本发明专利技术提供了使用表达载体来治疗软骨病症的组合物和方法，所述表达载体包含编码自杀基因和成纤维细胞生长因子18(FGF
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生长因子恢复
[0001]序列表
[0002]本申请包含已经以ASCII格式电子提交并且在此通过引用整体并入的序列表。在2020年11月19日创建的所述ASCII拷贝被命名为“51518
‑
003WO2_Sequence_Listing_11_19_20_ST25”并且大小为13,487字节。
[0003]相关申请
[0004]本申请要求于2019年11月21日提交的美国临时申请No.62/938,879的申请日的权益，其在此通过引用整体并入。
[0005]本专利技术涉及患者、例如人患者中组织病症并且特别是软骨病症的治疗性治疗的领域。
技术介绍
[0006]生长因子(例如，成纤维细胞生长因子18)是调节细胞增殖、迁移、存活、分化、组织沉积、转换和维持以及许多其他生物学功能的蛋白质。一般来说，组织中的生长因子水平随着年龄而下降。这种下降部分地是由于由许多遗传沉默机制之一介导的基因表达降低、细胞密度普遍降低(假设为其中生长因子水平下降的正反馈回路)、翻译效率和有效性降低、以及衰老细胞的比例增加。组织中的细胞密度与组织组成和物理化学特性有关。至少生长因子浓度的一些下降与疾病、组织萎缩和组织退化相关。虽然生长因子补充、替换或替代有缺陷或缺失的生长因子是广泛使用的恢复因骨关节炎而退化的软骨的方法，但仍然需要改进的治疗方法。
技术实现思路
[0007]本专利技术涉及用于促进负责组织产生和维持的细胞的增殖的表达载体及其使用方法，所述细胞例如软骨细胞、心肌细胞和滑膜细胞。本文中提供的组合物和方法可用于治疗或预防与疾病、组织萎缩和组织退化相关的软骨病症。在一些实施方案中，软骨病症是骨关节炎。
[0008]在第一方面中，本专利技术的特征在于重组表达载体，所述重组表达载体包含编码自杀基因、和成纤维细胞生长因子18(Fibroblast Growth Factor 18，FGF
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18)多肽或其功能片段的核酸。
[0009]在第一方面的一些实施方案中，所述表达载体是病毒载体。
[0010]在第一方面的一些实施方案中，所述表达载体包含非病毒颗粒以及编码(1)自杀基因和(2)FGF
‑
18多肽或其功能片段的核酸。
[0011]在第一方面的一些实施方案中，所述表达载体包含杂合病毒
‑
非病毒颗粒以及编码(1)自杀基因和(2)FGF
‑
18多肽或其功能片段的核酸。
[0012]在一些实施方案中，所述病毒载体选自腺相关病毒(adeno
‑
associated virus，
AAV)、腺病毒、细小病毒、冠状病毒、弹状病毒、副黏病毒、小核糖核酸病毒、甲病毒、疱疹病毒、痘病毒、慢病毒和逆转录病毒科病毒。
[0013]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述病毒载体是AAV。
[0014]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述AAV还包含衣壳。
[0015]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述衣壳包括天然存在的衣壳或经改造的衣壳(例如，包含经修饰序列的衣壳)。
[0016]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述经改造的衣壳与配体缀合(例如，用于细胞类型特异性或调节免疫原性)。
[0017]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述天然存在的衣壳是AAV1、AAV2、AAV2quad(Y
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F)、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、rh10、rh39、rh43、rh74、Anc80、Anc80L65、DJ/8、DJ/9、7m8、PHP.B、PHP.eB或PHP.S衣壳。
[0018]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述AAV是AAV2或AAV5。
[0019]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因包括单纯疱疹病毒
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1胸苷激酶(Herpes Simplex Virus
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1 Thymidine Kinase，HSV
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TK)基因、胱天蛋白酶9(Casp9)基因、胞嘧啶脱氨酶基因、RQR85多肽或截短的人EGFR多肽。
[0020]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是HSV
‑
TK基因。
[0021]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是Casp9基因。
[0022]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因编码与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性)的氨基酸序列。
[0023]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是指使表达所述表达载体的细胞发生程序性细胞死亡的基因。
[0024]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是指使表达所述表达载体的细胞终止该表达载体的转录或翻译的基因。
[0025]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是指使所述表达载体在表达该表达载体的细胞中的表达水平降低的基因。
[0026]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因是诱导型自杀基因。
[0027]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述诱导型自杀基因是雷帕霉素激活的Casp9。
[0028]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述自杀基因编码与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性)的氨基酸序列。
[0029]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述FGF
‑
18多肽编码与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性)的氨基酸序列。
[0030]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述表达载体还包含与编码FGF
‑
18或其
功能片段的核酸可操作地连接的转录调节子。
[0031]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述表达载体还包含非病毒颗粒。
[0032]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述转录调节子包含TATA盒、B识别元件识别元件、转录因子II B识别元件和下游启动子元件中的任意一种或更多种。
[0033]在前述方面中任一项的一些实施方案中，所述非病毒颗粒包含以下中的任意一种或更多种：脂质包膜、磷本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.重组表达载体，所述重组表达载体包含编码(1)自杀基因和(2)成纤维细胞生长因子18(FGF
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18)多肽或其功能片段的核酸。2.权利要求1所述的表达载体，其中所述表达载体是病毒载体。3.权利要求1所述的表达载体，其中所述表达载体包含非病毒颗粒。4.权利要求1所述的表达载体，其中所述表达载体包含杂合病毒
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非病毒颗粒。5.权利要求2所述的表达载体，其中所述病毒载体选自腺相关病毒(AAV)、腺病毒、细小病毒、冠状病毒、弹状病毒、副黏病毒、小核糖核酸病毒、甲病毒、疱疹病毒、痘病毒、慢病毒和逆转录病毒科病毒。6.权利要求5所述的表达载体，其中所述病毒载体是AAV。7.权利要求2所述的表达载体，其中所述病毒载体还包含衣壳。8.权利要求7所述的表达载体，其中所述衣壳包括天然存在的衣壳或经改造的衣壳。9.权利要求8所述的表达载体，其中所述经改造的衣壳与配体缀合。10.权利要求8所述的表达载体，其中所述天然存在的衣壳是AAV1、AAV2、AAV2quad(Y
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F)、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、rh10、rh39、rh43、rh74、Anc80、Anc80L65、DJ/8、DJ/9、7m8、PHP.B、PHP.eB或PHP.S衣壳。11.权利要求6所述的表达载体，其中所述AAV是AAV2或AAV5。12.权利要求1至11中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因包含单纯疱疹病毒
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1胸苷激酶(HSV
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TK)基因、胱天蛋白酶9(Casp9)基因、胞嘧啶脱氨酶基因、RQR85多肽或截短的人表皮生长因子受体多肽。13.权利要求12所述的表达载体，其中所述自杀基因是HSV
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TK基因。14.权利要求12所述的表达载体，其中所述自杀基因是Casp9基因。15.权利要求1至14中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因编码与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。16.权利要求1至15中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因是指使表达所述表达载体的细胞发生程序性细胞死亡的基因。17.权利要求1至15中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因是指使表达所述表达载体的细胞终止该表达载体的转录或翻译的基因。18.权利要求1至15中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因是指使所述表达载体在表达该表达载体的细胞中的表达水平降低的基因。19.权利要求1至18中任一项所述的表达载体，其中所述自杀基因是诱导型自杀基因。20.权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：弗朗切斯科，
申请(专利权)人：雷姆迪亚生物公司，
类型：发明
国别省市：
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