程化以表达嵌合受体，并且本文提供编码嵌合受体的核酸，特别是编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸。

技术介绍

[0002]调节性T细胞(Treg)是具有抑制功能的免疫细胞，可控制细胞病变性免疫反应，对维持免疫耐受至关重要。Treg的抑制特性可用于治疗，例如改善和/或预防炎症性疾病、自身免疫性疾病和移植中的免疫介导的器官损伤。Treg免疫疗法通常涉及Treg的分离、培养和扩增，然后输注到患者体内。作为该过程的一部分，Treg可以与细胞因子、药物、其他细胞或抗原一起孵育，以提高它们的活力及功能和/或赋予它们增强的对特定抗原的反应性。这些相同的目标可以通过基因工程化Treg以靶向预定抗原(例如通过嵌合抗原受体(CAR))来实现。
[0003]生长因子白细胞介素2(IL
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2)对于Treg的稳态(生成、增殖、存活)以及它们的抑制功能和表型稳定性至关重要。活化的常规T细胞(Tcon)是体内IL
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2的主要来源。相比之下，Treg不能产生IL
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2，而是依赖于旁分泌获得由存在于微环境中的Tcon产生的IL
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2。
[0004]IL/>‑
2的可用性对在体外扩增并转移到患者内的Treg的治疗效果具有重要影响。这是由于以下原因：1)体外扩增方案通常需要高浓度的IL
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2，这使得Treg高度依赖该细胞因子；
[0005]2)由于免疫抑制药物的施用，患者的IL
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2浓度经常降低；以及3)在发炎的组织微环境中，对IL
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2的获得通常是有限的。肝移植是一个特别具有挑战性的适应症，因为已知发炎的肝脏中的IL
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2水平会降低，而钙调磷酸酶抑制剂的常规使用会进一步加剧这种情况，其大大降低了Tcon产生IL
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2的能力。低剂量外源性IL
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2的施用可恢复由钙调磷酸酶抑制剂诱导的Treg功能障碍，并促进Treg在肝脏中的积累。然而，低剂量Treg的治疗用途的一个问题是同时活化Tcon的风险，这会增强组织损伤。
[0006]WO 2017/218850描述了组成型表达STAT5的工程化Treg，以提供生产性IL
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2信号。然而，使用这种方法可以预见到几个挑战。组成型STAT5表达提供了工程化Treg可能发挥非特异性的强大的免疫抑制的风险，并且由于它们的高增殖率，它们可能会过度生长内源性Treg池并减少其TCR库，这可以导致自身免疫。最后，考虑到已知STAT5上的突变会促进T细胞幼淋巴细胞白血病，并且STAT5在许多癌症中被组成型活化，这些工程化Treg可能造成转化的风险。
[0007]调节性T细胞表达FOXP3，常规T细胞可以通过在这些细胞中表达FOXP3离体分化为调节性表型。FOXP3表达的缺失与调节性T细胞中抑制功能的缺失和可能恢复到效应表型有关。
[0008]因此，仍然需要产生对具有有限IL
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2可用性的微环境不太敏感的工程化Treg的方法，以及提高工程化Treg在已施用免疫抑制药物的受试者中增殖、存活和发挥作用的有效性的方法。

技术实现思路

[0009]本专利技术人开发了一种工程化调节性T细胞(Treg)，其能够在Treg与预定抗原结合时提供生产性IL
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2信号并且具有稳定的调节表型。因此，本专利技术的工程化Treg解决了与过继转移的Treg的高IL
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2依赖性相关的问题，而不需要施用外源性IL
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2，并通过以抗原特异性方式提供生产性IL
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2信号，同时保持表型和功能。特别地，生产性IL
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2信号可以通过在细胞内表达的嵌合受体的内结构域中包含特定基序(即STAT5结合基序、JAK1结合基序和/或JAK2结合基序以及JAK3结合基序)来提供。专利技术人已经特别确定，在嵌合受体(例如，CAR)的内结构域中的特定基序之间使用接头可以提供增强的IL
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2信号，这引起工程化细胞的存活增加。特别地，在包含STAT5和JAK1和/或JAK2基序的内结构域中的亚结构域或序列与包含JAK3结合基序的内结构域中的亚结构域或序列之间可以存在接头。
[0010]本专利技术进一步特别提供了通过外源性FOXP3和CAR的共表达而具有稳定表型和IL2信号传导能力的Treg细胞，所述CAR具有包含STAT5结合基序、JAK1结合基序和/或JAK2结合基序以及JAK3结合基序的内结构域。
[0011]因此，本专利技术提供了一种核酸分子，其包含编码嵌合受体(特别是嵌合抗原受体(CAR))的多核苷酸序列，其中所述嵌合受体(特别是所述CAR)包含内结构域，所述内结构域含有(i)STAT5结合基序，以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序，和(ii)JAK3结合基序，其中(i)和(ii)通过接头或铰链连接。
[0012]在另一方面，所述核酸分子可以额外地编码FOXP3，因此本专利技术提供了一种核酸，其包含(a)编码FOXP3的第一多核苷酸序列，以及(b)编码嵌合受体(特别是嵌合抗原受体(CAR))的第二多核苷酸序列，其中所述嵌合受体包含内结构域，所述内结构域含有(i)STAT5结合基序，以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序，和(ii)JAK3结合基序，其中(i)和(ii)通过接头或铰链连接。
[0013]尽管所述第一多核苷酸序列在核酸分子内可以位于相对于第二多核苷酸的5'或3'，特别地，第一多核苷酸序列相对于所述第二多核苷酸序列位于5'(即上游)。技术人员将理解，共表达序列可以适宜地位于所述核酸分子内的所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列之间。
[0014]在第二方面，本专利技术提供了一种载体，其包含本专利技术的核酸分子。
[0015]在第三方面，本专利技术提供了一种工程化细胞(特别是例如Treg的T细胞或NK细胞)，其包含本专利技术的核酸分子或本专利技术的载体。
[0016]在第四方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含本专利技术的工程化细胞(例如，Treg细胞)。
[0017]在第五方面，本专利技术提供了用于治疗的本专利技术的工程化细胞(例如，Treg细胞)或本专利技术的药物组合物。
[0018]在另一个方面，本专利技术提供了一种工程化细胞(例如，Treg细胞)，其用于诱导对移植物的耐受、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫疾病或过敏性疾病、促进组
织修复和/或组织再生或者改善或治疗炎症(例如，继发于代谢紊乱的慢性炎症)，其中所述工程化细胞(例如，Treg细胞)包含本专利技术的核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸分子，其包含编码嵌合受体的多核苷酸序列，其中所述嵌合受体包含内结构域，所述内结构域包含(i)STAT5结合基序以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序，和(ii)JAK3结合基序，其中(i)和(ii)通过接头或铰链连接。2.根据权利要求1所述的核酸，其中所述嵌合受体为嵌合抗原受体(CAR)。3.根据权利要求1或2所述的核酸，其中(i)所述内结构域包含两个或更多个STAT5结合基序，和/或所述一个或多个STAT5结合基序来自白介素受体(IL)受体内结构域。4.根据权利要求1至3任一项所述的核酸，其中所述一种或多种STAT5结合基序来自IL2Rβ、IL7Rα、IL
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3Rβ(CSF2RB)、IL
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9R、IL
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17Rβ、促红细胞生成素受体、血小板生成素受体、生长激素受体和催乳素受体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸分子，其中所述STAT5结合基序包含氨基酸基序YXXF/L(SEQ ID NO:8)；其中X是任意氨基酸。6.根据权利要求1至5中任一项所述的核酸分子，其中所述STAT5结合基序包含氨基酸基序YCTF(SEQ ID NO:9)、YFFF(SEQ ID NO:10)、YLSL(SEQ ID NO:11)和/或YLSLQ(SEQ ID NO:12)的一个或多个。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中所述STAT5结合基序包含氨基酸基序YLSLQ(SEQ ID NO:12)。8.根据权利要求7所述的核酸分子，其中所述内结构域包含第一STAT5结合基序和第二STAT5结合基序，所述第一STAT5结合基序包含氨基酸基序YLSLQ(SEQ ID NO:12)，所述第二STAT5结合基序包含氨基酸基序YCTF(SEQ ID NO:9)或YFFF(SEQ ID NO:10)。9.根据权利要求8所述的核酸分子，其中所述内结构域包含以下STAT5结合基序：YLSLQ(SEQ ID NO:12)、YCTF(SEQ ID NO:9)和YFFF(SEQ ID NO:10)。10.根据权利要求1至9中任一项所述的核酸分子，其中所述JAK结合基序是JAK1结合基序。11.根据权利要求10所述的核酸分子，其中所述JAK1结合基序来自白介素受体(IL)受体内结构域。12.根据权利要求1至11中任一项所述的核酸分子，其中所述JAK1结合基序包含如SEQ ID NO:13
‑
SEQ ID NO:19中任一条所示的氨基酸基序或与SEQ ID NO:13
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SEQ ID NO:19具有至少80％同一性的变体。13.根据权利要求12所述的核酸分子，其中所述JAK1结合基序是如SEQ ID NO:13所示的氨基酸基序；或与SEQ ID NO:13具有至少80％同一性的变体。14.根据权利要求1至13中任一项所述的核酸分子，其中所述嵌合受体内结构域包含如SEQ ID NO:1所示的IL2Rβ内结构域；或与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的变体。15.根据权利要求1至14中任一项所述的核酸分子，其中所述嵌合受体内结构域包含如SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24中任一条所示的截短的IL2Rβ内结构域；或SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的变体，所述变体与SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24具有至少80％序列同一性。16.根据权利要求1至15中任一项所述的核酸分子，其中所述JAK3结合基序包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26或与SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26具有至少80％序列同一性的变体。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的核酸分子，其中所述嵌合受体内结构域包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:154；或与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:154具有至少80％序列同一性的变体。18.根据权利要求1至17中任一项所述的核酸分子，其中所述JAK3结合基序位于嵌合受体内结构域中的STAT5结合基序以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序的N末端。19.根据权利要求1至18中任一项所述的核酸分子，其中所述接头或铰链包含SEQ ID NO:155
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SEQ ID NO:160中的任一条序列。20.根据权利要求1至19中任一项所述的核酸分子，其中所述接头或铰链为柔性接头或柔性铰链。21.根据权利要求1至20中任一项所述的核酸分子，其中所述内结构域包含以下中的任一项：(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:155和SEQ ID NO:23，(ii)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:158和SEQ ID NO:23，或(iii)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:23，或其与(i)、(ii)或(iii)具有至少80％序列同一性的变体。22.根据权利要求1至21中任一项所述的核酸分子，其中所述编码的嵌合受体不包含第一异二聚化结构域和第二异二聚化结构域。23.一种载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：圭尔医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：