一种IgA肾病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种IgA肾病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。该标志物包括序列为SEQ IDNO.1～100所示的蛋白中的至少一种。本发明专利技术基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫大数据文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定IgA肾病外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有IgA肾病。本发明专利技术能够同时比较巨大数量的IgA肾病特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。提高了诊断效率。

【技术实现步骤摘要】
一种IgA肾病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种IgA肾病的外周血中的T细胞受体(TCR)标志物及其检测试剂盒和应用。

技术介绍

[0002]一)IgA肾病简介
[0003]IgA肾病又称Berger病，是临床上最常见的原发性肾小球疾病，其特征是肾小球系膜区出现IgA抗体或以IgA为主的免疫复合物沉积。IgA肾病的发病有明显的地域差别，在欧洲和亚洲占原发性肾小球疾病的15％～40％，而在我国，IgA肾病的发病率占原发性肾小球疾病的26％—34％，且近年呈现逐渐上升的趋势。
[0004]各年龄段均可能发生IgA肾病，其中以20～30岁男性青壮年最为多见。IgA肾病多为慢性病程，患者的早期症状较轻，但如不及时治疗，据统计多达50％的受累患者会缓慢进展为不同程度的肾衰竭，因此需要尽早诊断及时治疗。
[0005]二)病因和发病机理
[0006]IgA肾病的病因和发病机理尚在研究中，诸多证据表明它是一个多基因、多因素复杂性状疾病。病因可能源于家族遗传或自身免疫调节异常，也可能由其它疾病特别是感染性疾病和自身免疫性疾病引起，如HIV感染、病毒性肝炎、麻风病、过敏性紫癜、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、银屑病、血清阴性脊柱关节炎、肿瘤等等。
[0007]IgA肾病多由免疫性损伤所致，通过刺激机体产生过多的糖基化异常的IgA并诱发自身抗体形成免疫复合物、沉积于肾小球的系膜区，使系膜细胞增生、系膜基质增多、局灶性节段性增生或硬化，少数患者可有较多新月体的形成等，从而导致IgA肾病。
[0008]三)现有诊断方法
[0009]1、常见临床表现
[0010]多在上呼吸道感染1～3天后出现易反复发作的肉眼血尿，持续数小时至数天后可转为镜下血尿，可伴有腹痛，腰痛，肌肉痛或低热，部分患者在体检时发现尿异常，为无症状性蛋白尿和(或)镜下血尿，少数患者有持续性肉眼血尿和不同程度蛋白尿，可伴有水肿和高血压。然而，IgA肾病的临床表现，有可能与泌尿系统感染、急性肾小球肾炎、遗传性肾小球疾病等发生混淆，需要依赖医生经验加以区分，无法作为确诊依据。
[0011]2、实验室检查
[0012]1)血清免疫学检查
[0013]50％的病人血清IgA水平升高。37％～75％病人测到含有IgA的特异性循环免疫复合物。然而，也有很大比例的病人常规免疫学检查中血清IgA处于正常范围。
[0014]2)尿液检查
[0015]蛋白尿定量和分型对IgA肾病病情判断、估计预后很重要。蛋白尿<1g/24h者常为轻微及病灶性系膜增生为主。中～重度蛋白尿多为弥漫性系膜增生，常伴新月体及肾小球硬化。血尿：尿RBC形态呈多形性，提示血尿来源是肾小球源性。然而，肾病患者多伴有尿液
指标异常，尿液检查可以作为判断IgA肾病确诊患者病情的依据，却无法作为诊断依据。
[0016]3)肾功能检查
[0017]血肌酐上升到1.5mg/dl(132.6umol/L)多为病情进展。GFR<20ml/min时，病理改变属Ⅲ级以上。与尿液检查类似，肾功能检查可以作为判断IgA肾病确诊患者病情的依据，却无法作为诊断依据。
[0018]3、活检病理诊断
[0019]IgA肾病的确诊必须要有肾活检病理，需要免疫荧光或免疫组化的结果支持。其诊断特点是：光镜下常见弥漫性系膜增生或局灶节段增生性肾小球肾炎；免疫荧光可见系膜区IgA或以IgA为主的免疫复合物沉积，这是IgA肾病的诊断标志。然而，肾脏穿刺活检对病人痛苦大，且存在相当大漏诊、误诊几率。
[0020]综上所述，目前临床上亟需一种方便、准确且便利的针对IgA肾病的检验诊断方法。

技术实现思路

[0021]针对目前对于IgA肾病临床诊断的迫切需要，以及现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种利用IgA肾病人的外周血中特征性的TCR标志物来快速准确的判断待测人员是否已经发生IgA肾病特有的T细胞反应的检测标志物及其检测试剂盒和应用，能无创且准确快速的判断待测样本中是否有较高IgA肾病风险患者。
[0022]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0023]一种IgA肾病的外周血TCR标志物，该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种，具体序列见表1。
[0024]表1标志物序列
[0025][0026][0027][0028]进一步地，标志物的蛋白序列为SEQ ID NO.1～100所示的序列经取代、缺失和/或替换一个或多个氨基酸后，能实现相同功能的蛋白。
[0029]进一步地，标志物为外周血TCR抗原决定簇3(CDR3)的蛋白序列。
[0030]上述标志物在制备治疗IgA肾病的制剂中的应用。
[0031]进一步地，制剂中包括含有该标志物的T细胞受体基因序列，或能表达产生该标志物的T细胞受体的质粒、病毒载体或核酸片段。
[0032]一种用于IgA肾病检测的试剂盒，包括能与上述标志物发生特异性结合的抗体。
[0033]一种制剂，包括能与上述标志物发生特异性结合的抗体；所述制剂可用于对IgA肾病进行诊断、预测、检测或筛查。
[0034]一种检测IgA肾病的蛋白质芯片，该蛋白质芯片包括基片和点样在基片上特异性抗体，该特异性抗体为能与上述标志物发生特异性结合的抗体。
[0035]本专利技术的原理为：人体内的B淋巴细胞和T淋巴细胞是获得性免疫系统中重要的两类细胞。B细胞通过细胞表面的B细胞受体(BCR)识别抗原，后期BCR在B细胞分化成浆细胞时，表达成抗体，分泌到细胞外。T细胞通过细胞表面的T细胞受体(TCR)识别抗原。BCR和TCR的多样性是建立获得性免疫系统的基础。BCR多样性的理论值是10
18
，TCR多样性的理论值是10
14
。BCR与TCR序列中，抗原决定簇3(CDR3)是决定其抗原特异性最重要的部分，因此CDR3的序列被认为可以代表BCR、TCR序列的特性。
[0036]在各种疾病中，随着不同的抗原刺激，BCR和TCR的多样性或者表达水平都会发生改变。因此，利用BCR或者TCR高通量测序结果可以追踪疾病的发生、发展。人体内细胞中，衰老蛋白质降解后，其片段会被运输到细胞表面，通过组织相容性抗原II(MCHII)呈递给免疫系统中的T细胞。正常细胞呈递的抗原片段，由于免疫耐受的关系，不会引起免疫反应。一旦当正常细胞出现病变后，突变的基因表达的异常蛋白，其片段被呈递到细胞表面后，就会引起人体免疫系统产生针对性的免疫反应。因此，分析BCR或TCR的变化，能够检测出肿瘤或其它疾病的发生和发展。
[0037]针对IgA肾病，病人体内产生了疾病特有的T细胞免疫反应。我们就可以利用这些IgA肾病病人特有免疫反应特征来判断疾病。
[0038]本专利技术的有益效果为：
[0039本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IgA肾病的外周血TCR标志物，其特征在于，所述标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示TCR蛋白序列中的至少一种。2.根据权利要求1所述的IgA肾病的外周血TCR标志物，其特征在于，所述标志物的蛋白序列为SEQ ID NO.1～100所示的序列经取代、缺失和/或替换一个或多个氨基酸后，能实现相同功能的蛋白。3.权利要求1所述的TCR标志物在制备治疗IgA肾病的制剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制剂包括含有该标志物的T细胞受体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志新，李贵森，杨鑫，卓越，
申请(专利权)人：成都益安博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：